小鼠15脂加氧酶试剂盒
小鼠15脂加氧酶试剂盒是一款专门用于体外定量检测小鼠来源生物样本中15脂加氧酶(15-LOX)活性或含量的专用实验试剂组合,核心应用于基础科研领域,尤其适配小鼠炎症反应、神经退行性疾病、脂质代谢异常、铁死亡相关研究[5][7]。15脂加氧酶是一种催化多不饱和脂肪酸(如花生四烯酸)氧化的关键酶,广泛存在于小鼠巨噬细胞、小胶质细胞、肝组织、肺组织等部位,参与脂质过氧化、炎症介质合成等生理过程,其活性或含量异常与小鼠多发性硬化症、牙周炎、脂质代谢紊乱及铁死亡相关疾病密切相关,是相关疾病机制研究、药物靶点筛选的核心检测指标[5][7][8]。本试剂盒基于酶联免疫吸附(ELISA)或比色法原理设计,集成了检测所需全部试剂,具备特异性强、灵敏度高、操作便捷、结果稳定、物种针对性强等优势,可快速、精准完成小鼠各类样本中15脂加氧酶的检测,为小鼠相关科研实验提供标准化、可靠的数据支撑,适配不同科研场景的检测需求。
检测原理
本试剂盒主要采用两种核心检测原理,可根据科研需求灵活选择,确保检测精准度与适用性,且专门针对小鼠15脂加氧酶优化反应体系,避免物种交叉干扰:
其一为双抗体一步夹心法ELISA原理:酶标板预先包被小鼠15脂加氧酶特异性捕获抗体,实验时依次加入小鼠样本、标准品及HRP标记的小鼠15脂加氧酶检测抗体,经恒温温育后,抗体与样本/标准品中的15脂加氧酶特异性结合,形成“捕获抗体-15脂加氧酶-检测抗体"复合物;经彻di
洗涤去除未结合的多余试剂后,加入TMB底物液,TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,加入终止液(硫酸溶液)后变为黄色,颜色深浅与样本中小鼠15脂加氧酶的含量呈正相关,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),结合标准曲线即可计算出样本中小鼠15脂加氧酶的具体含量[1]。 其二为比色法原理:利用小鼠15脂加氧酶的催化活性,特异性催化花生四烯酸发生氧化反应,生成脂质氢过氧化物等产物;随后加入专属显色试剂,产物与显色试剂发生特异性反应,生成有色化合物,该化合物在特定波长(530-550nm)下有zui大
吸收峰,颜色深浅与样本中小鼠15脂加氧酶的活性呈正相关,通过酶标仪测定吸光度,结合标准曲线即可定量样本中15脂加氧酶的活性,适配小鼠低活性样本的精准检测[5]。 产品特点
1. 物种特异性强,无交叉干扰:采用小鼠15脂加氧酶专属特异性抗体及底物,可特异性识别小鼠来源样本中的15脂加氧酶,有效规避大鼠、人等其他物种同源蛋白及样本中杂蛋白的干扰,同时避免脂质类物质的非特异性反应,确保检测结果的准确性,批内变异系数CV<5%,板间变异系数CV<8%,保障实验数据重复性。
2. 灵敏度高,检测范围广:ELISA法检测范围通常为0.5-100ng/mL,比色法活性检测范围为1-80U/L,灵敏度可达0.2ng/mL,可精准检测小鼠低浓度、低活性样本(如小鼠小胶质细胞裂解液、血清)中的15脂加氧酶,满足不同科研样本的检测需求,标准曲线相关系数R²≥0.99,线性表现优异。
3. 操作便捷,效率高效:试剂盒包含检测所需全部试剂(酶标板、标准品、样本xi释液、检测抗体、底物液、洗涤液、终止液等)[1],无需额外配制核心试剂,实验流程简化,全程可在1-2小时内完成,适配96孔板高通量设计,单次可检测96个样本,大幅提升实验效率,新手也可轻松操作。
4. 稳定性好,保质期长:试剂经严格质检与工艺优化,冻干标准品、特异性抗体及底物活性稳定,未开封试剂盒按要求储存可稳定保存,稀释后的试剂可短期冷藏使用,避免反复冻融导致的活性下降[2],确保不同批次实验结果的一致性,保障实验重复性。
