L-02人正常肝细胞源自人胎肝细胞，具典型正常肝细胞形态与功能，培养稳定，可模拟肝脏生理代谢，常用于肝脏疾病机制研究、药物肝毒性测试及肝细胞功能评估。

L-02人正常肝细胞

L-02人正常肝细胞是从健康人胎肝细胞中分离、经体外纯化培养建立的永生性正常肝细胞系，核心特征为保留正常肝细胞的形态结构、生理代谢功能及稳定的体外增殖能力，可在体外模拟人体肝脏的部分生理过程，是研究肝脏发育、肝脏疾病机制、药物肝毒性评估及肝细胞功能调控的关键工具，在细胞生物学、药理学、毒理学及临床医学领域具有不可替代的应用价值。

从细胞来源与形态功能特征来看，L-02 人正常肝细胞的建立为体外肝脏研究提供了理想模型 —— 科研人员选取健康人胎儿肝脏组织（经伦理审批），无菌条件下采用胶原酶消化法分散肝组织，获得肝细胞悬液；通过差速贴壁法去除成纤维细胞、内皮细胞等杂细胞，接种于肝细胞专用培养基中培养；历经多代传代（15-20 代）后，筛选出形态均一、增殖稳定且保留肝细胞核心功能的细胞群体，确立 L-02 人正常肝细胞系。该细胞系严格保留正常肝细胞的核心特征：显微镜下呈多边形上皮样形态，胞体较大（直径 15-25μm），胞质丰富且含大量线粒体与内质网（HE 染色可见胞质呈淡嗜酸性），细胞核呈圆形或椭圆形、位于细胞中央，部分细胞含 2 个核仁；体外培养时呈贴壁生长，形成致密的单层细胞，细胞间连接紧密，可观察到胆小管样结构（PAS 染色阳性），模拟体内肝细胞的排列方式；功能上，L-02 细胞保留正常肝细胞的关键代谢能力，可合成白蛋白（ELISA 检测显示每 10⁶细胞 24 小时分泌量达 5-8μg）、尿素，表达细胞色素 P450 酶系（如 CYP3A4、CYP2C9），且这些功能在传代 50 次内保持稳定，与体内正常肝细胞的代谢特征高度一致。

在核心生物学特性方面，L-02 人正常肝细胞凭借 “功能稳定、增殖可控、培养适应性强" 的优势，成为多场景研究的理想模型。其一，优异的体外增殖稳定性：该细胞对培养条件要求温和，可在含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12（1:1）培养基中稳定生长，无需添加复杂的肝细胞生长因子（如 HGF）；在 37℃、5% 二氧化碳、95% 湿度的培养环境下，细胞倍增时间约 28-32 小时，不同传代批次（第 10-50 代）的增殖速率差异＜10%；连续传代 50 次以上，仍保持多边形上皮样形态，无明显衰老迹象（如细胞扁平化、胞质颗粒增多），且核型分析显示为正常二倍体（46, XX/XY），无染色体异常，确保实验结果的可靠性与重复性。其二，可控的肝细胞功能调控：L-02 细胞的肝细胞功能可通过培养条件精准调控 —— 在常规培养基中，细胞维持基础代谢功能；若添加特定诱导剂（如胰岛素），可显著提升白蛋白合成量（提升 30%-50%）与 CYP450 酶活性（CYP3A4 活性提升 2-3 倍），模拟体内肝细胞的功能激活状态；而在病理条件模拟（如高糖、高脂处理）下，细胞会出现脂肪变性（油红 O 染色可见脂滴）、炎症因子（IL-6、TNF-α）表达升高，与非酒精性脂肪肝（NAFLD）的细胞病理特征一致，为肝脏疾病机制研究提供可控的体外模型。其三，良好的药物响应特性：该细胞对肝毒性药物表现出与体内一致的剂量依赖性响应，药物处理后，细胞活力随药物浓度升高而下降，IC50 值稳定在特定范围，且药物诱导的细胞损伤特征（如氧化应激、线粒体功能障碍）与体内肝损伤机制一致；同时，对保肝药物表现出明确的保护作用，药物预处理后可使肝毒性药物诱导的细胞凋亡率下降 40%-50%，为药物肝毒性筛选与保肝药物研发提供了可靠模型。

