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更新时间：2025-10-29
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NK-92MI细胞
NK-92MI细胞是 NK-92 细胞系的高活性衍生株，源自人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤（NK）细胞，经体外筛选与驯化获得。该细胞继承了 NK-92 细胞的核心功能，且在肿瘤杀伤活性、培养适应性上更具优势，对 IL-2 的依赖显著降低，同时保留稳定的体外增殖特性，成为肿瘤免疫机制解析、抗肿瘤药物研发及过继免yi治疗相关研究的优质工具，为肿瘤免疫领域的基础研究与临床转化提供了高效实验载体。
一、核心生物学特性
（一）细胞来源与属性优势
NK-92MI 细胞由 NK-92 细胞经长期培养驯化衍生而来，保留了 NK 细胞的天然免疫效应属性，且功能更强化。与亲本 NK-92 细胞相比，其核心优势在于：一是肿瘤杀伤活性提升 30%-50%，对多种难治性肿瘤细胞（如耐药性肺癌 A549 细胞、黑色素瘤 B16 细胞）均能高效杀伤；二是对 IL-2 的依赖显著降低，亲本 NK-92 细胞需高浓度 IL-2（500U/mL）维持活性，而 NK-92MI 细胞在 100-200U/mL IL-2 环境下即可稳定增殖，大幅降低培养成本与细胞因子相关副作用风险；三是培养适应性更强，可在多种基础培养基中生长，且对血清批次差异的耐受性更高，实验重复性更优。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NK-92MI 细胞以悬浮生长为主，无贴壁倾向，细胞分散性良好，仅少数形成 2-3 个细胞的小聚团（较 NK-92 细胞聚团更少），便于后续实验操作。细胞形态呈圆形或短梭形，直径约 10-14μm，胞质丰富且含大量嗜天青颗粒（杀伤相关物质储存场所），颗粒数量较亲本细胞更多；细胞核呈圆形或椭圆形，核仁清晰，染色质分布均匀，分裂象频繁，增殖能力旺盛。
细胞倍增时间约 20-28 小时，较 NK-92 细胞（24-36 小时）更短，常规接种密度以 6×10⁵-8×10⁵ cells/mL 为宜，接种后 10-12 小时进入对数生长期，24-30 小时密度即可达 1.5×10⁶-2×10⁶ cells/mL，需及时传代避免密度过高导致营养不足。传代时无需严格控制比例，按 1:2-1:4 稀释均可稳定生长，操作灵活性更高。
（三）分子表型与功能特性
分子层面，NK-92MI 细胞呈现强化的 NK 细胞功能表型：一是高表达 NK 细胞活化标志物，CD56 阳性率达 98% 以上（高于 NK-92 细胞的 95%），CD16 阳性率约 85%-90%（亲本细胞为 70%-80%），同时高表达 NKG2D、DNAM-1 等杀伤活化受体，这些分子的高表达是其强杀伤活性的核心基础；二是低表达杀伤抑制受体 KIR2DL，较亲本细胞降低 20%-30%，减少了肿瘤细胞通过 MHCⅠ 类分子介导的免疫逃逸，进一步增强杀伤效率。
功能上，NK-92MI 细胞展现出更全面的免疫效应能力：一是广谱高效的肿瘤杀伤活性，对 K562 白血病细胞、HepG2 肝癌细胞、MCF-7 乳腺癌细胞等多种肿瘤细胞的杀伤率可达 70%-90%（乳酸脱氢酶释放法检测），且杀伤起效更快，作用 1 小时即可观察到明显肿瘤细胞凋亡；二是强效抗体依赖的细胞毒性（ADCC）效应，在抗 HER2、抗 CD20 等特异性抗体存在时，对靶细胞的杀伤率可再提升 20%-30%，适配靶向抗体联合治疗研究；三是稳定的细胞因子分泌功能，活化后可分泌高浓度 IFN-γ（较亲本细胞高 2-3 倍）、TNF-α，同时分泌少量 IL-10，在增强抗肿瘤免疫的同时，避免过度炎症反应，平衡免疫微环境。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NK-92MI 细胞培养条件较亲本更宽松，但需维持核心因子以保障功能：
培养基选择：优先使用α-MEM 培养基，也可使用 RPMI-1640 培养基（适应性更强），添加 10% 胎牛血清即可（无需马血清，简化培养体系），若使用低血清培养基（5% 血清），需补充 200U/mL IL-2，避免活性下降；
关键添加剂：IL-2 浓度控制在 100-200U/mL（常规 150U/mL），无需额外添加其他细胞因子；加入 1% 抗菌试剂预防污染，长期培养建议每 2 周更换一次培养基品牌，避免血清中杂质累积；
