OVCAR-3人卵巢腺癌细胞

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OVCAR-3人卵巢腺癌细胞源自卵巢浆液性囊腺癌患者腹水，贴壁生长，具上皮细胞形态与卵巢癌生物学特征，是卵巢癌机制研究、药物筛选及耐药模型构建的重要工具。

产品型号：ELISA

更新时间：2025-10-28

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OVCAR-3人卵巢腺癌细胞

OVCAR-3人卵巢腺癌细胞是卵巢癌研究领域应用广泛的细胞模型，源自一名 60 岁卵巢浆液性囊腺癌患者的腹水样本，于 1982 年被成功分离建立。该细胞保留了卵巢腺癌细胞的典型生物学特征，兼具上皮细胞属性与肿瘤恶性表型，在卵巢癌发病机制解析、抗肿瘤药物筛选及耐药模型构建中发挥着不可替代的作用，为卵巢癌基础研究与临床转化提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

（一）来源与病理特征关联

作为从临床患者腹水分离的细胞系，OVCAR-3 细胞与卵巢浆液性囊腺癌的临床病理特征高度契合。细胞携带卵巢癌相关的染色体异常，如染色体数目变异与结构重排，同时高表达卵巢癌常见的肿瘤标志物 —— 癌抗原 125（CA125）与癌胚抗原（CEA），其中 CA125 分泌量稳定（约 50-100U/10⁶细胞 / 24h），可作为评估细胞活性与药物作用效果的重要指标，其表达水平变化与细胞增殖、凋亡状态密切相关，为模拟临床卵巢癌病情监测提供了实验依据。

（二）形态与生长特性

体外培养时，细胞呈典型上皮样贴壁生长，无悬浮生长倾向，细胞形态为多边形或不规则形，胞质丰富且呈嗜酸性，细胞核大而圆润，核仁明显（2-3 个），染色质分布不均，可见多核细胞（约占 5%-10%），符合腺癌细胞的形态学特征。细胞间连接紧密，形成连续的细胞单层，边缘清晰，当汇合度达到 90% 以上时，细胞生长速率减缓，易出现接触抑制现象。

细胞增殖能力稳定，倍增时间约 48-72 小时，传代 50 代以内可维持稳定的生物学表型与增殖活性。接种密度以 3×10⁴-6×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 24 小时贴壁率达 85% 以上，48 小时进入对数生长期，72-96 小时可达到 80%-90% 汇合度，需及时传代以避免细胞过度密集导致生长停滞。

（三）分子表型与功能特征

分子层面，OVCAR-3 细胞呈现出卵巢腺癌细胞的典型分子特征：一是高表达雌激素受体（ER）与孕激素受体（PR），对激素信号敏感，可用于研究激素依赖性卵巢癌的发病机制与激素靶向治疗；二是表达多种耐药相关蛋白，如 P - 糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白 1（MRP1），对多种抗肿瘤药物存在天然耐药性，IC₅₀值较高（如对shun铂的 IC₅₀约为 10-15μM），是研究卵巢癌多药耐药机制与逆转耐药策略的理想模型；三是分泌血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子 -β（TGF-β）等细胞因子，可通过自分泌或旁分泌方式调控肿瘤微环境，促进细胞增殖、侵袭与血管新生，模拟临床卵巢癌的恶性进展过程。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

OVCAR-3 细胞对培养条件要求较为严格，需精准控制营养成分与环境参数以维持其生物学特性：

培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES 缓冲液、1mM 丙酮酸钠），该培养基可满足细胞对氨基酸、维生素的需求，维持细胞正常代谢与增殖 —— 缺失丙酮酸钠会导致细胞增殖速率下降 40% 以上，且 CA125 分泌量显著减少；

血清与添加剂：需添加 10%-15% 胎牛血清（需筛选低内毒素、高营养活性的批次，白蛋白含量≥35g/L），同时加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；若需维持细胞激素敏感性，可额外添加 10nM β- 雌二醇，避免长期培养导致 ER/PR 表达下调；

培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶即可，无需特殊涂层（细胞贴壁能力强，可直接附着于塑料瓶壁），但需定期更换培养基（每 2-3 天一次），避免代谢废物堆积影响细胞状态。

