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NCI-H292人肺黏液上皮样癌细胞
产品简介:

NCI-H292人肺黏液上皮样癌细胞源自人肺粘液上皮样癌组织,贴壁生长,具粘液分泌功能与 CRTC1-MAML2 融合基因,是该癌机制研究、药物筛选的重要模型。

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更新时间:2025-10-29

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产品介绍

NCI-H292人肺黏液上皮样癌细胞

NCI-H292人肺黏液上皮样癌细胞是肺癌研究领域中针对肺粘液上皮样癌(MEC)的核心实验模型,源自人肺粘液上皮样癌组织(罕见的肺原发性恶性肿瘤,占肺恶性肿瘤的 1%-2%,好发于中央气道),经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留肺粘液上皮样癌 “粘液分泌活跃、上皮分化明显、恶性度中等" 的核心病理属性,且稳定携带 CRTC1-MAML2 融合基因(该癌高频分子特征,占比 60%-70%),传代 40 代内仍维持亚型特异性表型,成为研究该癌发病机制、粘液调控、药物筛选的关键载体,为这一少见肺癌亚型的科研突破与临床治疗提供重要支撑。

一、核心生物学特性

(一)组织来源与细胞属性

NCI-H292 细胞源自临床中央气道肺粘液上皮样癌患者肿瘤组织,与体内肿瘤遗传背景、病理形态高度一致。核心优势有三:一是功能特异性强,持续合成分泌酸性粘多糖类粘液(如 MUC5AC),精准模拟体内肿瘤粘液分泌特性,*粘液分泌型肺癌模型空白;二是分子特征明确,除 CRTC1-MAML2 融合基因外,高表达上皮标志物与粘液合成基因,与临床患者分子谱匹配;三是培养稳定,贴壁生长且增殖可控,无需复杂诱导剂即可维持粘液分泌,实验重复性超 90%,满足大规模研究需求。

(二)形态与生长特征

体外培养时,NCI-H292 细胞呈典型粘液上皮样癌形态:细胞为多边形或柱状,排列紧密具上皮极性(模拟气道上皮排列),胞质丰富含大量嗜碱性粘液颗粒(PAS 染色阳性,光学显微镜下呈深蓝色点状聚集);细胞核圆形或椭圆形,核质比中等,核仁清晰(1-2 个),染色质分布均匀,核分裂象中等(倍增时间 60-72 小时),体现中等恶性增殖特性。

细胞无明显接触抑制,汇合度 90% 后形成 “铺路石样" 单层,局部因粘液堆积呈透明状;常规接种密度 3×10⁴-5×10⁴ cells/cm²,24-36 小时贴壁,48 小时贴壁率超 90%,72-96 小时进入对数生长期,144 小时汇合度达 85%-90%,需及时传代避免粘液过度堆积影响细胞活性。

(三)分子表型与功能特性

分子层面,该细胞呈特异性表型:一是高表达上皮与粘液标志物,如细胞角蛋白 18(CK18,阳性率≥90%)、粘蛋白 MUC5AC(阳性率≥85%)、上皮细胞膜抗原(EMA,阳性率≥80%),可通过免疫荧光或 Western blot 鉴定;二是粘液合成相关分子活跃,高表达 FOXA2(粘液调控因子)、MUC1(分泌转运蛋白),为粘液分泌提供基础;三是稳定携带 CRTC1-MAML2 融合基因(RT-PCR 可检测融合转录本),驱动细胞增殖与粘液分泌异常。

功能上,具备两大核心特性:一是高效粘液分泌,分泌量 15-25μg/10⁶cells/24h(ELISA 检测),模拟临床 “粘液湖" 病理特征;二是恶性功能,Transwell 侵袭率 30%-45%,软琼脂克隆形成率 25%-35%,且粘液分泌量与侵袭能力正相关(粘液增强细胞黏附与基质降解)。

二、体外培养与操作规范

(一)基础培养体系配置

NCI-H292 细胞需针对性配置培养体系:

  • 培养基选择:优先RPMI-1640 培养基(含 25mM HEPES、1mM 丙酮酸钠),维持上皮表型与粘液基因表达;若用 DMEM,需加 1% 非必需氨基酸 + 10ng/mL EGF,否则 MUC5AC 表达降 35%、粘液分泌减 40%;

  • 血清与添加剂:加 10%-15% 低内毒素胎牛血清(内毒素<5EU/mL),1% 抗菌试剂预防污染;无需外源诱导剂,自分泌信号维持粘液稳态,需增强分泌可补 5ng/mL TGF-β;

  • 培养环境:37℃±0.5℃、5% CO₂、95% 湿度,pH 7.2-7.4,渗透压 280-320mOsm/kg;用普通培养瓶,每 2-3 天换液,换液时缓慢加液避免损伤细胞与粘液层。

(二)传代与功能维持操作

传代时机:汇合度 85%-90% 或粘液堆积超 5μm 时传代(每 5-6 天一次),传代比例 1:3-1:5(固定 1:4 确保表型稳定)。

传代步骤:

  1. 弃旧液,PBS 轻柔冲洗 2 次;

  1. 加含 0.02% EDTA 的消化液(25cm² 瓶加 1mL),37℃孵育 3-5 分钟,镜下见细胞收缩时加 2-3 倍血清培养基终止;

  1. 轻柔吹打细胞,离心(1000×g,5 分钟)后重悬,按比例接种新瓶。

功能维持:每 8 代检测 MUC5AC(阳性率≥80%)、粘液分泌量(≥12μg/10⁶cells/24h)及融合基因;功能下降时加 5ng/mL TGF-β 培养 48 小时;避免频繁换血清,更换后适应 2-3 代再实验。

(三)冻存与复苏要点

冻存准备:选对数期细胞(活力≥90%,MUC5AC 阳性率≥85%),冻存液为 “10% DMSO+20% 血清 + 70% RPMI-1640",冰浴操作。

冻存流程:细胞悬液离心后重悬,浓度 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL,分装后程序降温(4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存)。

复苏操作:冻存管 37℃水浴 60-90 秒融化,加 10 倍预热培养基离心去 DMSO,重悬接种后 24 小时换液;48 小时活力恢复至 85% 以上,72 小时检测标志物,一周后可实验。

三、主要研究应用场景

(一)发病机制研究

  • 粘液调控研究:检测 TGF-β 或通路抑制剂对 MUC5AC、FOXA2 的影响,如抑制 PI3K 后 MUC5AC 降 50%、粘液分泌减 45%,证实通路调控作用;

  • 融合基因研究:沉默 CRTC1-MAML2 后,倍增时间延至 96 小时、MUC5AC 降 60%,明确其促增殖与粘液分泌作用。

(二)药物筛选

  • 抗肿瘤药物筛选:候选药物共培养后测 IC50,如某拓扑异构酶 II 抑制剂 IC50 为 15-20nM,为临床剂量提供参考;

  • 抗粘液药物筛选:筛选 MUC5AC 抑制剂,处理后粘液分泌减 70%,hua疗敏感性升 40%,改善治疗效果。

(三)耐药与微环境研究

  • 粘液耐药研究:粘液层使hua疗药物胞内浓度降 55%,证实粘液是耐药屏障;

  • 微环境研究:与气道成纤维细胞共培养后,MUC5AC 升 35%,证实微环境促进粘液分泌,为肿瘤 - 微环境互作研究提供支撑。


 

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