PIEC小鼠髋动脉内皮细胞源自小鼠髋动脉，贴壁生长，具血管内皮细胞功能，适用于血管生理研究、血栓形成机制探索及相关药物测试实验。

PIEC小鼠髋动脉内皮细胞

PIEC小鼠髋动脉内皮细胞是源自小鼠髋动脉血管壁内层的功能性内皮细胞，作为血管壁与血液间的关键屏障，兼具物质转运、血管稳态调控及炎症响应等核心功能，且体外可稳定培养并维持内皮细胞特异性表型，成为研究血管生理、血栓形成、动脉粥样硬化等疾病的核心体外模型，为血管生物学基础研究与心血管疾病临床转化提供关键实验载体。

一、核心生物学特性

（一）来源与组织功能定位

PIEC 小鼠髋动脉内皮细胞从健康小鼠髋动脉组织中分离获取，经胶原酶消化法解离血管壁后，通过差速贴壁法纯化得到高纯度细胞群体。在体内，该细胞构成髋动脉血管的内层屏障，直接接触血液，主要承担三大功能：一是物质转运，通过选择性通透作用，介导营养物质（如葡萄糖、氨基酸）从血液进入组织，同时排出代谢废物；二是血管稳态调控，分泌一氧化氮（NO）、前列环素等血管舒张因子，及内皮素等收缩因子，维持血管张力平衡；三是抗血栓形成，通过表达血栓调节蛋白、前列环素等物质，抑制血小板聚集与凝xue因子激活，防止血管内血栓形成。

（二）形态与表型特征

细胞形态呈典型的 “铺路石" 样多边形，贴壁生长紧密排列，细胞间连接清晰（形成内皮屏障结构）；胞质透明，含丰富的 Weibel-Palade 小体（储存血管性血友病因子 vWF 的特异性结构），及大量线粒体（支撑物质转运的能量需求）；细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁不明显，染色质均匀分布。表型上，PIEC 小鼠髋动脉内皮细胞表达内皮细胞特异性标志物，如血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin，介导细胞间连接）、CD31（血小板内皮细胞黏附分子，内皮细胞鉴定核心标志物）、vWF（血管内皮特异性糖蛋白），同时表达血管内皮生长因子受体 2（VEGFR2，参与血管生成信号传导），可通过免疫荧光或流式细胞术检测这些标志物，纯度达 CD31⁺细胞占比≥95% 方可用于实验。

（三）功能特性

除基础屏障功能外，PIEC 小鼠髋动脉内皮细胞还具备血管内皮te有的活性功能：其一，血管生成能力，在血管内皮生长因子（VEGF）等诱导下，可发生增殖、迁移并形成管状结构（体外 Matrigel 胶成管实验可验证），模拟体内血管新生过程；其二，炎症响应功能，当受到脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）等炎症刺激时，会上调表达细胞间黏附分子 1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子 1（VCAM-1），介导白细胞与内皮细胞黏附，参与炎症反应；其三，凝血调节功能，正常状态下通过表达血栓调节蛋白激活蛋白 C，抑制凝血；受损时则暴露胶原，激活凝xue因子 Ⅻ，启动凝血 cascade，这一功能使其成为研究血栓形成机制的理想模型。

二、体外培养关键条件

（一）培养基与添加因子

基础培养基选用 DMEM/F12（1:1）混合培养基，需添加 10% 胎牛血清（筛选低内毒素、无内皮细胞毒性的批次，避免影响细胞屏障功能），同时加入 1% glutamine（维持细胞代谢稳定）及 1% 无菌防护试剂（预防细菌污染）。为维持内皮细胞表型与功能，需额外添加关键因子：20ng/mL 表皮生长因子（EGF，促进细胞增殖）、10ng/mL 血管内皮生长因子（VEGF，维持内皮特异性功能），及 5μg/mL 肝素（抑制平滑肌细胞污染，促进内皮细胞贴壁），若需研究血管屏障功能，可加入 1ng/mL 转化生长因子 -β（TGF-β），增强细胞间连接紧密性。

