PA12小鼠胚胎成纤维细胞

产品简介：

PA12小鼠胚胎成纤维细胞源自小鼠胚胎，贴壁生长呈梭形，具稳定增殖性，可支持胚胎干细胞培养、参与微环境研究，适用于细胞生物学及发育相关实验。

产品型号：

更新时间：2025-10-28

厂商性质：代理商

访问量：1629

服务热线

021-34556080

立即咨询

产品分类

PRODUCT CLASSIFICATION

细胞/细菌培养试剂

血清细胞株

产品介绍

PA12小鼠胚胎成纤维细胞

PA12小鼠胚胎成纤维细胞是源自小鼠胚胎组织的贴壁生长细胞系，具备胚胎成纤维细胞的典型特征 —— 稳定的增殖能力、梭形形态及分泌细胞因子的功能。该细胞系不仅是细胞生物学基础研究的常用工具，还可通过分泌生长因子、构建细胞外基质，为胚胎干细胞（ESCs）或诱导多能干细胞（iPSCs）提供适宜的生长微环境，同时在肿瘤微环境模拟、组织修复机制研究中发挥重要作用，广泛应用于发育生物学、再生医学及肿瘤学领域。

一、核心生物学特性

（一）来源与细胞本质

PA12 细胞源自 C57BL/6 小鼠的 12-14 天胚胎，经体外分离胚胎组织、消化分散细胞后，通过差速贴壁法筛选纯化获得。作为胚胎来源的成纤维细胞，其保留了胚胎期细胞的增殖活性与可塑性，核型稳定（二倍体），无致瘤性（软琼脂克隆形成率 < 1%），可长期传代培养且维持成纤维细胞的核心功能，区别于肿瘤细胞或其他分化成熟的成纤维细胞。

（二）形态与增殖特征

体外培养时，PA12 细胞呈典型长梭形或纺锤形，贴壁生长时呈放射状或漩涡状排列，细胞间连接紧密，单层生长无明显堆积（汇合度达 100% 时仅轻微重叠）；胞质透明，含少量纤细的纤维状结构（肌动蛋白丝），细胞核呈椭圆形，位于细胞中央，核仁小而清晰（1 个），染色质分布均匀，符合正常成纤维细胞的形态特征。

增殖能力稳定，倍增时间约 24-30 小时，传代 40 代以内可维持稳定的增殖速率；平板克隆形成率约 8%-15%，低于肿瘤细胞但高于成年小鼠成纤维细胞（<5%），反映其胚胎来源细胞的高增殖潜力，便于大规模培养以满足实验需求。

（三）分子表型与功能特征

PA12 细胞的分子与功能特征高度契合胚胎成纤维细胞的定位：

特异性标志物：表达成纤维细胞标志性分子，如波形蛋白（Vimentin，间质细胞特异性蛋白）、成纤维细胞生长因子受体 1（FGFR1），不表达上皮细胞标志物（如角蛋白 CK18）或干细胞标志物（如 Oct4），可通过免疫荧光或 Western blot 验证细胞纯度；

细胞因子分泌：持续分泌多种生长因子与细胞外基质成分，如成纤维细胞生长因子（FGF-2）、转化生长因子 -β1（TGF-β1）、胶原蛋白 Ⅰ/Ⅲ 型，这些物质可促进干细胞增殖与自我更新，同时构建类似体内的间质微环境；

功能可塑性：在特定诱导条件下（如添加 TGF-β1），可向肌成纤维细胞分化（表达 α- 平滑肌肌动蛋白 α-SMA），模拟组织损伤修复过程中的细胞表型转换，为修复机制研究提供模型。

二、体外培养与操作流程

（一）基础培养体系

PA12 细胞对培养条件要求温和，常规采用DMEM 高糖培养基（含 4.5g/L 葡萄糖、丙酮酸钠），添加 10% 胎牛血清（需选择低内毒素、批次稳定的血清，避免影响细胞因子分泌）及 1% 抗菌试剂（预防细菌污染）。

培养环境需严格控制：温度 37℃、5% CO₂、湿度 95%，pH 维持在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg。温度过高（>39℃）会导致细胞活性下降，CO₂浓度不足（<4%）易引发培养基碱化（颜色呈紫色），需每日观察培养基颜色（桃红色为最佳状态），及时更换变质培养基。

（二）传代与纯化操作

传代时机：当细胞汇合度达 80%-90% 时需及时传代（避免超过 95%，以防细胞接触抑制导致增殖停滞），传代比例 1:3-1:6（根据实验需求调整，需大量细胞时可按 1:6 传代，需维持高活性时按 1:3 传代）。

传代步骤：

弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次，彻di去除残留血清与代谢废物；

加入含 0.02% EDTA 的细胞解离液，37℃孵育 1-2 分钟，显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大（细胞变圆但未wan全脱壁）时立即终止；

加入 5 倍体积wan全培养基中和解离液，用移液器轻柔吹打细胞层（从培养瓶侧壁向中心螺旋式吹打，避免剧烈冲击损伤细胞），制成单细胞悬液；

按预设比例将细胞悬液接种至新培养瓶，补充新鲜培养基，置于培养箱中培养，24 小时内细胞可wan全贴壁并恢复梭形形态。

纯化操作：若培养过程中混入少量上皮样杂细胞，可采用差速贴壁法纯化 —— 将细胞悬液接种至新培养瓶，1 小时后收集未贴壁细胞（PA12 细胞贴壁较快，杂细胞贴壁慢），重新接种培养，重复 2-3 次即可获得高纯度细胞。