（二）传代与冻存操作

传代时机：当细胞汇合度达 80%-90% 时需及时传代（通常每 3-4 天一次），避免过度汇合导致细胞形态改变与功能异常；传代比例按 1:2-1:4 稀释，具体根据实验需求调整 —— 需维持细胞高活性时按 1:2 稀释，需大规模扩增时按 1:4 稀释。

传代步骤：

弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（去除残留血清与代谢废物，避免影响消化效果）；

加入含 0.02% EDTA 的消化液（按每 25cm² 培养瓶加入 1mL 消化液的比例），37℃孵育 2-3 分钟，显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大，部分细胞开始脱落时，立即加入 2-3 倍体积的wan全培养基终止消化；

用移液器轻轻吹打细胞表面，使细胞wan全脱落并分散为单个细胞（避免用力过猛导致细胞损伤），收集细胞悬液离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。

冻存操作：

冻存准备：选择对数生长期、活力≥95% 的细胞，冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% wan全培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并不断轻柔混匀，防止温度骤降损伤细胞；

冻存流程：将细胞悬液离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用预冷冻存液重悬，调整浓度为 8×10⁶-1.2×10⁷ cells/mL，分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 16 小时→转入液氮长期保存；

复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化），将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的wan全培养基，离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，确保细胞活性恢复。

三、主要研究应用场景

（一）卵巢癌发病机制研究

OVCAR-3 细胞是解析卵巢癌恶性进展机制的重要工具：

信号通路研究：通过基因编辑技术（如 CRISPR/Cas9）敲除或过表达细胞中的关键基因（如 BRCA1、TP53、PI3K），观察细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化，结合 Western blot、qPCR 等技术，解析 PI3K/Akt、MAPK、p53 等信号通路在卵巢癌发生发展中的调控作用；例如，敲除 BRCA1 基因可显著增强 OVCAR-3 细胞对 DNA 损伤药物的敏感性，验证 BRCA1 在卵巢癌耐药中的作用。

肿瘤微环境互作研究：将 OVCAR-3 细胞与卵巢癌相关成纤维细胞（CAF）、巨噬细胞共培养，观察细胞分泌的细胞因子（如 VEGF、TGF-β）对微环境细胞的调控作用，以及微环境细胞对 OVCAR-3 细胞增殖、侵袭的影响，解析 “肿瘤细胞 - 微环境" 互作在卵巢癌进展中的作用机制。

（二）抗肿瘤药物筛选与评估

该细胞是卵巢癌药物体外筛选与体内验证的核心模型：

体外药物筛选：将不同浓度的候选药物（如铂类药物、靶向抑制剂、中药提取物）与 OVCAR-3 细胞共培养，通过 CCK-8 法检测细胞增殖抑制率，ELISA 法检测 CA125 分泌变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，计算 IC₅₀值，初步筛选具有抗卵巢癌活性的药物；对筛选出的药物，进一步通过 Western blot 检测凋亡相关蛋白（如 Caspase-3、Bax、Bcl-2）与耐药相关蛋白（如 P-gp）表达变化，明确药物作用机制。

体内药物评估：利用 OVCAR-3 细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型（接种 1×10⁷个细胞 / 只），待肿瘤体积达 100-150mm³ 时，将裸鼠随机分组并给予候选药物，通过监测肿瘤体积变化、裸鼠存活时间评估药物体内疗效；同时检测肿瘤组织中增殖标志物（Ki-67）、凋亡标志物（TUNEL）表达，以及血清 CA125 浓度，全面评价药物作用效果。

（三）卵巢癌耐药模型构建与逆转研究

依托其天然耐药特性，OVCAR-3 细胞可用于卵巢癌耐药模型构建与逆转策略研究：

耐药模型构建：通过逐步提高药物浓度（如shun铂从 1μM 逐步提升至 10μM）诱导 OVCAR-3 细胞产生耐药性，建立 OVCAR-3 耐药细胞株（如 OVCAR-3/DDP）；对比亲本株与耐药株的基因表达差异（如耐药基因、凋亡基因、信号通路基因），通过 RNA 测序、蛋白质组学分析筛选耐药关键基因与通路。