MML小鼠肺成纤维细胞，贴壁生长且稳定分泌催乳素，具垂体瘤恶性特征，是垂体疾病机制、激素调控及抗肿瘤药物研发的关键模型。

MML小鼠肺成纤维细胞

MML小鼠肺成纤维细胞。因能稳定分泌催乳素、保留垂体瘤细胞的恶性生物学行为及激素调控特性，成为研究垂体催乳素腺瘤发病机制、激素分泌调控及抗肿瘤药物研发的核心实验模型，为解析垂体疾病的分子机制与临床治疗策略提供了标准化工具。

一、核心生物学特性

MMQ 细胞具垂体瘤细胞的典型形态，在倒置显微镜下观察为多边形或短梭形，细胞质丰富、呈透亮状，细胞核为圆形或椭圆形、位于细胞中央，核仁清晰可见（1-2 个），细胞排列紧密、呈贴壁生长，融合后形成单层细胞层，部分区域可出现轻度重叠，与体内垂体催乳素腺瘤细胞形态高度一致。该细胞稳定表达垂体催乳素细胞特异性标志物：催乳素（PRL，细胞分泌的核心激素，可通过 ELISA 检测）、多巴胺 D2 受体（D2R，调控催乳素分泌的关键受体），同时表达垂体肿瘤相关抗原（如生长yi素受体 SSTR2），不表达促甲状腺激素、促肾上腺皮质激素等其他垂体激素相关标志物，明确其催乳素分泌细胞的属性。

MMQ 细胞最核心的功能是稳定分泌催乳素—— 在标准培养条件下，细胞可持续向培养基中释放催乳素，分泌量约为 5-10μg/10⁶细胞 / 24 小时，且分泌过程受激素调控（如多巴胺及其激动剂可抑制催乳素分泌，符合体内垂体催乳素细胞的调控机制），这一特性使其成为研究催乳素合成与分泌调控的理想模型。同时，细胞具垂体瘤细胞的恶性特征：一是无限增殖能力，种群倍增时间约为 36-48 小时，传代后可快速恢复增殖活性；二是锚着依赖性生长，虽以贴壁生长为主，但在软琼脂培养基中可形成少量细胞集落，体现一定的恶性转化能力；三是体内致瘤性，将细胞接种于免疫缺陷裸鼠皮下，可形成实体瘤，模拟体内垂体瘤的生长过程。

MMQ 细胞对激素调控信号具高度敏感性，尤其对多巴胺 - D2 受体通路响应显著：加入多巴胺或其激动剂（如溴隐亭）后，细胞催乳素分泌量可减少 50%-70%，同时细胞增殖速率下降 20%-30%，这与临床用多巴胺激动剂治疗垂体催乳素腺瘤的机制一致；此外，雌激素可促进细胞催乳素分泌与增殖，而生长yi素可轻微抑制细胞活性，进一步体现其与体内垂体催乳素细胞相似的激素调控特性，为研究激素对垂体瘤的影响提供了可控的体外模型。

二、主要研究应用场景

MMQ 细胞是解析垂体催乳素腺瘤发病分子机制的核心工具。例如，通过基因测序对比 MMQ 细胞与正常垂体催乳素细胞的基因表达差异，可筛选出腺瘤相关的差异表达基因（如 AIP、MEN1 抑癌基因），进一步通过基因敲除实验验证功能 —— 敲除 AIP 基因后，MMQ 细胞催乳素分泌量增加 40%、增殖速率加快 30%，明确 AIP 基因在抑制垂体瘤发生中的作用。此外，利用该细胞研究表观遗传调控机制，发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂可下调催乳素基因表达，减少激素分泌，揭示表观遗传异常在垂体腺瘤中的作用，为表观靶向治疗提供理论基础。

依托稳定的催乳素分泌特性，MMQ 细胞广泛用于激素调控机制研究。例如，研究多巴胺 D2 受体信号通路对催乳素分泌的影响：通过构建 D2 受体突变体，转染 MMQ 细胞后检测催乳素分泌变化，发现 D2 受体胞内域的特定氨基酸位点是信号传递的关键，突变后可导致多巴胺抑制作用丧失；此外，研究钙离子信号对催乳素分泌的调控，发现胞外钙离子浓度升高可促进催乳素释放，而钙离子通道抑制剂可阻断该过程，明确钙离子在激素分泌中的介导作用。

MMQ 细胞因具明确的恶性特征与激素敏感性，成为垂体催乳素腺瘤抗肿瘤药物筛选的理想模型。在药物筛选中，通过 CCK-8 法检测候选药物（如新型多巴胺激动剂、靶向小分子化合物）对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50）；同时通过 ELISA 检测药物对催乳素分泌的影响，若药物既能抑制细胞增殖（IC50＜10μmol/L），又能降低催乳素分泌量（减少≥50%），则提示其具潜在治疗价值。例如，筛选天然产物衍生物时，发现某化合物可通过激活 D2 受体，同时抑制细胞增殖与激素分泌，为新型垂体瘤治疗药物研发提供方向。

三、细胞培养关键要点

MMQ 细胞常规使用 DMEM 培养基（高糖配方，含 4.5g/L 葡萄糖）培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞增殖与激素分泌需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免刺激细胞过度分泌激素）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需研究激素调控，可使用无酚红培养基（避免酚红对激素检测的干扰），并根据实验需求添加特定激素或抑制剂（如多巴胺、雌激素）。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激影响细胞活性与激素分泌。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持催乳素合成相关酶的活性；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，若发现细胞出现梭形化、贴壁能力下降，可能提示细胞状态异常，需及时更换新鲜培养基或复苏新的细胞。

传代时机选择细胞融合度达到 80%-90% 时（融合度过高易导致细胞脱落）：先用无菌 PBS 轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留培养基与分泌的催乳素；加入适量细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟，待细胞边缘收缩、间隙增大后，加入含血清的培养基终止消化；轻柔吹打细胞制成单细胞悬液（避免剧烈吹打损伤细胞），按 1:2-1:3 比例接种到新培养皿，加入新鲜培养基后放回培养箱。

冻存需选用对数生长期且催乳素分泌稳定的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注信息；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟），加入 5 倍体积预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO，用新鲜培养基重悬细胞后接种，复苏后 24 小时内不换液，提高细胞存活率。

四、实验使用注意事项