PG-BE1人肺巨细胞癌高转移细胞株源自人肺巨细胞癌，贴壁生长，转移能力强，具癌特性，常与低转移株对照，适用于肺癌转移机制、相关基因及抗转移药物研究。

PG-BE1人肺巨细胞癌高转移细胞株

PG-BE1人肺巨细胞癌高转移细胞株是源自人类肺巨细胞癌的贴壁生长细胞系，经体外筛选获得高转移表型，既保留肺巨细胞癌的核心恶性特征，又具备ji强的体内外转移能力，是研究肺癌转移启动机制、筛选促转移基因及评估抗转移药物疗效的核心体外模型，为肺癌转移防治研究提供关键实验载体。

一、核心生物学特性

（一）来源与高转移表型起源

该细胞株从肺巨细胞癌患者手术切除的原发肿瘤组织中分离，经多轮体外 Transwell 迁移 / 侵袭实验富集、裸鼠体内肺转移灶分选，获得转移能力显著高于亲本细胞的亚克隆株（PG-BE1）。其高转移性具体表现为：体外 Transwell 实验中，穿膜细胞数是低转移株 PG-LH7 的 5-7 倍；裸鼠尾静脉注射后，2 周即可观察到肺内密集转移灶（每只裸鼠转移灶数≥30 个），且可形成肝、骨等远处器官转移，wan美模拟临床肺癌晚期多器官转移特征。

（二）形态与增殖特征

细胞呈典型肺巨细胞癌形态，部分细胞体积巨大（直径 40-70μm），胞质含大量嗜酸性颗粒，多核 / 巨核现象（核数量 2-6 个）比例高于 PG-LH7；贴壁生长时呈不规则散在分布，细胞间连接松散，伪足伸出明显（提示强迁移潜能），与 PG-LH7 “相对聚集" 的生长模式形成鲜明对比。增殖能力强，倍增时间约 28-32 小时，略快于 PG-LH7，传代 50 代以上仍能稳定维持高转移表型与巨细胞形态，无增殖活力退化。

（三）分子与功能特征

分子层面，除携带肺癌常见的 p53 基因突变、EGFR 过表达外，还具备高转移相关分子特征：转移抑制基因（nm23-H1、KAI1）表达仅为 PG-LH7 的 30%-40%；基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）活性显著升高（酶谱法检测活性是 PG-LH7 的 4-5 倍），可高效降解 Ⅳ 型胶原（血管基底膜主要成分）；上皮 - 间质转化（EMT）表型明显，E - 钙黏蛋白（上皮标志物）表达下调，N - 钙黏蛋白、波形蛋白（间质标志物）及 EMT 转录因子（Snail、Twist）表达显著上调，为其突破组织屏障、实现远处转移提供分子基础。

二、体外培养关键条件

（一）培养基与环境控制

基础培养基选用 RPMI-1640，添加 10% 胎牛血清（需筛选无转移抑制因子的批次，避免抑制细胞转移能力）、1% glutamine 及 1% 无菌防护试剂。培养环境需严格维持 37℃、5% CO₂、95% 湿度，CO₂浓度波动不超过 ±0.5%，pH 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg。需特别注意，避免培养基中混入金属离子螯合剂（如高浓度 EDTA），否则会抑制 MMP 活性，导致转移能力假阳性降低。

（二）传代与维护操作

细胞贴壁生长且增殖迅速，传代周期约 2-3 天，当细胞汇合度达 70%-80% 时需及时传代（过度汇合会导致细胞聚团，影响转移相关表型）：用含 0.02% EDTA 的消化液 37℃孵育 1.5-2.5 分钟，待细胞边缘收缩、伪足消失后，加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液（避免剧烈吹打破坏细胞伪足），按 1:5-1:7 比例接种至新培养瓶。每日需观察细胞伪足伸出比例（正常应≥40%），若比例下降，需检测 MMP 活性，必要时复苏早期冻存细胞。

（三）冻存与复苏

冻存时使用含 10% 二甲基亚砜（DMSO）、20% 胎牛血清的 RPMI-1640 作为冻存液，细胞浓度调整为 4×10⁵-6×10⁵ cells/mL，采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时 37℃水浴 1 分钟内快速解冻，立即加入 8 倍体积预热培养基稀释，800×g 离心 5 分钟去除 DMSO，重悬后接种培养，复苏存活率可达 75% 以上，复苏后需通过 Transwell 实验验证转移能力，确保高转移表型稳定。

三、主要实验应用场景

（一）肺癌转移机制研究

作为高转移模型，可与 PG-LH7 形成 “高低转移对照"：通过转录组测序筛选差异表达的促转移基因（如 MMP-9、Snail），利用 CRISPR-Cas9 技术敲除目标基因后，观察 Transwell 穿膜数、裸鼠转移灶数量变化，验证促转移基因功能；研究肿瘤微环境对转移的调控，如与肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）共培养，检测细胞 MMP 活性及 EMT 标志物变化，解析微环境与肺癌转移的互作机制。

（二）抗转移药物研发与评估

适用于抗转移药物的体外活性筛选：将候选药物（如 MMP 抑制剂、EMT 抑制剂）作用于细胞，通过 Transwell 实验检测药物对转移能力的抑制率，酶谱法验证药物对 MMP 活性的影响；构建裸鼠原位移植瘤模型（将细胞接种于裸鼠肺组织），给予药物干预后，通过活体成像检测肺内转移灶大小，评估药物体内抗转移疗效，为临床药物研发提供 “体外 - 体内" 完整数据链。

（三）转移预警标志物筛选

利用高转移分子特征，筛选肺癌转移预警标志物：通过蛋白质组学分析细胞分泌组，鉴定高表达的转移相关蛋白（如 MMP-9、血管内皮生长因子 VEGF），验证其在肺癌患者血清中的表达水平，分析与转移风险的相关性；检测细胞外泌体中 miRNA（如 miR-10b、miR-21）的表达，探索外泌体 miRNA 作为转移早期诊断标志物的可行性，为开发肺癌转移预警试剂提供候选靶点。

四、实验应用注意事项

实验前需通过 “三重验证" 确认高转移表型：Transwell 迁移 / 侵袭实验（穿膜数需为 PG-LH7 的 5 倍以上）、Western blot 检测转移相关蛋白（MMP-9 高表达、nm23-H1 低表达）、裸鼠体内转移实验（肺转移灶数≥30 个 / 只），避免传代超过 50 代导致表型漂移；不同批次胎牛血清对细胞转移能力影响显著，需通过预实验筛选适配血清，固定批次使用。

培养过程中需避免细胞过度消化，否则会破坏伪足结构，导致转移能力暂时下降；操作需严格无菌，支原体污染会显著抑制 MMP 活性，每传代 3 次需通过 PCR 检测支原体，污染后需立即丢弃细胞。结果解读需结合临床，体外模型无法wan全模拟人体免疫微环境，需结合肺癌患者转移灶组织样本数据，确保结论的临床相关性。