A7d小鼠骨髓细胞（野生型人c-kit基因修饰）

A7d小鼠骨髓细胞（野生型人c-kit基因修饰），通过基因工程技术将人源c-kit基因导入小鼠骨髓细胞并实现功能性表达，既保留小鼠骨髓细胞的造血干/祖细胞特性，又具备人c-kit受体的信号响应模式，成为研究人c-kit信号通路、造血调控及相关疾病的核心实验材料，在血液学与肿瘤学领域应用广泛。

生物学特性上，A7d细胞呈现典型的骨髓造血细胞形态，显微镜下以圆形或椭圆形为主，部分造血祖细胞呈梭形，胞质透亮，细胞核大而圆，染色质疏松，以半悬浮方式生长，群体倍增时间约为36-48小时。其核心特征是野生型人c-kit基因的稳定表达——c-kit作为造血干细胞关键表面受体，与干细胞因子（SCF）结合后激活PI3K/Akt、MAPK等信号通路，调控细胞增殖、分化与存活，该细胞系在SCF刺激下增殖活性提升2-3倍，且造血分化方向可控，传代至40代后仍维持人c-kit表达及正常核型（小鼠二倍体核型，40条染色体）。

精准的培养条件是维持基因修饰功能的关键。A7d细胞需在含10%胎牛血清、50ng/mL小鼠干细胞因子（mSCF）的IMDM培养基中生长，添加1%广谱抗菌双抗预防污染，培养环境控制为37℃、5%二氧化碳及饱和湿度。传代时无需yi酶消化，通过轻柔吹打即可分散细胞，传代比例以1:4至1:6为宜，细胞密度维持在5×10⁵-2×10⁶个/mL，避免密度过低导致c-kit表达下调。

冻存与复苏需保障基因修饰功能完整性。冻存液采用含10%二甲基亚砜（DMSO）、20%胎牛血清、20ng/mL mSCF的IMDM培养基配制，细胞密度调整为1×10⁷-3×10⁷个/mL后，经4℃预冷30分钟、-20℃冷冻1小时、-80℃过夜的梯度降温，最终转入液氮保存。复苏时37℃水浴快速解冻，离心后用含双倍mSCF的培养基重悬，24小时后更换常规培养基，细胞存活率达85%以上，人c-kit表达率维持在90%以上。

细胞鉴定需结合基因、分子及功能三重验证。基因层面，通过PCR可检测到人c-kit基因整合，Western Blot验证其蛋白表达；分子层面，高表达造血干/祖细胞标志物Sca-1、CD34，同时人c-kit受体阳性率＞90%；功能层面，SCF刺激后磷酸化Akt水平显著升高，造血分化实验中可定向分化为红细胞、粒细胞及巨核细胞系，且分化效率受c-kit信号调控，明确其功能活性。

研究应用中，A7d细胞展现独te价值。基础研究中，用于解析人c-kit信号通路调控机制，如探索SCF-c-kit互作对造血干细胞自我更新的影响，以及信号异常与造血功能紊乱的关联；肿瘤研究中，模拟c-kit阳性肿瘤（如胃肠道间质瘤、急性髓系白血病）的信号特征，筛选人c-kit靶向抑制剂，评估药物对信号通路的抑制效果；基因治疗研究中，作为人源基因修饰的骨髓细胞模型，验证c-kit相关基因治疗载体的安全性与有效性；此外，还可用于造血损伤修复研究，评估干细胞因子在骨髓造血功能重建中的作用。