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更新时间:2025-10-16
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UM人葡萄膜黑色素细胞
UM人葡萄膜黑色素细胞是研究眼部生理功能、葡萄膜疾病(如葡萄膜炎、黑色素瘤)及黑色素代谢机制的重要体外模型,源自人葡萄膜组织(包括虹膜、睫状体与脉络膜),经体外分离纯化与鉴定后,保留了葡萄膜黑色素细胞的核心生物学特性,兼具黑色素合成能力、光保护功能及眼部免疫调节作用,为眼部疾病机制研究、药物研发及组织工程角膜构建提供了可靠实验材料,在眼科学基础研究与临床转化领域应用广泛且科研价值突出。
从细胞来源与生物学特性来看,该细胞系多分离自健康人捐赠的眼球葡萄膜组织(虹膜或脉络膜,取材需符合伦理规范),属于眼部特化的黑色素细胞,与皮肤黑色素细胞在功能与分子特征上存在差异。在形态上,UM 人葡萄膜黑色素细胞呈梭形或多角形,胞体大小均匀(长径约 15-25μm,短径约 8-12μm),细胞核呈椭圆形,位于细胞中央或偏位,核仁不明显,细胞质丰富且含大量黑色素颗粒(因黑色素含量不同,细胞呈棕褐色至黑色不等),体外贴壁培养时,细胞呈放射状或不规则排列,部分细胞因黑色素颗粒聚集呈现明显的色素沉着,这一形态与体内葡萄膜组织中的黑色素细胞形态高度吻合,便于通过光学显微镜观察判断细胞生长状态与黑色素合成情况。在分子特征与功能方面,UM 细胞表达黑色素细胞特异性标志物:如酪an酸酶(TYR,黑色素合成关键酶)、酪an酸酶相关蛋白 1(TRP-1)、黑色素细胞标志物 MITF(小眼畸形相关转录因子),以及葡萄膜组织特异性标志物(如脉络膜黑色素细胞高表达的 PAX6);同时,其核心功能是合成与分泌黑色素—— 通过酪an酸酶催化酪an酸转化为多巴醌,进而合成黑色素,黑色素可吸收紫外线与有害光线,保护眼部视网膜免受光损伤,这一功能是眼部光保护机制的重要组成部分。此外,UM 细胞还参与眼部免疫调节,可分泌细胞因子(如 IL-6、TNF-α)与趋化因子,调控眼部炎症反应,维持眼内微环境稳定。
在培养条件与操作要点方面,UM 人葡萄膜黑色素细胞对培养环境要求精细,尤其需注意维持其黑色素合成能力与细胞活性。培养基推荐使用专用黑色素细胞培养基(如 MGM 培养基),添加 5%-10% 胎牛血清(FBS,需选择低内毒素血清,避免刺激细胞炎症反应)、黑色素细胞生长因子(如 bFGF、内皮素 - 1,促进细胞增殖与黑色素合成)及抗氧化剂(如维sheng素 C,防止黑色素过度氧化);培养环境需严格控制在 37℃、5% CO₂的恒温培养箱中,CO₂浓度可稳定培养基 pH 值在 7.2-7.4 的适宜范围,同时需避免强光照射(强光会刺激黑色素过度合成,影响细胞形态)。传代操作时,需密切观察细胞融合度,当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代(过度融合易导致黑色素颗粒堆积,影响细胞活性),传代前先用磷酸盐缓冲液(PBS)轻轻清洗细胞 2 次(避免用力冲洗导致黑色素颗粒脱落),加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液,37℃孵育 3-4 分钟(因细胞含黑色素颗粒,贴壁较牢固,消化时间需略长),待细胞间隙增大、梭形细胞收缩变圆时,立即加入含血清的培养基终止消化,轻轻吹打细胞使其分散成单细胞悬液(避免过度吹打导致细胞破碎与色素释放),按 1:2-1:3 的比例接种至新培养瓶中。