在体外培养与维护细节上，L-02 人正常肝细胞的操作需注重维持细胞形态与功能稳定。培养时，推荐使用包被 0.1% 明胶的培养瓶（促进细胞贴壁与形态维持），培养基选用 DMEM/F12（1:1）+10% 胎牛血清 + 1% 抗菌试剂，pH 值控制在 7.2-7.4；细胞接种密度推荐 1×10⁴-2×10⁴ cells/cm²（如 6 孔板每孔接种 5×10⁵-1×10⁶个细胞），密度过低易导致细胞形态异常，过高则出现接触抑制；传代时，待细胞融合度达 80%-90%，弃去旧培养基，用 PBS 轻柔冲洗 2 次，加入细胞消化液，37℃孵育 3-5 分钟（镜下观察到细胞间隙增大、变圆），立即加入含血清培养基终止消化，轻轻吹打细胞形成单细胞悬液，按 1:3-1:5 的比例传代，传代间隔 3-4 天；细胞冻存采用含 10% DMSO 的血清冻存液，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存），复苏后存活率达 85% 以上，复苏后需培养 2-3 代，待细胞形态与功能恢复稳定后再用于实验。

在科研与应用领域，L-02 人正常肝细胞的特性使其覆盖肝脏相关研究的多个关键方向。其一，肝脏疾病机制研究：该细胞是解析肝脏疾病发病机制的核心模型 —— 研究非酒精性脂肪肝时，高糖高脂处理 L-02 细胞 2-3 周，可构建脂肪变性模型，通过检测脂代谢相关基因（如 PPARγ、SREBP-1c）的表达变化，揭示脂肪堆积的分子机制；研究病毒性肝炎时，可通过转染 HBV/HCV 病毒基因，模拟病毒感染后的肝细胞病理变化（如炎症反应、细胞凋亡），为抗病du药物研发提供靶点依据。其二，药物肝毒性评估与筛选：L-02 细胞是药物早期肝毒性筛选的重要工具 —— 通过高通量检测药物对细胞活力、肝功能指标（白蛋白、尿素合成）及肝损伤标志物（ALT、AST 释放）的影响，可快速评估药物的潜在肝毒性；例如，在新药研发中，利用该细胞可淘汰 60% 以上具有潜在肝毒性的候选化合物，降低临床研发风险，同时该模型的检测结果与动物实验及临床数据的相关性达 75% 以上，为药物安全性评估提供重要参考。其三，肝细胞功能调控与再生研究：该细胞可用于研究肝细胞再生的调控机制 —— 添加肝细胞生长因子（HGF）后，L-02 细胞的增殖速率提升 40%-60%，且肝细胞功能不受影响，通过检测增殖相关基因（如 c-Myc、Cyclin D1）的表达，明确 HGF 在肝细胞再生中的调控作用；同时，L-02 细胞可作为种子细胞用于肝细胞移植与生物人工肝研究，与生物支架材料复合培养后，可形成具有功能的肝细胞团，为肝脏损伤修复的临床转化研究提供实验基础。其四，营养代谢与肝脏生理研究：L-02 细胞可模拟肝脏的营养代谢过程 —— 研究葡萄糖代谢时，可检测细胞对胰岛素的敏感性（葡萄糖摄取率），揭示胰岛素抵抗与肝脏代谢异常的关联；研究脂质代谢时，可分析细胞内甘油三酯的合成与分解速率，为营养相关肝脏疾病的预防与治疗提供理论依据。

综上，L-02 人正常肝细胞凭借稳定的肝细胞功能、可控的增殖特性及良好的培养适应性，成为肝脏相关研究领域的 “基石级" 工具细胞。其在肝脏疾病机制、药物研发、细胞再生等领域的应用，不仅推动了肝脏生物学的发展，更在药物安全性评估、肝脏疾病治疗等临床转化领域发挥关键作用，至今仍是全球实验室开展肝脏研究的常用细胞系，具有不可替代的科学价值与应用前景。