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更新时间:2025-04-09
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样本准备:血清样本采集后,需在 1000×g 的条件下离心 10 分钟,小心分离出血清;血浆样本同样按此离心条件处理;细胞上清液则需以 1000×g 离心 10 分钟,去除其中的颗粒和聚合物。若样本不立即使用,应分成小份,在 - 70℃环境下保存,防止反复冻融,使用前需在室温下充分解冻并确保均匀 。
试剂准备:从冰箱取出试剂盒后,需将所有试剂在室温下平衡至稳定状态,并充分混匀 。同时,依据实验所需检测的样本数量,确定酶标板的使用条数,标准品孔和空白孔建议设置复孔,以提高检测准确性 。
加样:在酶标板上精确设置标准品孔、空白孔与待测样本孔。向标准品孔中加入 50μL 已稀释好的不同浓度标准品;待测样本孔加入 50μL 处理好的样本;空白孔则不加任何试剂 。加样完成后,立即向各孔中加入 50μL 生wu素标记的抗体,随后盖上膜板,轻轻振荡使其充分混匀,在 37℃环境下温育 45 分钟 。
温育与洗涤:温育结束后,甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒后甩去洗涤液,并用吸水纸拍干,此洗涤操作需重复 4 次。若使用洗板机,洗涤次数应增加一次 。
后续反应与检测:每孔加入 100μL 亲和链酶素 - HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30 分钟。再次重复上述洗涤步骤 。接着,每孔加入底物 A、B 各 50μL,轻轻振荡混匀,37℃温育 5 分钟 。之后,迅速向每孔加入 50μL 终止液,加入终止液后应立即使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值 。依据标准曲线,计算出样本中 sTfR1 的浓度,若样本进行过稀释,还需乘以相应的稀释倍数得到实际浓度 。
试剂盒中的所有试剂在使用前必须充分平衡至室温,避免因温度差异影响检测结果的准确性 。
样本采集、处理过程务必严格遵循规范操作,防止样本受到污染或发生溶血、脂血等情况,以免干扰检测结果 。
洗涤过程至关重要,既要确保充分去除杂质,又要避免过度洗涤导致已结合的物质脱落 。
加样操作要精准、迅速,尽量缩短各孔之间的加样时间间隔,保证实验条件的一致性 。
实验完成后,应尽快读取 OD 值,避免因时间过长导致结果出现偏差 。
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