（二）培养环境与操作

培养环境需严格控制为 37℃、5% CO₂、95% 湿度的恒温恒湿条件，CO₂浓度波动不超过 ±0.5%，避免 pH 变化导致细胞形态异常（如 “铺路石" 样结构消失）；因细胞贴壁依赖性强，需使用包被 0.1% 明胶的培养瓶（促进细胞黏附，防止脱落），接种密度控制在 1×10⁴ cells/cm²，避免密度过低导致细胞凋亡。传代时，待细胞汇合度达 80%-90%（避免过度汇合导致功能退化），用消化液（含 EDTA 的yi酶替代液）37℃孵育 1-2 分钟，待细胞边缘收缩呈圆形时，加入含血清培养基终止消化，按 1:3 比例接种至新包被明胶的培养瓶，传代周期约 3-4 天。

（三）冻存与复苏

细胞冻存时，使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基作为冻存液，将细胞浓度调整为 5×10⁵-1×10⁶ cells/mL 后分装，采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存），减少冰晶对细胞间连接的损伤；复苏时，37℃水浴快速解冻（1 分钟内），立即加入 10 倍体积预热培养基稀释，离心去除 DMSO（800×g 离心 5 分钟），接种至明胶包被的培养瓶，复苏存活率通常可达 80% 以上，复苏后需通过免疫荧光检测 CD31 表达，确保内皮表型稳定。

三、主要实验应用场景

（一）血管生理与病理机制研究

PIEC 小鼠髋动脉内皮细胞是该领域的核心模型：研究血管屏障功能时，可通过跨内皮电阻（TEER）检测细胞间连接紧密性，或通过荧光su钠通透实验评估屏障通透性，模拟高血压、糖尿病等疾病导致的内皮屏障损伤；研究动脉粥样硬化时，用氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）处理细胞，观察细胞对脂质的摄取（油红 O 染色）及炎症因子（如 IL-6、TNF-α）分泌变化，解析内皮细胞在动脉粥样硬化早期的病理改变。

（二）血栓形成与抗血栓药物筛选

利用细胞的凝血调节功能，可构建血栓形成体外模型：用胶原或 ADP 刺激细胞，观察血小板与内皮细胞的黏附情况（免疫荧光检测血小板标志物 CD41），研究血栓形成起始环节；筛选抗血栓药物时，将不同浓度药物（如阿si匹林、低分子肝素）作用于细胞，检测药物对 vWF 分泌、血栓调节蛋白表达的影响，或通过凝血时间测定，评估药物的抗凝血效果，为抗血栓药物研发提供体外数据支持。

（三）血管生成相关研究与药物测试

在血管生成研究中，将细胞接种于 Matrigel 胶上，加入 VEGF 或候选促血管生成药物，通过显微镜观察管状结构形成数量与长度，评估药物对血管生成的促进作用；反之，加入抗血管生成药物（如贝伐珠单抗），可观察其对管状结构的抑制效果，为肿瘤抗血管生成治疗、缺血性疾病血管修复治疗提供实验依据。此外，还可通过 Transwell 迁移实验，研究药物对内皮细胞迁移能力的影响，解析血管生成的迁移环节机制。

四、实验应用注意事项

实验前需通过免疫荧光或 Western blot 验证内皮细胞标志物（CD31、VE-cadherin、vWF）的表达，确保细胞表型稳定，避免传代超过 15 代导致 “铺路石" 样形态消失、功能退化；不同批次胎牛血清对细胞血管生成能力影响较大，需通过 Matrigel 成管实验筛选适配血清并固定使用。

培养过程中需严格维持无菌环境，PIEC 小鼠髋动脉内皮细胞对支原体污染极为敏感，污染后会导致细胞间连接破坏、TEER 值显著下降，每传代 3 次需通过 PCR 检测支原体，污染后需立即丢弃以防交叉感染；明胶包被培养瓶时需确保浓度均匀（0.1%），包被后 37℃孵育 1 小时，避免因包被不均导致细胞贴壁差异。

结果解读需结合体内血管微环境，体外培养的细胞缺乏血管平滑肌细胞、周细胞等支持细胞的协同作用，且无法模拟体内血流剪切力（髋动脉正常血流动力学环境），实验结论需结合动物模型（如小鼠颈动脉结扎模型）或临床样本数据综合分析；同时，需与其他部位内皮细胞（如肺微血管内皮细胞）对比，明确髋动脉内皮细胞在血管张力调节、血栓抵抗等方面的组织特异性，避免结果片面。