NCI-H2227人小细胞肺癌细胞 源自人小细胞肺癌患者，具神经内分泌特性，贴壁生长，生物学稳定，常用作小细胞肺癌发病机制研究、抗肿瘤药物筛选的实验模型。​

NCI-H2227人小细胞肺癌细胞

NCI-H2227人小细胞肺癌细胞 是由美国国家癌症研究所（NCI）建立的人小细胞肺癌（SCLC）细胞系，源自一名小细胞肺癌患者的肿瘤组织，因高度契合临床小细胞肺癌的生物学特征，成为全球小细胞肺癌基础研究、药物研发及机制探索领域的重要实验模型，为解析小细胞肺癌的恶性表型与治疗难题提供了关键工具。

一、核心生物学特性

作为典型的小细胞肺癌细胞系，NCI-H2227 具有小细胞肺癌标志性的神经内分泌特性，可表达神经内分泌标志物如嗜铬粒蛋白 A（CgA）、突触素（Syn）等，与临床小细胞肺癌患者肿瘤组织的病理表型高度一致。在倒置显微镜下观察，细胞呈圆形或短梭形，体积较小，细胞质少而透亮，细胞核大且核质比高，核仁不明显；细胞生长方式为贴壁生长，培养过程中易形成细胞聚团，但仍需依赖培养皿表面附着才能稳定增殖，传代时需通过消化处理使细胞分散。

NCI-H2227 携带小细胞肺癌常见的分子遗传学改变，其中最典型的是 MYC 家族基因（如 MYC、MYCN）的扩增，这一特征与小细胞肺癌的高侵袭性、高转移性密切相关。此外，该细胞系还存在 RB1 基因失活和 TP53 基因突变，这两种分子异常是小细胞肺癌发生发展的关键驱动事件，与肿瘤细胞的无限增殖、凋亡抵抗特性直接相关。同时，NCI-H2227 不携带表皮生长因子受体（EGFR）敏感突变及间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合，进一步印证了其作为小细胞肺癌特异性模型的可靠性。

在标准培养条件下，NCI-H2227 的种群倍增时间约为 36-48 小时，增殖速率较快，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 90% 以上）。当细胞融合度达到 70%-80% 时进入对数生长期，此时细胞增殖活跃、形态均一，是开展药物处理、基因编辑等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 85%），易出现细胞堆积、营养匮乏，导致部分细胞凋亡或形态异常，因此需及时传代以维持细胞良好状态。

二、主要研究应用场景

凭借与临床小细胞肺癌的分子同源性，NCI-H2227 成为解析小细胞肺癌恶性生物学行为机制的理想模型。例如，通过 RNA 干扰技术下调该细胞中 MYC 基因的表达，可观察到细胞增殖速率显著减慢、侵袭能力下降，进而验证 MYC 基因在小细胞肺癌进展中的促癌作用；此外，利用该细胞系研究 RB1/TP53 双失活对细胞周期调控的影响，可明确小细胞肺癌细胞逃避细胞周期检查点、无限增殖的分子机制，为挖掘新的治疗靶点提供实验依据。同时，NCI-H2227 也常用于小细胞肺癌神经内分泌分化机制的研究，通过检测不同处理条件下神经内分泌标志物的表达变化，探索调控小细胞肺癌神经内分泌特性的信号通路。

作为体外药物活性检测的经典细胞模型，NCI-H2227 广泛应用于小细胞肺癌抗肿瘤药物的筛选与活性评价。在药物筛选实验中，可通过 MTT 法、CCK-8 法等检测不同候选药物对该细胞的抑制率，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物的抗肿瘤活性；对于已进入临床研究阶段的药物，也可利用该细胞系验证其对小细胞肺癌的作用效果，例如检测药物处理后细胞凋亡率的变化、细胞周期的阻滞情况等，为药物的临床应用提供体外实验支持。此外，NCI-H2227 还可用于药物联合治疗方案的优化研究，通过组合不同作用机制的药物，观察协同抑制效果，为小细胞肺癌临床联合用药方案的制定提供参考。

小细胞肺癌临床治疗中易出现耐药现象，而 NCI-H2227 是建立耐药细胞株、研究耐药机制的重要工具。通过逐步提高药物浓度诱导该细胞系建立耐药细胞株（如药物耐药株 NCI-H2227/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达差异、蛋白水平变化，可揭示小细胞肺癌耐药的分子机制。研究发现，耐药株中 ABC 转运蛋白（如 ABCB1）的表达显著升高，该蛋白可将细胞内的药物泵出体外，降低细胞内药物浓度，从而导致耐药；通过抑制 ABC 转运蛋白的活性，可有效逆转耐药，为临床耐药患者的治疗提供新策略。此外，耐药株中 DNA 损伤修复基因的异常激活，也是导致药物耐药的重要原因，这一发现为开发针对 DNA 损伤修复通路的药物提供了方向。

三、细胞培养关键要点

NCI-H2227 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，培养基中需添加 10% 胎牛血清（FBS，需经 56℃热灭活 30 分钟处理）以提供细胞生长所需的营养物质与生长因子，同时加入适量抗菌试剂预防细菌污染；培养基的 pH 值需维持在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激对细胞造成损伤。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养，其中 CO₂的作用是维持培养基的酸碱平衡，浓度需保持稳定（波动范围不超过 ±0.5%），若 CO₂浓度异常，易导致培养基 pH 值偏离适宜范围，影响细胞生长；培养箱内的湿度需严格控制，避免因湿度不足导致培养基过度蒸发，引起渗透压改变，进而影响细胞活性。

当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代，操作步骤如下：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留的血清与代谢废物；随后加入适量消化液，37℃孵育 1-2 分钟，在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化；用移液器轻柔吹打细胞，使其分散成单细胞悬液；最后按 1:3-1:4 的比例将细胞接种到新的培养皿中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液，将处于对数生长期的细胞制成单细胞悬液，与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存，以最大限度减少冰晶形成对细胞的损伤。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 24 小时内避免换液，以提高细胞存活率。

四、实验使用注意事项