人克拉拉细胞蛋白试剂盒

更新时间：2025-04-09

简要描述：

人克拉拉细胞蛋白试剂盒，适用多样标本，采用双抗夹心 ELISA 法。操作分多步，有诸多注意事项，助力精准检测人样本中该蛋白含量。

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人克拉拉细胞蛋白试剂盒介绍

人克拉拉细胞蛋白试剂盒，常以 ELISA 试剂盒形式呈现，在科研领域发挥着关键作用，用于精准定量检测人血清、血浆及相关液体样本中克拉拉细胞蛋白（CC16）的含量。其检测适用范围广泛，血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型均可作为检测对象，同时可检测的动物类型涵盖人、猴、大鼠、小鼠等多个物种。

一、检测原理

该试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。首先，将人克拉拉细胞蛋白（CC16）单克隆抗体预先包被在透明酶标包被板上。实验时，把标准品、待测样本加入酶标包被板中，经过足够时间的温育，样本中的 CC16 会与包被抗体特异性结合，随后通过洗涤操作除去未结合的成分。接着加入酶标工作液，再次温育，让酶标工作液与已结合的 CC16 充分反应，之后又一次洗涤去除未结合的酶标工作液。此时，依次加入底物 A 和 B，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化下，底物（TMB）转化为蓝色产物，加入酸后，产物颜色变成黄色。颜色的深浅程度与样品中人克拉拉细胞蛋白（CC16）的浓度呈正相关关系。通过在 450nm 波长下测定各孔的 OD 值，依据标准品和样品的 OD 值，即可计算出样本中人克拉拉细胞蛋白（CC16）的含量。

二、操作步骤

准备工作：从冰箱取出试剂盒后，需在室温下复温平衡 30 分钟，同时用蒸馏水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

加样：取适量酶标包被板固定在框架上，设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔并做好记录。标准品孔加入 50μL 标准品；待测样本孔先加 10μL 待测样本，再加 40μL 样本xi释液（样本稀释 5 倍）；空白对照孔则不加样。

温育与洗板：37℃温育 30 分钟后进行洗板，弃去孔内液体，在吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1 分钟后甩去洗涤液，重复洗板 4 次。

后续操作：每孔加入 50μL 酶标工作液（空白对照孔不加），37℃温育 30 分钟后再次洗板。接着每孔先加 50μL 显色剂 A 液，再加 50μL 显色剂 B 液，混匀后 37℃避光显色 15 分钟，之后每孔加 50μL 终止液终止反应，颜色会由蓝色立即转变为黄色。

测定与计算：以空白孔调零，在终止反应后 15 分钟内，使用 450nm 波长测量各孔的吸光值（OD 值），根据标准品浓度及对应 OD 值算出标准曲线的直线回归方程，再依据样品 OD 值在方程上算出对应浓度，实际浓度为测定浓度乘以稀释倍数。

三、注意事项

试剂盒从冷藏环境取出后，必须进行室温平衡，以确保实验条件的一致性。

标本采集后应尽早提取并尽快进行实验，防止样本变质影响检测结果。

酶标包被板开封后若未用完，需立即装入密封袋并加干燥剂保存，以免受到环境因素干扰。

操作过程中要牢记样本已稀释 5 倍，计算结果时需乘以 5 才是样本实际浓度。

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