（三）冻存与复苏要点

冻存细胞需选择对数生长期、活力≥95% 的细胞（台盼蓝染色检测），确保复苏后细胞活性稳定：

冻存液配置：含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清、70% DMEM 高糖培养基，现配现用（DMSO 需缓慢加入，避免温度骤降损伤细胞）；

冻存步骤：离心收集细胞（1000×g，5 分钟），弃去上清，用冻存液重悬细胞，调整浓度为 1×10⁶-3×10⁶ cells/mL，分装至冻存管；采用梯度降温法冻存：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置过夜→转入液氮长期保存（液氮温度需维持在 - 196℃以下）；

复苏步骤：从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴中快速解冻（1 分钟内wan全融化，避免 DMSO 长时间接触细胞产生毒性）；将解冻后的细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的wan全培养基中，轻轻混匀，离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种至培养瓶。

复苏存活率通常可达 85% 以上，复苏后 24 小时更换一次培养基，去除死亡细胞与残留 DMSO，培养 48-72 小时后细胞即可恢复正常增殖与功能。

三、主要研究应用场景

（一）干细胞培养支持

PA12 细胞因能分泌干细胞维持所需的生长因子，是胚胎干细胞（ESCs）或诱导多能干细胞（iPSCs）体外培养的理想饲养层细胞：

饲养层制备：将 PA12 细胞用丝裂mei素 C（终浓度 10μg/mL）处理 2-3 小时（抑制细胞增殖但保留分泌功能），或通过 γ 射线照射（剂量 30-40Gy），铺板后作为饲养层；将 ESCs/iPSCs 接种至饲养层上，可维持其未分化状态（表达 Oct4、Nanog），且避免使用外源重组生长因子，模拟体内干细胞微环境；

无饲养层体系优化：收集 PA12 细胞的培养上清（条件培养基），与干细胞基础培养基按 1:1 混合，可替代饲养层支持干细胞培养，减少细胞间直接接触带来的干扰，便于研究干细胞与微环境的信号交流。

（二）肿瘤微环境模拟

在肿瘤研究中，PA12 细胞可作为间质细胞，构建肿瘤 - 间质共培养模型，模拟体内肿瘤微环境：

共培养实验：将 PA12 细胞与肿瘤细胞（如乳腺癌细胞 MCF-7、卵巢癌细胞 SKOV3）按一定比例（通常为 1:1 或 2:1）混合培养，或采用 Transwell 共培养体系（上下室分别接种肿瘤细胞与 PA12 细胞），研究 PA12 细胞分泌的细胞因子（如 TGF-β1、FGF-2）对肿瘤细胞增殖、侵袭的影响 —— 如检测共培养后肿瘤细胞的 Transwell 侵袭能力变化，或 MMPs（基质金属蛋白酶）表达水平，解析间质细胞对肿瘤恶性进展的调控作用；

3D 肿瘤模型构建：在 Matrigel 基质中混合 PA12 细胞与肿瘤细胞，培养形成 3D 类肿瘤球，该模型更接近体内肿瘤的结构与微环境，可用于研究药物在间质存在下的渗透效率与抗肿瘤效果，避免传统 2D 培养的局限性。

（三）组织修复与分化机制研究

PA12 细胞的表型可塑性使其成为组织损伤修复与细胞分化研究的重要模型：

肌成纤维细胞分化：向 PA12 细胞培养基中添加 TGF-β1（终浓度 5ng/mL），培养 3-5 天后，通过免疫荧光检测 α-SMA 的表达（肌成纤维细胞标志物），观察细胞从梭形向收缩型肌成纤维细胞的转换过程，研究组织纤维化或伤口愈合中细胞表型转换的分子机制（如 Smad 信号通路激活）；

细胞外基质形成：PA12 细胞长期培养（7-10 天）后，可在培养皿表面形成富含胶原蛋白的细胞外基质，通过天狼星红染色观察胶原纤维的排列，研究基质成分对细胞黏附、迁移的影响，或评估药物对基质降解的调控作用（如 MMPs 抑制剂的效果）。

（四）细胞生物学基础研究

PA12 细胞因培养简便、功能稳定，常用于细胞生物学的基础实验：

细胞周期与增殖研究：通过 EdU 掺入实验（检测 S 期细胞）或流式细胞术分析细胞周期分布，研究不同处理（如药物、营养缺乏）对成纤维细胞增殖的影响；

细胞迁移实验：采用划痕愈合实验（在细胞单层上制造划痕，观察划痕愈合速率）或 Transwell 迁移实验，研究细胞因子（如 FGF-2）、药物对 PA12 细胞迁移的调控，为伤口愈合机制研究提供数据；

信号通路验证：利用 PA12 细胞验证间质细胞相关信号通路（如 FGFR-MAPK 通路），通过 Western blot 检测通路关键蛋白（如 p-ERK）的表达，或通过基因干扰（siRNA 敲低 FGFR1）研究通路功能，为信号通路机制研究提供细胞模型。

四、实验应用注意事项

细胞状态监控：长期传代（超过 40 代）可能导致 PA12 细胞出现老化（表现为细胞体积增大、增殖减慢、β- 半乳糖苷酶染色阳性率升高），需定期冻存早期传代细胞（如第 5-10 代），实验优先使用传代 20 代以内的细胞，确保功能稳定；若发现细胞形态异常（如出现上皮样细胞增多、胞质空泡），需及时更换细胞或排查污染。