5. 适配性广,场景多元:专门适配小鼠样本检测,兼容小鼠血清、血浆、组织匀浆(肝、肺、脑、牙周组织等)、细胞裂解液(巨噬细胞、小胶质细胞等)、细胞培养液等多种样本类型[8],广泛应用于小鼠炎症反应、神经退行性疾病、脂质代谢、铁死亡等相关科研领域,适配基础科研、药物靶点筛选等实验场景。
6. 安全便捷,风险可控:优化试剂配方,无需氯仿等有毒有机溶剂[8],操作过程更安全,同时配套详细说明书,明确操作步骤、样本处理及注意事项[3],降低实验失误概率,保障实验安全与顺利进行。
适用样本类型
本试剂盒专门适配小鼠来源样本,可满足小鼠相关科研实验的多样化检测需求,具体适用样本包括:小鼠血清、血浆(EDTA或肝素抗凝)、组织匀浆(肝组织、肺组织、脑组织、牙周组织等)、细胞裂解液(巨噬细胞、小胶质细胞、成纤维细胞等)、细胞培养液。其中,组织匀浆需用预冷PBS(含蛋白酶抑制剂更佳)制备,低温离心提取[6][8];细胞样本需迅速猝灭并冷冻保存,单个样本细胞数量建议≥10^6[6];血清/血浆样本采集后需低温离心处理,避免溶血,新鲜样本优先检测。(具体样本处理方法请参考产品说明书)
储存与注意事项
(一)储存条件
1. 未开封试剂盒:需置于2-8℃避光密封保存,避免阳光直射、温度波动及潮湿环境,严禁冷冻,未开封试剂盒有效期通常为12个月,具体以说明书标注为准[2]。
2. 组分储存:冻干标准品、小鼠15脂加氧酶特异性抗体、底物液等核心组分需置于-20℃避光保存,避免反复冻融(≤3次),防止活性丧失[2];浓缩洗涤液、样本xi释液可在2-8℃冷藏保存;TMB底物液需避光保存,避免氧化失效。
3. 稀释后试剂:稀释后的洗涤液、样本xi释液可在4℃冷藏保存,1周内用完;稀释后的标准品、抗体需现配现用,未用完的可短期冷藏,避免反复冻融及光照[3]。
4. 运输条件:运输时采用凝胶冷藏包,确保试剂温度稳定在2-8℃,避免剧烈震荡、暴晒及ji端
温度,防止试剂失效,尤其注意保护抗体及底物,避免光照直射。 (二)注意事项
1. 实验全程需严格遵循无菌操作规范,实验器具需提前高压灭菌处理[8],加样时使用无菌枪头,避免试剂及样本污染,尤其是细胞裂解液和组织匀浆样本,污染会导致检测结果偏高。
2. 试剂使用前需从冰箱取出,置于室温(25℃左右)平衡30分钟以上,避免温差导致冷凝水干扰实验[3];试剂配制及加样时动作轻柔,避免剧烈震荡,防止试剂失效或样本中小鼠15脂加氧酶变性,抗体与样本孵育时避免剧烈晃动。
3. 孵育及显色过程需严格控制温度和时间,尤其是显色反应需避光进行,避免光照影响显色效果[3];终止反应后需在10分钟内完成读数,防止颜色消退,确保检测数据稳定,同时避免过度孵育导致非特异性显色。
4. 不同批次的试剂不可混用,试剂盒配套试剂需单独使用,避免与其他试剂盒试剂交叉使用,防止干扰实验结果[3];实验结束后,废弃试剂及耗材需按生物安全规范妥善处理,避免污染环境。
5. 操作含硫酸的终止液及显色试剂时,需佩戴手套、口罩,避免皮肤接触及吸入,防止刺激伤害;实验台面需保持清洁,避免试剂洒落,若不慎接触皮肤,需立即用大量清水冲洗。
6. 若样本中小鼠15脂加氧酶活性或含量超出检测范围,需适当稀释后重新检测,不可直接检测,以免导致结果偏差;检测过程中可设置阳性对照和空白对照,确保实验体系正常,阳性对照孔吸光度需落在标准曲线范围内,否则提示实验失效;样本需新鲜采集处理,避免长时间放置导致15脂加氧酶降解[6]。
订购信息
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