NCI-H1395人肺腺癌细胞源自人肺腺癌，贴壁生长，携相关分子特征，生物学稳定，可模拟临床肺腺癌表型，是肺腺癌机制研究与抗肿瘤药物筛选的常用模型。​

NCI-H1395人肺腺癌细胞

NCI-H1395人肺腺癌细胞是由美国国家癌症研究所（NCI）分离建立的人肺腺癌细胞系，源自一名肺腺癌患者的肿瘤组织。因其能稳定模拟临床肺腺癌的病理表型、分子特征及恶性生物学行为，且生物学特性可控，成为全球肺腺癌基础研究、药物研发及耐药机制探索领域的重要实验模型，为破解肺腺癌治疗难题提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的肺腺癌细胞系，NCI-H1395 具备肺腺癌的标志性病理表型，可稳定表达肺腺癌特异性标志物，如细胞角蛋白 7（CK7）、甲状腺转录因子 1（TTF-1）及表面活性物质相关蛋白 C（SPC），与临床肺腺癌患者肿瘤组织的细胞形态、标志物表达特征高度一致。在倒置显微镜下观察，细胞呈多边形或上皮样形态，细胞质丰富且边界清晰，细胞核大而饱满，核仁明显，核质比显著高于正常肺上皮细胞；生长方式为典型贴壁生长，细胞紧密附着于培养皿表面，呈 “铺路石" 样均匀排列，传代时需通过消化处理使细胞脱离基质，分散成单细胞悬液以维持良好生长状态，避免细胞聚团影响实验重复性。

NCI-H1395 携带肺腺癌相关的关键分子改变，其中最核心的是KRAS 基因突变（常见于第 2 号外显子，如 G12C 突变），这一突变类型在临床肺腺癌患者中发生率较高，是肺腺癌重要的驱动突变之一，与肿瘤细胞的异常增殖、侵袭转移密切相关。此外，该细胞系还存在 TP53 基因突变，可导致细胞凋亡调控机制紊乱，进一步增强肿瘤细胞的抗凋亡能力与恶性程度。同时，NCI-H1395 不携带表皮生长因子受体（EGFR）敏感突变、间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合等其他肺癌常见分子异常，确保了其作为 KRAS 突变型肺腺癌模型的特异性，为针对性研究该亚型肺腺癌的分子机制与治疗策略提供了可靠工具。

在标准培养条件下，NCI-H1395 的种群倍增时间约为 55-65 小时，增殖速率相对平缓，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 75%-85% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，且 KRAS 信号通路活性稳定，是开展药物处理、基因编辑、信号通路分析等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 90%），易出现接触抑制，导致部分细胞凋亡或分子特征异常（如 KRAS 下游信号分子表达波动），因此需及时传代（建议每 2-3 天传代一次）以维持细胞的生物学特性稳定。

二、主要研究应用场景

依托与临床肺腺癌的分子同源性，NCI-H1395 成为解析 KRAS 突变型肺腺癌恶性生物学行为机制的理想模型。例如，通过 RNA 干扰技术或 CRISPR/Cas9 技术下调该细胞中 KRAS 基因的表达，可观察到细胞增殖速率显著减缓、迁移侵袭能力下降，且细胞周期阻滞于 G1 期，进而明确 KRAS 突变在肺腺癌进展中的驱动作用；此外，利用该细胞系研究 TP53 基因突变对细胞凋亡的影响，可揭示肺腺癌细胞逃避凋亡、实现无限增殖的分子机制 —— 如突变 TP53 可通过下调 Bax、上调 Bcl-2 等凋亡相关基因，抑制细胞凋亡通路激活，为挖掘新的治疗靶点（如 TP53 修复剂、凋亡通路激活剂）提供实验依据。同时，NCI-H1395 也常用于肺腺癌上皮 - 间质转化（EMT）机制研究，通过检测不同处理条件下 E - 钙粘蛋白、N - 钙粘蛋白等 EMT 标志物的表达变化，探索调控肺腺癌转移的关键信号通路（如 PI3K/AKT、MAPK 通路）。

作为体外药物活性检测的经典模型，NCI-H1395 广泛应用于肺腺癌抗肿瘤药物的筛选与活性评价，尤其适用于 KRAS 突变型肺腺癌靶向药物、临床常用抗癌药物的研发。在药物筛选实验中，可通过 MTT 法、CCK-8 法等检测不同候选药物对该细胞的抑制率，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物的抗肿瘤活性；对于已进入临床前研究阶段的药物，还可利用该细胞系验证其作用机制 —— 如通过 Western blot 检测药物处理后 KRAS 下游信号分子（如 p-RAF、p-MEK、p-ERK）的磷酸化水平变化，确认药物对 KRAS 通路的抑制效果；此外，通过建立 NCI-H1395 裸鼠移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、小鼠生存期延长情况），为药物的临床转化提供关键的体内外数据支持。例如，在 KRAS G12C 抑制剂的研发中，NCI-H1395 常被用于初步验证药物对 KRAS 突变型肺腺癌的抑制活性，为后续临床试验奠定基础。

肺腺癌临床治疗中易出现耐药现象，而 NCI-H1395 是建立耐药细胞株、研究耐药机制的重要工具。通过逐步提高药物浓度（如临床常用的吉西他滨类抗癌药物，或 KRAS 通路抑制剂）诱导该细胞系建立耐药细胞株（如 NCI-H1395/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达谱（如 RNA 测序）、蛋白水平变化（如 Western blot），可挖掘耐药相关分子。研究发现，耐药株中常出现 ABC 转运蛋白（如 ABCB1、ABCG2）高表达、DNA 损伤修复基因（如 BRCA1、ATM）激活或 KRAS 通路重构等耐药机制 ——ABC 转运蛋白可将细胞内药物泵出体外，降低胞内药物浓度；DNA 损伤修复基因激活可增强细胞对药物诱导的 DNA 损伤的修复能力；通路重构则可通过激活替代信号通路（如 MET 扩增），绕过药物作用靶点驱动细胞增殖。针对这些机制，可筛选相应的抑制剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂维拉帕米、DNA 损伤修复抑制剂奥拉帕利），并在 NCI-H1395 模型中验证其逆转耐药的效果，为临床耐药患者的治疗提供新策略。

三、细胞培养关键要点

NCI-H1395 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞生长与分子特征稳定的需求；需添加 10% 胎牛血清（FBS，需经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与生长因子（如 EGF、IGF）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌制剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响 KRAS 信号通路活性与细胞增殖状态。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持 KRAS 及其下游信号分子的正常功能；5% CO₂可通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需定期检查培养箱参数，确保温度、CO₂浓度与湿度稳定，尤其避免 CO₂浓度波动过大（如低于 4% 或高于 6%）导致细胞形态异常或增殖速率下降。

当细胞融合度达到 75%-85% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物，避免影响后续消化效果；随后加入适量细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟（因细胞贴壁较牢固，消化时间略长于其他肺腺癌细胞系），在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化（血清可中和消化液活性）；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；最后按 1:3-1:4 的比例将细胞接种到新的培养皿中（因细胞增殖速率较慢，传代比例不宜过高），加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期且分子特征稳定的细胞，采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 48 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项