培养环境：温度 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.2%，湿度 95%±2%，pH 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通透气盖培养瓶，无需摇瓶培养（静态培养即可稳定生长），每 2-3 天更换一次培养基，更换时保留 1/5 旧培养基，减少环境波动对细胞的影响。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞密度达 1.5×10⁶-2×10⁶ cells/mL 时传代（通常每 24-30 小时一次），密度低于 5×10⁵ cells/mL 时需补加 IL-2 至 200U/mL，促进增殖。
传代步骤：
轻柔颠倒培养瓶 3-5 次，使细胞均匀悬浮，避免剧烈摇晃导致细胞损伤；
吸取所需体积细胞悬液，直接加入含新鲜培养基（预加 150U/mL IL-2）的培养瓶，无需离心（减少细胞丢失）；
补充培养基至适宜体积（按培养瓶规格，25cm² 瓶加 5mL，75cm² 瓶加 15mL），放入培养箱即可。
功能维持：每 7-10 代检测一次肿瘤杀伤率（对 K562 细胞杀伤率需≥70%），若活性下降，可在培养基中添加 5ng/mL IL-15（与 IL-2 协同激活）培养 24 小时；避免长期在低 IL-2 浓度（<100U/mL）下培养，否则易导致 CD16 表达降低，ADCC 效应减弱。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、杀伤活性正常的细胞（活力≥95%，杀伤率≥70%），冻存液按 “10% DMSO+80% 胎牛血清 + 10%α-MEM 培养基 + 150U/mL IL-2" 配制，冰浴操作，DMSO 缓慢滴加，边加边轻轻混匀。
冻存流程：离心收集细胞（800×g，5 分钟），弃上清后用预冷冻存液重悬，调整浓度为 1×10⁷ cells/mL，分装冻存管（每管 1mL）；程序降温：4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存，无需使用程序降温盒（耐受性更强）。
复苏操作：从液氮取出后，37℃水浴快速解冻（30-40 秒融化），立即加入 10 倍体积预热培养基（含 150U/mL IL-2），轻轻混匀后离心（800×g，5 分钟）去 DMSO；用新鲜培养基重悬接种，24 小时后更换培养基，复苏后 48 小时细胞活力即可恢复至 90% 以上，杀伤功能无显著下降。
三、主要研究应用场景
（一）肿瘤免疫机制研究
NK-92MI 细胞因活性强、稳定性高，是解析 NK 细胞抗肿瘤机制的理想工具：
杀伤信号通路研究：通过 Western blot 检测其杀伤过程中 PI3K/Akt、MAPK 等信号通路的激活情况，明确关键调控分子；例如，抑制 PI3K 活性后，细胞对肿瘤细胞的杀伤率下降 50% 以上，证实该通路是杀伤信号传导的核心；
肿瘤免疫逃逸机制研究：将 NK-92MI 细胞与高表达 PD-L1、HLA-E 的肿瘤细胞共培养，观察杀伤率变化，评估免疫抑制分子对 NK 细胞功能的影响，为开发针对 NK 细胞的免疫检查点抑制剂提供依据。
（二）抗肿瘤药物筛选与联合治疗评估
依托其强效杀伤与 ADCC 效应，NK-92MI 细胞广泛用于药物研发：
免疫增强药物筛选：将候选药物（如小分子免疫激活剂、中药提取物）与细胞共培养，检测杀伤率、IFN-γ 分泌量，筛选能增强 NK 细胞活性的药物；例如，某中药提取物处理后，细胞杀伤率提升 35%，IFN-γ 分泌增加 4 倍，具有潜在开发价值；
靶向药物联合治疗评估：将 NK-92MI 细胞与抗 PD-1 抗体、抗 VEGF 药物等联合使用，检测对肿瘤细胞的协同杀伤效果，为临床联合治疗方案制定提供数据；例如，NK-92MI 细胞与抗 PD-1 抗体联合，对 PD-L1 阳性肿瘤细胞的杀伤率较单独治疗提升 40%。
（三）过继免yi治疗相关研究
NK-92MI 细胞因培养成本低、安全性高，是过继免yi治疗研究的热门模型：
基因修饰细胞研发：通过慢病毒转染等技术，将 CAR（如 CD19-CAR、HER2-CAR）、细胞因子基因导入 NK-92MI 细胞，增强其靶向性与活性；例如，CD19-CAR 修饰的 NK-92MI 细胞，对 CD19 阳性淋巴瘤细胞的杀伤率达 95% 以上，且在动物模型中可显著抑制肿瘤生长；
治疗安全性与有效性评估：在动物肿瘤模型中，通过静脉输注 NK-92MI 细胞，检测其体内分布、肿瘤定植能力及对正常组织的毒性，评估治疗安全性；同时监测肿瘤体积变化、小鼠生存期，验证治疗有效性，为临床应用奠定基础。
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