小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶试剂盒
小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶试剂盒是采用标准化酶联免疫吸附技术研发的科研用检测试剂盒,可精准检测小鼠生物样本中丙酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)浓度,广泛应用于PKM2功能研究、小鼠肿瘤代谢机制探究、免疫细胞功能调控、糖代谢重编程、血管疾病相关研究及相关生命科学基础研究场景。该酶是小鼠体内糖酵解途径的关键限速酶,主要以四聚体(高酶活性)和二聚体(低酶活性、可调控基因转录)两种形式动态转换,广泛表达于小鼠胚胎细胞、干细胞、癌细胞及免疫细胞中,其活性异常与肿瘤发生发展、CD8+T细胞效应功能调控、内皮细胞代谢紊乱等密切相关,相关浓度检测对小鼠相关科研、肿瘤代谢疗法研发及免yi治疗研究具有重要意义[1][2][6]。本试剂盒采用高度特异性的双抗体夹心原理,可快速、精准检测小鼠相关样本中的PKM2浓度,操作简便、灵敏度高、特异性强,无交叉干扰,适用于科研领域的基础研究、肿瘤代谢及免疫相关科研检测,为相关科研及药物研发提供可靠的检测工具,各组分均经过严格质量管控,附带质控证书(COA),保障检测结果的可靠性,适配小鼠样本常规检测体系需求。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(Double Antibody Sandwich ELISA)设计而成,该方法是定量检测蛋白类靶标的金标准,具有高灵敏度、强特异性的优势[3][5]。将特异性抗该酶单克隆抗体包被于酶标板孔内,形成固相抗体;向板孔中加入待检测样本(或校准品),样本中存在的PKM2会与固相抗体特异性结合,形成抗体-抗原复合物;洗涤去除未结合的杂蛋白后,加入酶标记的该酶特异性二抗,该二抗与抗体-抗原复合物特异性结合,形成固相抗体-抗原-酶标二抗的三明治复合物;再次洗涤去除未结合的酶标二抗,加入TMB显色底物,酶催化底物发生显色反应,显色强度与样本中PKM2的浓度呈正相关[3][7];加入终止液终止反应后,在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过校准品建立的标准曲线,即可计算出样本中的具体浓度,检测范围可达到0.156-10ng/mL,灵敏度可达pg/mL级别,满足小鼠PKM2相关常规科研及药物研发检测需求,可精准捕捉低浓度PKM2的表达变化,适配肿瘤细胞、免疫细胞等样本的微量检测[1][2]。
产品特点
1. 特异性高:采用高特异性的PKM2单克隆抗体,可精准识别小鼠样本中的目标酶,与小鼠体内其他丙酮酸激酶同工酶(如PKM1)、杂蛋白及细胞因子无交叉反应,有效避免假阳性、假阴性结果,保障检测准确性,符合严格的性能标准,适配相关检测需求,可特异性识别PKM2的两种构象形式,排除其他同工酶干扰[2][6];
2. 灵敏度高:检测限可达pg/mL级别,可精准检测样本中低浓度的PKM2,满足小鼠肿瘤早期、免疫细胞功能调控初期、内皮细胞代谢异常早期等低表达场景的实验需求,适配这类低表达场景的微量检测,助力肿瘤代谢、免yi治疗等相关科研早期探究,可精准捕捉PKM2在细胞活化、代谢重编程过程中的浓度变化[1][6];
3. 操作简便:试剂盒包含所有检测所需试剂(包被板、校准品、酶结合物、底物、终止液、洗涤液等),无需额外配制核心试剂,步骤清晰,全程可在2-3小时内完成,适配常规实验室及科研检测操作,试剂外观整洁,缓冲液为透明溶液,无沉淀或絮状物,适配小鼠各类样本检测需求,贴合科研常规操作场景[7];
4. 重复性好:严格的生产质量控制体系,确保不同批次、同批次内试剂盒的检测结果一致性,变异系数(CV)低,保障相关实验及科研检测数据的可重复性和稳定性,每批次均经过严格质控验证,适配小鼠样本的批量检测,助力肿瘤代谢、免疫相关规模化科研及检测[3][7];
5. 适用范围广:可适配小鼠血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆、细胞培养上清液等多种样本类型,无需复杂前处理,适配相关科研、肿瘤代谢机制探究、免疫细胞功能调控、血管疾病研究及抗肿瘤药物筛选等检测场景,可用于PKM2活性调控、代谢重编程评价、药物作用效果检测等相关基础研究及科研应用,可满足小鼠不同组织、细胞样本的多样化检测需求[1][2][6][7];
