NCI-H661人大细胞肺癌细胞源自人大细胞肺癌组织，贴壁生长，具强恶性（增殖快、侵袭转移强），表达癌标志物，是大细胞肺癌机制、药物筛选的重要模型。

NCI-H661人大细胞肺癌细胞

NCI-H661人大细胞肺癌细胞是肺癌研究领域中针对大细胞肺癌（LCLC）的关键肿瘤模型，源自人肺大细胞癌组织（非小细胞肺癌中恶性度高、预后差的少见亚型），经体外分离纯化与传代驯化建立。该细胞完整保留大细胞肺癌 “分化差、增殖快、侵袭强" 的核心病理特征，传代 40 代内仍维持亚型特异性分子表型，成为研究大细胞肺癌发病机制、抗肿瘤药物筛选及治疗耐药的核心载体，为这一难治性肺癌亚型的科研突破与临床转化提供重要支撑。

一、核心生物学特性

（一）组织来源与细胞属性

NCI-H661 细胞源自临床大细胞肺癌患者的肿瘤组织，与体内肿瘤细胞的遗传背景、病理特征高度一致。其核心优势体现在三方面：一是亚型特异性突出，保留大细胞肺癌典型的未分化形态与恶性表型，可模拟体内肿瘤在肺部微环境中的生长、浸润及远处转移过程；二是分子特征明确，高表达大细胞肺癌相关标志物，且存在 p53 突变、PTEN 缺失等高频遗传异常，与临床患者分子谱匹配，适合机制研究；三是培养稳定性强，体外以贴壁生长为主，无需复杂生长因子即可维持活性，实验重复性达 90% 以上，满足大规模研究需求。

（二）形态与生长特征

体外培养时，NCI-H661 细胞呈现典型大细胞肺癌形态：细胞体积大（直径 15-25μm，显著大于其他肺癌亚型），呈多边形或不规则梭形，胞质丰富且含粗大颗粒（为异常聚集的细胞器，反映未分化特性）；细胞核大而畸形，核质比高，核仁明显（2-3 个），染色质分布不均，核分裂象频繁（倍增时间 48-60 小时），体现高恶性增殖特性。

细胞无接触抑制，汇合度达 90% 后仍可叠加生长；常规接种密度为 2×10⁴-4×10⁴ cells/cm²（因细胞体积大，密度低于其他肺癌细胞），接种后 24-36 小时贴壁，48 小时贴壁率超 90%，72-96 小时进入对数生长期，120-144 小时汇合度达 85%-90%，需及时传代避免细胞老化（表现为体积增大、增殖减缓）。

（三）分子表型与恶性功能特性

分子层面，NCI-H661 细胞呈现特异性表型：一是高表达肺癌标志物，如细胞角蛋白 18（CK18，阳性率≥85%）、甲状腺转录因子 1（TTF-1，阳性率≥75%），可通过免疫荧光或 Western blot 验证身份；二是异常表达肿瘤相关分子，如 MMP-9（促侵袭酶，表达量较正常肺上皮高 8 倍）、VEGF（促血管生成因子）、Bcl-xL（抗凋亡蛋白），为恶性功能提供分子基础；三是存在高频遗传异常，p53 基因突变率超 70%、PTEN 缺失率约 50%，驱动肿瘤增殖与耐药。

功能上，该细胞具备三大恶性特征：一是强侵袭转移能力，Transwell 实验中侵袭率达 45%-60%，划痕实验 24 小时愈合率超 75%，可模拟肺癌突破组织屏障的过程；二是锚定非依赖性生长，软琼脂克隆形成率 35%-45%，体现恶性转化特性；三是药物敏感性特征，对部分广谱抗肿瘤药物存在一定敏感性，适合药物筛选与敏感性对比研究。

二、体外培养与操作规范

（一）基础培养体系配置

NCI-H661 细胞对培养条件要求中等，需针对性配置体系：

（二）传代与功能维持操作

传代时机：汇合度 85%-90% 时传代（每 5-6 天一次），传代比例 1:2-1:3（因细胞体积大，比例低于其他肺癌细胞）。

传代步骤：

功能维持：每 8-10 代检测 MMP-9 表达（阳性率≥80%）与侵袭率（≥45%）；若功能下降，加 5ng/mL EGF 培养 24 小时激活信号通路，促进功能恢复；避免频繁换血清，每次更换后适应 2-3 代再用于实验。

（三）冻存与复苏要点

冻存准备：选对数期细胞（活力≥90%，CK18 阳性率≥80%），冻存液为 “10% DMSO+20% 血清 + 70% RPMI-1640"，冰浴操作避免细胞损伤。

冻存流程：细胞悬液离心后重悬，浓度 6×10⁶-8×10⁶ cells/mL（体积大，浓度低于其他肺癌细胞），分装后程序降温（4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃12 小时→液氮保存）。

复苏操作：冻存管 37℃水浴 60-90 秒融化，加 10 倍预热培养基离心去 DMSO，重悬接种后 24 小时换液；48 小时活力恢复至 85% 以上，72 小时检测标志物表达，一周后可实验。

三、主要研究应用场景

（一）大细胞肺癌机制研究

NCI-H661 细胞是解析发病机制的核心工具：

（二）抗肿瘤药物筛选与评估

依托临床相关性，该细胞广泛用于药物研发：

（三）耐药机制与逆转研究

大细胞肺癌易耐药，该细胞是理想模型：