AML-12小鼠正常肝细胞

AML-12小鼠正常肝细胞源自BALB/c小鼠骨髓，经体外诱导分化建立稳定细胞系。以典型的巨噬细胞表型、完整的免疫功能及良好的实验可塑性，成为炎症反应、抗感染免疫、肿瘤免疫等领域研究的核心工具，为解析免疫调控机制提供了标准化体外平台。AN3CA人子宫内膜腺癌(转移)细胞系源自人子宫内膜腺癌的淋巴结转移灶，经体外分离纯化后建立稳定细胞系。以突出的转移潜能、典型的子宫内膜癌细胞表型及明确的激素受体表达特征，成为子宫内膜癌转移机制、靶向治疗及耐药研究的核心工具，为攻克子宫内膜癌转移难题提供了精准的体外研究平台。

该细胞系的核心优势是模拟体内正常肝细胞的表型与功能，与原代肝细胞相比，不仅增殖能力更强，还能稳定表达肝细胞特异性标志物如白蛋白（ALB）、细胞色素P450酶系（CYP450）及肝细胞核因子4α（HNF4α）。其保留的关键生理功能包括糖脂代谢、胆汁酸合成、药物解毒及蛋白分泌，这些特性使其成为研究肝脏生理功能及病理损伤机制的精准模型。

AML-12细胞呈现典型的正常肝细胞生物学特性。形态学上呈多边形或多角形，贴壁生长时排列紧密，部分区域形成类似肝小叶的索状结构，胞质丰富且含细小颗粒，细胞核圆形居中、核仁清晰，细胞间可见胆小管样结构。增殖活性稳定，标准培养条件下种群倍增时间约48-72小时，传代40代内可保持肝细胞核心表型，无明显恶性转化特征。

AN3CA细胞呈现典型的子宫内膜腺癌转移细胞生物学特性。形态学上呈梭形或不规则形，贴壁生长时排列紊乱无极性，部分细胞呈梭形间质样改变，胞质丰富，细胞核大而畸形，核仁明显增多，核分裂象易见。增殖活性旺盛，标准培养条件下种群倍增时间约48-60小时，传代40代内可稳定保持转移相关表型，细胞黏附能力与体外侵袭能力均显著高于非转移型子宫内膜癌细胞系。

Ana-1细胞呈现典型的巨噬细胞生物学特性。形态学上呈不规则形，贴壁生长时可见明显伪足，胞质丰富且含吞噬颗粒，细胞核呈肾形或不规则形、核仁清晰。增殖活性稳定，标准培养条件下种群倍增时间约48-72小时，传代40代内可保持巨噬细胞核心表型，经LPS或IFN-γ诱导后可极化为M1型（促炎型），经IL-4诱导可极化为M2型（抗炎修复型）。

体外培养的关键是维持其正常生理功能与分化状态。适宜环境为37℃、5%CO₂恒温培养箱，基础培养基推荐使用含10%胎牛血清的DMEM/F12混合培养基，添加5μg/ml胰岛素、5μg/ml转铁蛋白及10ng/ml表皮生长因子以维持肝细胞特性。传代需在细胞融合度80%-90%时进行，采用温和消化液处理3-5分钟，避免过度消化破坏细胞间连接，吹打时动作轻柔防止细胞形态损伤。冻存用含10%二甲基亚砜、20%胎牛血清的培养基作为保护剂，细胞浓度2×10⁶个/ml，梯度降温后液氮保存，复苏存活率可达85%以上。

体外培养的关键是维持其高转移表型与活性。适宜的培养环境为37℃、5%CO₂的恒温培养箱，基础培养基推荐使用含10%-15%胎牛血清的RPMI-1640培养基，添加1%非必需氨基酸以满足细胞高代谢需求。传代操作需在细胞融合度达到70%-80%时进行，此时细胞转移相关分子表达zuiwen定，采用消化液轻柔处理2-3分钟，待细胞边缘收缩后立即终止消化，避免过度处理破坏细胞表面黏附分子。冻存时使用含10%二甲基亚砜、20%胎牛血清的培养基作为保护剂，细胞浓度1×10⁶个/ml，梯度降温后液氮保存，复苏存活率可达80%以上。

体外培养的关键是维持其免疫功能与极化潜能。适宜环境为37℃、5%CO₂恒温培养箱，基础培养基推荐使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，添加20ng/ml M-CSF以强化巨噬细胞特性。传代需在细胞融合度70%-80%时进行，采用温和消化液处理3-5分钟，避免过度消化破坏细胞表面受体，吹打时动作轻柔防止伪足损伤。冻存用含10%二甲基亚砜、20%胎牛血清的培养基作为保护剂，细胞浓度2×10⁶个/ml，梯度降温后液氮保存，复苏存活率可达85%以上。