6. 稳定性强:试剂盒各组分经特殊工艺处理,冷藏保存下活性稳定,有效期长,开封后可按要求短期保存,降低试剂浪费,且试剂批间差异小,保障检测结果的一致性,符合体外检测试剂相关规范,适配小鼠样本长期储存、批量检测需求,适配PKM2样本冻存、复苏后的检测稳定性要求[7]。
适用样本类型
本试剂盒适用于检测小鼠相关生物样本中PKM2浓度,结合小鼠样本的采集特性及PKM2的表达分布(广泛存在于肿瘤细胞、免疫细胞、内皮细胞等),具体适用样本类型包括:小鼠血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆、细胞培养上清液。
备注:(具体样本处理方法请参考产品说明书),不同样本类型的处理流程、稀释比例需严格遵循说明书要求,避免样本处理不当影响检测结果;小鼠细胞培养上清液、组织匀浆采集后需及时离心去除细胞碎片,避免杂质干扰,采集时需确保细胞处于对数生长期,保障PKM2分泌量稳定;细胞裂解液、组织匀浆制备需加入对应工作浓度的蛋白酶抑制剂,避免PKM2降解,防止靶标蛋白失活;血清、血浆样本采集后需及时离心处理,冷藏保存,尽快检测,避免反复冻融导致PKM2降解,适配科研样本的采集与保存需求[7]。
储存与注意事项
(一)储存条件
1. 未开封试剂盒:常规储存于2℃~8℃冷藏环境,避光、密封保存;严禁冷冻,避免低温导致抗原、抗体变性,影响试剂活性,尤其避免该酶相关检测试剂失活,保障试剂适配小鼠样本冻存、复苏后的检测需求[7];
2. 开封后试剂:包被板拆封后,剩余板条需密封保存于2℃~8℃,放入密封袋并加入干燥剂,避免受潮、污染;酶结合物、显色底物等开封后需避光冷藏,尽快使用,一般建议1周内用完;校准品复溶后建议当天使用,未用完部分需丢弃,不可再次保存,校准品冻干粉需用附带缓冲液溶解,具体操作参考质控证书,确保检测结果与小鼠样本检测标准一致[7];
3. 储存环境:需保持干燥、通风,湿度控制在40%~60%,避免阳光直射、高温、潮湿环境,严禁与腐蚀性、挥发性试剂混放,防止试剂失活或污染,保障检测试剂的稳定性,适配常规科研实验室储存条件[7]。
(二)注意事项
1. 试剂盒使用前需提前从冷藏环境中取出,平衡至室温(20℃~25℃),平衡时间不少于30分钟,避免温度骤变影响试剂活性及检测结果,尤其适配小鼠样本的检测稳定性;同时需注意与小鼠细胞培养温度(37℃常规培养)做好衔接,避免样本温度波动,贴合小鼠细胞培养特性[1][2];
2. 所有试剂需严格按照说明书规定的比例稀释、使用,不可随意更改试剂用量或反应时间,确保检测条件一致;稀释后的试剂需现配现用,避免长时间放置导致活性下降,保障抗体与PKM2的特异性结合效率,符合ELISA实验的规范操作要求[3][5][6];
3. 实验所用器具(EP管、吸头、酶标板等)需保持洁净,一次性器具严禁重复使用,可重复使用器具需清洗、灭菌,避免交叉污染;酶标板需轻拿轻放,避免板孔破损、划痕影响检测,小鼠样本检测所用器具需额外注意无菌处理,防止细胞污染,保障细胞培养及检测的无菌环境,贴合小鼠细胞样本的无菌要求[7];
4. 洗涤过程需充分,每步洗涤后需将酶标板倒置拍干,避免未结合的试剂残留,影响显色结果;显色反应需避光进行,终止液加入后需立即测定吸光度,避免显色过度导致结果偏差,严格遵循ELISA实验的操作规范,确保检测精度[3][5][7];
5. 样本需新鲜采集、妥善保存,避免反复冻融,若不能及时检测,小鼠细胞裂解液、组织匀浆、细胞培养上清液需按说明书要求分装冷冻保存(-80℃),血清、血浆样本可分装冷冻保存(-20℃),检测前缓慢融化并离心去除沉淀物,避免浑浊样本用于检测,贴合小鼠样本的冻存保存要求[7];
6. 实验过程中需做好个人防护,避免试剂接触皮肤、黏膜,若发生接触,需立即用大量清水冲洗;TMB显色底物具有潜在刺激性,操作时需佩戴手套、口罩;同时注意小鼠细胞、组织等生物样本的生物安全防护,避免样本泄露污染,符合科研生物安全规范[7];
7. 试剂盒过期后严禁使用,所有废弃试剂、样本需按生物安全规范妥善处理,不可随意丢弃;实验结束后,所有接触试剂的器具需清洗、灭菌后处理;本产品仅用于科研及相关科研检测用途,不适用于人体治疗及临床诊断用途,适配小鼠科研用样本的使用权限要求[1][2][6]。
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