A-375 [A375]人恶性黑色素瘤细胞

A-375 [A375]人恶性黑色素瘤细胞是黑色素瘤基础研究与转化医学的经典体外模型，以高侵袭转移性、黑色素合成潜能及稳定的恶性表型为核心特征，在黑色素瘤发病机制、转移调控及治疗开发中地位关键，为皮肤恶性肿瘤研究提供可靠工具。

一、细胞来源与核心特征

该细胞系源自54岁女性恶性黑色素瘤患者的皮肤原发灶，经体外分离培养建立。原发灶来源使其保留了黑色素瘤早期恶变特征，同时兼具晚期肿瘤的侵袭属性，与临床黑色素瘤生物学行为高度契合。

形态上，A-375细胞呈上皮样与梭形混合态，贴壁生长且排列紊乱，细胞质丰富并含棕褐色黑色素颗粒，部分细胞呈多角形，细胞核大而畸形、核仁清晰，核质比显著高于正常黑色素细胞，符合恶性肿瘤特征。染色体为非整倍体（58-66条），存在片段缺失、易位及基因扩增等畸变，黑色素合成及转移相关基因有特异性改变，为机制研究提供天然材料。

功能上，其zui显著特征是具有黑色素合成能力，表达酪an酸酶、MITF等黑色素生成关键分子，可模拟黑色素细胞恶变后的功能异常。细胞增殖能力ji强，S期细胞比例高、凋亡率低，且侵袭迁移能力突出，体外可高效穿透基质屏障，能模拟黑色素瘤早期局部浸润及远处转移过程。此外，高表达MMP-2、MMP-9及CD44等转移标志物，MAPK、PI3K/Akt通路异常激活，为机制研究提供明确靶点。

二、培养条件与操作

培养需控制37℃、5% CO₂环境，维持培养基pH 7.2-7.4。常用DMEM或RPMI-1640培养基，添加10%-15%优质胎牛血清及广谱抗菌试剂，满足高营养需求并预防污染，避免强光照射以维持黑色素合成潜能。

传代时用PBS洗涤细胞2-3次，加细胞消化液37℃孵育2-4分钟，待细胞边缘变圆后用血清培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液（避免破坏黑色素颗粒），按1:3-1:5比例接种。因增殖较快，需每2-3天评估传代需求，避免过度密集影响细胞活性。

长期培养需每2-3天换液，定期用台盼蓝检测活性（活细胞率≥90%），并验证酪an酸酶活性及MMP-2等标志物表达，确保细胞表型稳定与实验可靠。

三、核心研究应用

1. 发病机制研究：作为黑色素合成功能完整的模型，可解析MITF调控网络异常、BRAF基因突变等在黑色素瘤发生中的作用，探索黑色素细胞恶变的分子机制。

2. 转移调控研究：构建转移体外模型，分析细胞与皮肤微环境成分的交互及MMPs介导的基质降解机制，为开发抗转移策略提供理论支持。

3. 药物研发：用于靶向药物（如BRAF抑制剂）、抗转移药物及免疫相关药物筛选，评估药物对细胞增殖、凋亡及黑色素合成的影响，为临床用药提供数据。

四、优势与局限

优势在于黑色素合成能力稳定、侵袭特性明确、培养操作简便，适配高通量实验及机制研究。局限是无法模拟所有黑色素瘤亚型（如无色素型），需结合SK-MEL-28等细胞验证；缺乏体内皮肤微环境，部分结果需动物模型确认；长期培养可能出现黑色素合成能力下降，需定期功能验证。

综上，A-375细胞是黑色素瘤研究的核心工具，虽有局限，但通过多模型验证，在发病机制、转移调控及药物研发中价值显著，为皮肤恶性肿瘤基础研究与临床转化提供重要支撑。