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更新时间:2025-11-10
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IR983F大鼠骨髓瘤细胞
一、细胞基本生物学特性
IR983F大鼠骨髓瘤细胞源自大鼠骨髓瘤组织,是研究大鼠骨髓瘤发病机制、药物研发的重要体外模型,同时因缺乏次黄piao呤 - 鸟piao呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT)或胸腺嘧啶激酶(TK),成为制备大鼠单克隆抗体的经典融合亲本细胞,在肿瘤学与免疫学研究领域应用广泛。
形态上,该细胞呈圆形或椭圆形,胞体中等大小,直径约 10-15μm,胞质透明或呈淡蓝色(瑞氏染色),胞质内偶见少量细小颗粒;细胞核大而圆,核仁 1-2 个且清晰可见,核质比高,体外培养以悬浮生长为主,无贴壁能力,细胞密度较高时易形成松散细胞团,无接触抑制特性,可在适宜条件下持续增殖。生长特性方面,其增殖活性较强,倍增时间约 24-30 小时,常规培养条件下可稳定传代 60 代以上,且能长期维持骨髓瘤细胞的恶性特征 —— 具备体外克隆形成能力,在软琼脂培养基中可形成明显克隆集落,同时不分泌自身抗体,避免对杂交瘤细胞分泌的特异性抗体产生干扰,为单克隆抗体制备提供理想融合伙伴。
分子表型上,该细胞高表达骨髓瘤相关标志物,如 CD38、CD138( Syndecan-1),同时表达大鼠白细胞共同抗原 CD45;因 HGPRT 或 TK 基因缺陷,细胞无法利用次黄piao呤和胸腺嘧啶合成核酸,在含次黄piao呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶的 HAT 培养基中无法存活,这一特性是筛选杂交瘤细胞的关键依据;染色体核型呈亚二倍体,存在特定染色体数目异常(如染色体易位、缺失),与大鼠骨髓瘤细胞的典型分子特征高度吻合,为骨髓瘤机制研究与抗体制备提供可靠实验基础。
二、体外培养关键条件
IR983F 大鼠骨髓瘤细胞的体外培养需精准调控环境与营养,以维持其悬浮生长特性与功能稳定性:培养基选择上,shou选高糖 DMEM 培养基(含 4.5g/L D - 葡萄糖),需添加 10%-15% 胎牛血清(FBS)提供生长必需的营养因子,可补充 1% 非必需氨基酸(NEAA)与 1% 丙酮酸钠,提升细胞代谢活性,培养基 pH 值需严格控制在 7.2-7.4,渗透压维持在 290-310 mOsm/kg;若用于杂交瘤融合前的准备,需在融合前 1-2 天更换新鲜培养基,确保细胞处于对数生长期,提高融合效率。
培养环境需稳定在 37℃恒温、5% CO₂浓度及饱和湿度,CO₂浓度波动≤±0.3%,温度偏差超过 ±1℃会导致细胞活力下降,增殖速率显著减缓,甚至诱发细胞凋亡。传代管理是培养核心:当细胞密度达到 2×10⁶-5×10⁶ cells/mL 时需及时传代,无需消化处理,直接取对数生长期细胞悬液,按 1:4-1:6 比例加入新鲜培养基即可;传代时需轻轻吹打细胞悬液,避免细胞团聚,同时去除极少数死亡细胞(通过低速离心 1000rpm,5 分钟,弃上清少量沉淀);培养基更换频率为每 1-2 天 1 次,确保营养充足,减少代谢废物积累。此外,细胞对血清质量极为敏感,需选用低内毒素(≤5 EU/mL)、批次间一致性高的 FBS,劣质血清会导致细胞形态异常、融合能力下降 50% 以上,影响单克隆抗体制备成功率。
三、核心科研应用领域
依托其独特的生物学特性,IR983F 大鼠骨髓瘤细胞在科研领域具有不可替代的价值:
骨髓瘤发病机制研究:可用于解析大鼠骨髓瘤的发生发展机制,如探索骨髓瘤细胞增殖信号通路(如 IL-6/JAK/STAT3)的异常激活,研究骨髓微环境(如基质细胞、细胞因子)对骨髓瘤细胞存活、耐药的调控作用,分析骨髓瘤细胞与骨组织的相互作用(如破骨细胞活化),挖掘疾病诊断标志物与潜在治疗靶点;
单克隆抗体制备:作为经典的大鼠 B 淋巴细胞杂交瘤融合亲本,与免疫后的大鼠脾细胞融合后,可通过 HAT 培养基筛选出杂交瘤细胞(亲本骨髓瘤细胞因 HGPRT/TK 缺陷无法存活,未融合脾细胞自然死亡),进而筛选分泌特异性抗体的杂交瘤克隆,用于制备大鼠抗多种抗原的单克隆抗体,广泛应用于免疫检测(如 ELISA、Western Blot)、免疫组化及靶向治疗研究;
抗肿瘤药物筛选与评估:作为大鼠骨髓瘤特异性靶细胞模型,可用于检测抗骨髓瘤药物(如蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂)的抑瘤活性,通过 CCK-8 法、流式细胞术(Annexin V/PI 双染)测定药物对细胞增殖的抑制率与诱导凋亡率,计算半数抑制浓度(IC₅₀),为药物疗效评估提供实验数据;
耐药机制研究:可通过体外逐步加药诱导构建药物耐药细胞株(如硼ti佐米耐药株),对比耐药株与亲本株的基因表达差异(如 ABC 转运蛋白、NF-κB 信号通路相关基因),分析耐药相关分子的作用机制,为临床克服骨髓瘤耐药提供理论支持。
四、质量控制与使用注意事项
合格的 IR983F 大鼠骨髓瘤细胞需通过严格质量检测:细胞活力≥92%(台盼蓝染色法检测,死细胞呈蓝色,活细胞无色透明);无细菌、真菌、支原体污染(采用 PCR 法或培养法检测,结果均为阴性);免疫表型符合 CD38⁺CD138⁺CD45⁺特征;HGPRT/TK 缺陷验证阳性(HAT 培养基中无法存活);增殖速率稳定(倍增时间 24-30 小时);染色体核型特征明确(提供检测报告)。
使用时需注意:传代次数控制在 50 代内,超过传代上限可能导致细胞融合能力下降、耐药性异常改变;用于杂交瘤融合前,需确保细胞处于对数生长期,细胞活力≥95%,且在无抗生素环境下培养 1 周以上,避免抗生素对融合细胞的毒性影响;细胞冻存需使用含 10% DMSO、20% FBS 的高糖 DMEM 专用冻存液,采用梯度降温法(4℃ 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮长期保存),复苏时需在 37℃水浴中 1 分钟内快速融化,离心去除冻存液后接种至新鲜预热的培养基,静置 24 小时待细胞wan全恢复活性后再开展实验;进行药物处理或融合实验时,需设置空白对照组与阳性对照组,减少实验误差,保证结果的可靠性。
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