细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit）是一种采用经典的碘化丙啶染色（Propidium staining，即PI staining）方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。

    碘化丙啶（Propidium，简称PI）是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
    碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化（DNA fragmentation）导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。
    细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
    本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。
    本试剂盒足够检测50个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

操作步骤

1.样品处理

   1）玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。

   2）细胞涂片和冰冻切片：zui重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01MPBS（PH7.0---7.6）室温下固定30—60分钟。0.01MPBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤2分钟×2次。

   3）组织：有条件时应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01MPBS（PH7.0---7.6）或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水（脱蜡务必干净）。

2.新鲜配制3%H2O2，室温处理10分钟。蒸馏水洗涤2分钟×3次。

3.标本片加0.01MTBS1:200新鲜稀释ProteinaseK37℃消化1—15分钟,0.01MTBS洗2分钟×3次。（细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化5-10分钟。陈旧石蜡切片消化10-15分钟）。

4.标本片加标记缓冲液（LabelingBuffer）20μι/片,以保持切片湿润。按每张切片取TdT2和DIG-d-UTP各1μι，加入18μι标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μι/片。置样品于湿盒中，37℃标记2小时。

5.0.01MTBS洗2分钟×3次。

6.加封闭液50μι/片，室温30分钟，甩掉封闭液，不洗。

7.用抗体稀释液1：100稀释生物素化抗地高辛抗体：（取1ml抗体稀释液加生物素化抗地高辛抗体10μι），混匀后50μι/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。0.01MTBS洗2分钟×3次。

8.用抗体稀释液1：100稀释SABC：取1ml抗体稀释液加SABC10μι，混匀后50μι/片加至切片。37℃反应30分钟。0.01MTBS洗5分钟×4次。

9.DAB显色：取1ml蒸馏水，分别加入DAB试剂盒中A，B，C试剂各一滴，混匀后加至标本片上，显色10-30分钟左右。水洗。

10.苏木素轻度复染。0.01MTBS洗，蒸馏水洗。脱水，透明，封片。显微镜观察。

保存条件：
    -20℃保存，一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液（20X）需避光保存。本试剂盒可4℃保存，一个月内有效。
注意事项：
    本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
    需自备PBS和70%乙醇，PBS（C0221A）可以向碧云天订购。
    荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
    碘化丙啶对人体有刺激性，请注意适当防护。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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