科研应用中，AML-12细胞的价值贯穿肝脏研究多领域。肝脏代谢研究方面，其完整的糖脂代谢通路使其成为解析脂肪肝发病机制的理想模型，可通过高脂诱导观察细胞脂质堆积及代谢相关基因表达变化。药物肝毒性评价中，利用其高表达的CYP450酶系，模拟药物在体内的代谢过程，检测药物及其代谢产物对肝细胞的毒性作用，为药物研发提供安全性数据。

科研应用领域中，AN3CA细胞的价值集中于转移相关研究。转移机制解析方面，可通过Transwell侵袭实验、划痕愈合实验模拟体外转移过程，结合蛋白质组学技术筛选转移相关差异基因，揭示子宫内膜癌从原发灶侵袭、进入淋巴系统到淋巴结定植的分子调控网络。肿瘤微环境研究中，其与免疫细胞、基质细胞的相互作用模型，可用于探索微环境对转移的促进机制。

科研应用中，Ana-1细胞的价值贯穿免疫研究多领域。炎症机制研究方面，可通过LPS诱导构建炎症模型，检测TNF-α、IL-6等炎症因子分泌变化，解析NF-κB等炎症信号通路的调控机制。抗感染研究中，用于模拟巨噬细胞吞噬细菌、病毒的过程，评估病原体对巨噬细胞功能的影响及免疫逃逸机制。

肝损伤研究领域，可通过过氧化氢、对乙酰an基酚等诱导构建肝损伤模型，观察细胞凋亡、炎症因子释放及肝功能指标（如ALT、AST）变化，解析肝损伤的分子机制及修复过程。基因功能研究中，其高效的外源基因转染效率使其成为肝脏相关基因（如HNF4α、CYP3A4）功能验证的优质载体。此外，该细胞系还用于肝靶向药物递送系统的研发，评估药物载体的肝细胞靶向性与生物安全性。

药物研发领域，AN3CA细胞是抗转移药物筛选的核心工具，尤其适用于针对MMPs、VEGF等转移相关靶点的药物活性评估，可通过CCK-8法、Transwell实验等快速检测药物对细胞增殖及侵袭能力的抑制效果。耐药机制研究中，通过诱导建立耐药细胞亚系，对比分析敏感与耐药细胞的基因表达差异，为筛选耐药逆转靶点提供依据。体内实验中，将其接种于免疫缺陷小鼠可构建淋巴结转移模型，用于评估药物的体内抗转移疗效与安全性。

肿瘤免疫研究领域，是免yi治疗药物筛选的核心工具，可评估药物对巨噬细胞极化的调控作用，观察M1型巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤效果，或探索M2型巨噬细胞的免疫抑制机制。细胞吞噬功能研究中，利用荧光标记的乳胶颗粒或细菌，量化分析Ana-1细胞的吞噬活性，为吞噬相关基因功能验证提供支撑。此外，该细胞系还用于自身免疫病研究，模拟巨噬细胞异常活化在疾病发生中的作用。

培养需特别注意：细胞生理功能易受培养条件影响，血清批次更换或生长因子浓度变化可能导致表型漂移；长期培养应定期通过Western Blot检测白蛋白、CYP450等标志物，验证肝细胞表型稳定性；建议使用30代以内细胞进行实验，避免传代过久导致功能衰减；进行STR分型鉴定与支原体检测，及时更换培养基清除代谢废物，维持细胞良好生理状态。

培养过程中需特别注意：细胞的转移潜能易受培养条件影响，长期血清浓度异常或pH值波动可能导致侵袭能力下降；建议使用30代以内的细胞进行实验，以避免长期传代导致的遗传漂变；定期通过流式细胞术检测细胞角蛋白7、MMP-9等标志物验证细胞表型，同时进行STR分型鉴定与支原体检测，确保细胞身份准确及无微生物污染，及时更换培养基清除代谢废物。

培养需特别注意：细胞免疫功能易受环境影响，血清批次更换前需进行吞噬功能验证；长期培养应定期通过流式细胞术检测CD11b、F4/80标志物，确保巨噬细胞表型稳定；建议使用30代以内细胞进行实验，避免传代过久导致免疫功能衰减；进行STR分型鉴定与支原体检测，及时更换培养基清除分泌的炎症因子，维持细胞良好活性。