上海乾思生物
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
生命科学产品一站式供应商
服务热线：021-34556080
产品型号：
更新时间：2025-10-29
厂商性质：代理商
访 问 量 ：865
021-34556080
相关文章
NEC人食管癌细胞
NEC人食管癌细胞是食管癌基础研究与临床转化领域的重要体外模型，源自人食管癌组织，经体外分离、纯化及长期传代驯化建立。该细胞完整保留了临床食管癌的核心恶性特征，如快速增殖能力、侵袭转移潜能及癌相关分子表型，同时具备体外培养稳定、实验重复性高的优势，在食管癌发病机制解析、肿瘤侵袭转移研究、抗肿瘤药物筛选及放敏感性评估中发挥关键作用，为食管癌科研与临床治疗方案优化提供重要实验支撑。
一、核心生物学特性
（一）组织来源与细胞属性
NEC 细胞源自人食管鳞状细胞癌（或腺癌，依具体亚型而定）组织，与体内食管癌组织的病理特征高度契合。作为上皮源性肿瘤细胞系，其核心价值在于：一是病理相关性强，保留食管癌典型的恶性表型，如细胞异形性、无限增殖能力、侵袭突破基底膜的潜能，可模拟食管癌体内生长与转移过程；二是分子特征稳定，长期传代（50 代以内）仍维持食管癌相关标志物的表达，无显著表型漂移，确保实验结果的可靠性；三是临床关联性高，部分亚系源自临床耐药患者肿瘤组织，可用于耐药机制研究与逆转耐药药物筛选，直接贴合临床治疗需求。
（二）形态与生长特征
体外培养时，NEC 细胞以贴壁生长为主，细胞形态呈上皮样特征：多为多边形或不规则圆形，胞质丰富，部分细胞可见明显的胞质颗粒（与肿瘤细胞代谢活跃相关）；细胞核大而畸形，核仁明显（2-3 个），染色质分布不均，核分裂象频繁（可见异常分裂象，如多极分裂），体现肿瘤细胞的核型异常特征。
细胞增殖能力旺盛，倍增时间约 28-36 小时，传代 50 代以内增殖速率无显著下降；无明显接触抑制特性，汇合后可叠加生长形成多层细胞，易出现细胞聚集现象（需及时传代避免营养耗尽）。常规接种密度以 3×10⁴-5×10⁴ cells/cm² 为宜，接种后 12-16 小时开始贴壁，24 小时贴壁率达 80% 以上，48-72 小时进入对数生长期，72-96 小时汇合度可达 90%，此时需及时传代以维持细胞活性与恶性表型稳定。
（三）分子表型与恶性功能特性
分子层面，NEC 细胞呈现典型的食管癌分子表型：一是高表达食管癌相关标志物，如细胞角蛋白 19（CK19，上皮源性肿瘤特征蛋白）、癌胚抗原（CEA，消化道肿瘤广谱标志物）、鳞状细胞癌抗原（SCC，食管鳞癌特异性标志物），阳性率均达 85% 以上，可通过免疫荧光、Western blot 或流式细胞术验证细胞身份；二是异常表达肿瘤增殖与侵袭相关分子，如增殖细胞核抗原（PCNA，增殖活性指标）、基质金属蛋白酶 2/9（MMP-2/9，促进肿瘤侵袭）、血管内皮生长因子（VEGF，促进肿瘤血管生成），这些分子的高表达是其恶性特征的核心分子基础。
功能上，NEC 细胞具备食管癌的关键恶性功能：一是强侵袭转移能力，体外 Transwell 实验中，细胞可高效穿过基质胶（侵袭率达 40%-60%），划痕实验中 24 小时划痕愈合率达 70% 以上，模拟体内肿瘤侵袭转移过程；二是耐药潜能，部分亚系对临床常用抗肿瘤药物表现出天然耐药性，耐药指数较敏感细胞高 3-5 倍，可用于耐药机制研究；三是锚定非依赖性生长能力，软琼脂克隆形成实验中可形成明显克隆（克隆形成率达 30%-50%），体现肿瘤细胞的恶性转化特性。
二、体外培养与操作规范
（一）基础培养体系配置
NEC 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置培养基以维持其恶性特征：
培养基选择：优先使用RPMI-1640 培养基（含 25mM HEPES 缓冲液、1mM 丙酮酸钠），该培养基能更好支持上皮源性肿瘤细胞生长；若使用 DMEM 培养基，需额外添加 1% 非必需氨基酸，否则细胞增殖速率会下降 20% 以上；
血清与添加剂：添加 10%-15% 胎牛血清（需筛选高营养批次，含足量生长因子支持肿瘤细胞增殖），加入 1% 抗菌试剂预防细菌污染；无需额外添加生长因子，细胞可通过自分泌维持恶性增殖；
培养环境：温度控制在 37℃±0.5℃，CO₂浓度维持 5%±0.2%，湿度保持 95%±2%，pH 稳定在 7.2-7.4，渗透压 280-320mOsm/kg；使用普通细胞培养瓶（无需涂层，上皮细胞贴壁能力较强），建议每 2-3 天更换一次培养基，更换时保留 1/4 旧培养基，减少环境波动对细胞恶性表型的影响。
（二）传代与功能维持操作
传代时机：当细胞汇合度达 85%-90% 时需及时传代（通常每 2-3 天一次），避免过度汇合导致细胞脱落或出现衰老迹象（如细胞体积增大、增殖减缓）。传代比例按 1:3-1:5 稀释，稀释比例可根据实验需求调整 —— 快速扩增选 1:3，维持细胞状态选 1:5。
传代步骤：
弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（动作缓慢，避免冲刷损伤贴壁细胞）；
加入含 0.02% EDTA 的消化液（25cm² 培养瓶加 1mL），37℃孵育 2-3 分钟（上皮源性肿瘤细胞贴壁力较强，消化时间稍长），显微镜下观察到细胞边缘收缩、间隙增大时，立即加入 2-3 倍体积含血清培养基终止消化；
用移液器轻轻吹打培养瓶底部（力度适中，避免产生气泡破坏细胞），使细胞wan全脱落并分散为单个细胞，收集细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清后用新鲜培养基重悬，按预设比例接种至新培养瓶。
功能维持要点：长期传代易导致细胞侵袭能力下降，需每 10 代检测一次 Transwell 侵袭率（确保≥40%）；若侵袭率下降，可在培养基中添加 5ng/mL TGF-β（轻度激活侵袭相关信号通路）培养 24 小时，促进功能恢复；同时避免频繁更换血清批次，每次更换后需适应培养 2-3 代，待细胞增殖与侵袭功能稳定后再用于实验。
（三）冻存与复苏要点
冻存准备：选择对数生长期、功能正常的细胞（活力≥90%，侵袭率≥40%），冻存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培养基" 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 缓慢滴加并轻柔混匀，防止温度骤降导致细胞结冰损伤。
冻存流程：将细胞消化为单细胞悬液后离心（1000×g，5 分钟），弃上清；用预冷冻存液重悬细胞，调整浓度为 8×10⁶-1×10⁷ cells/mL（高于普通细胞冻存浓度，提升复苏成功率），分装至冻存管；采用程序降温法：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃放置 12 小时→转入液氮长期保存，也可使用程序降温盒直接置于 - 80℃，简化操作流程。
复苏操作：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速解冻（60-90 秒内wan全融化）；将细胞悬液缓慢加入 10 倍体积预热的含血清培养基，轻轻混匀后离心（1000×g，5 分钟）去除 DMSO；用新鲜培养基重悬细胞并接种至培养瓶，培养 24 小时后更换培养基，去除死细胞与残留 DMSO；复苏后 48 小时细胞活力可恢复至 85% 以上，72 小时后可正常检测增殖与侵袭功能，确保无显著损伤。
三、主要研究应用场景
（一）食管癌发病机制研究
NEC 细胞是解析食管癌恶性进展机制的核心工具：
增殖信号通路研究：通过 Western blot 检测细胞中 PI3K/Akt、MAPK/ERK 等增殖相关信号通路蛋白的磷酸化水平，明确通路激活状态；例如，NEC 细胞中 Akt 磷酸化水平较正常食管上皮细胞高 6-8 倍，抑制 PI3K 活性后，细胞增殖率下降 50% 以上，证实该通路在食管癌增殖中的关键作用；
侵袭转移机制研究：通过 RNA 干扰或基因敲除技术（如敲除 MMP-9），观察细胞侵袭能力与划痕愈合率变化，研究基因对食管癌转移的调控作用；敲除 MMP-9 后，Transwell 侵袭率下降 60%，证实其为食管癌侵袭的关键效应分子。
（二）抗肿瘤药物筛选与敏感性评估
依托其临床关联性，NEC 细胞广泛用于食管癌药物研发：
药物筛选：将临床常用抗肿瘤药物与细胞共培养，通过 CCK-8 法检测药物对细胞增殖的抑制率，计算 IC50 值（半数抑制浓度），筛选高效药物；
靶向药物研发：针对 NEC 细胞高表达的靶点（如 EGFR、VEGF），将候选靶向药物与细胞共培养，检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化，评估药物疗效；例如，EGFR 抑制剂处理后，细胞增殖率下降 40%，凋亡率升高 35%，提示其潜在治疗价值。
（三）耐药机制研究与逆转策略探索
部分 NEC 细胞亚系的耐药特性，使其成为耐药研究的理想模型：
耐药机制解析：对比耐药型与敏感型 NEC 细胞的基因表达差异（通过 qPCR 或测序），筛选耐药相关基因（如 ABC 转运蛋白家族基因）；耐药型 NEC 细胞中 ABC B1 基因表达量较敏感型高 10-15 倍，抑制该基因表达后，细胞对相关药物的敏感性提升 4 倍，证实其为耐药关键基因；
耐药逆转研究：将耐药逆转剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂）与耐药 NEC 细胞共培养，检测药物 IC50 值变化，评估逆转效果；例如，添加逆转剂后，相关药物对耐药细胞的 IC50 显著降低，恢复药物敏感性，为临床逆转食管癌耐药提供实验依据。
Copyright © 2025 上海乾思生物科技有限公司版权所有 备案号：沪ICP备2023041625号-1
技术支持：化工仪器网 管理登录 sitemap.xml
当前位置：
上一个：
返回列表