培养过程中需每 2-3 天更换一次培养基,及时清除代谢废物与脱落的黑色素颗粒;同时需严格遵守无菌操作规范,所有试剂使用前经 0.22μm 滤膜过滤除菌,每 1-2 周通过 PCR 法检测细胞是否存在支原体污染(支原体污染会干扰细胞因子分泌,影响免疫调节功能),确保细胞培养稳定性。在细胞冻存与复苏方面,冻存液建议使用含 10% 二甲基亚砜(DMSO)、20% 胎牛血清的黑色素细胞培养基,将细胞浓度调整为 1×10⁶-2×10⁶个 /mL,按梯度降温法处理:4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→次日转入液氮长期保存;复苏时需将冻存管迅速放入 37℃水浴锅,持续轻轻摇晃至细胞悬液wan全融化(约 1-2 分钟,避免 DMSO 损伤细胞),立即加入 10 倍体积的新鲜培养基稀释 DMSO,1000rpm 离心 5 分钟后弃上清,用培养基重悬细胞接种,复苏后 24 小时观察细胞贴壁率(通常要求≥75%),并通过检测酪an酸酶活性验证黑色素合成功能,确保细胞功能正常。
在功能特点与科研应用领域,UM 人葡萄膜黑色素细胞凭借其黑色素合成能力、眼部免疫调节作用及组织特异性,被广泛应用于眼科学机制研究、药物研发及眼部组织工程等方面。在眼部疾病机制研究中,该细胞是解析葡萄膜相关疾病的核心工具 —— 如在葡萄膜炎研究中,可通过模拟炎症环境(如添加 LPS),观察 UM 细胞分泌的细胞因子变化(如 IL-6、TNF-α 表达上调),明确其在炎症反应中的调控作用;在葡萄膜黑色素瘤研究中,可通过对比正常 UM 细胞与肿瘤细胞的差异,分析基因突变(如 GNAQ、GNA11 突变)对黑色素合成、细胞增殖的影响,揭示肿瘤发生机制,为靶向治疗提供靶点。
在药物研发方面,UM 细胞可用于眼部药物的安全性与有效性评估:针对眼部抗炎药物,可检测药物对炎症因子分泌的抑制效果,评估抗炎活性;针对黑色素相关疾病(如眼部色素沉着异常),可筛选调节黑色素合成的药物(如酪an酸酶抑制剂),通过检测酪an酸酶活性、黑色素含量变化,评估药物对色素代谢的调控作用;此外,还可用于眼部光损伤防护药物的研发,通过模拟强光环境,观察药物对 UM 细胞黑色素合成、细胞活力的保护效果,为预防眼部光损伤提供药物候选。
在眼部组织工程领域,UM 细胞是构建组织工程虹膜、脉络膜的关键种子细胞 —— 可与生物材料(如胶原蛋白支架)复合培养,构建具有黑色素合成功能的人工葡萄膜组织,用于治疗虹膜缺损、脉络膜功能障碍等疾病;同时,其与视网膜细胞的共培养模型,可用于研究葡萄膜与视网膜的相互作用(如营养供应、光保护机制),为视网膜疾病治疗提供组织工程解决方案。
在细胞生物学基础研究中,UM 细胞可用于探索黑色素合成调控机制(如 MITF 对酪an酸酶的调控作用)、细胞色素代谢通路(如黑色素氧化与降解过程),或作为研究眼部细胞信号传导的模型(如光信号对细胞功能的影响),为眼科学基础理论研究提供工具支持。
综上所述,UM 人葡萄膜黑色素细胞凭借其明确的眼部组织特异性、黑色素合成功能及科研适用性,成为眼科学研究领域的核心工具,为推动眼部疾病机制解析、药物研发及组织工程发展发挥关键作用,尤其在葡萄膜相关疾病与眼部光保护研究中具有不可替代的价值,未来在精准眼科治疗与人工眼部组织构建中仍将保持广泛应用。
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