HFL-I人胚肺成纤维细胞源自人胚胎肺组织，贴壁生长，参与肺基质合成与损伤修复，用于肺纤维化、肺部疾病机制及呼吸相关药物筛选研究。

HFL-I人胚肺成纤维细胞源自孕中期健康人胎儿肺组织（侧重肺间质区，该区域是肺结构支撑与损伤修复的核心部位），经原代酶解（胶原酶消化）、差速贴壁纯化获得，属典型梭形成纤维细胞系，保留肺成纤维细胞专属功能，增殖周期稳定（传代次数 15-20 代，每代周期约 72-96 小时），是研究肺部发育、肺纤维化及呼吸系统疾病的理想体外模型，广泛应用于呼吸病学、细胞生物学及药理学领域。

细胞形态均一且具特征性：贴壁生长时呈长梭形或纺锤形，排列呈平行状或漩涡状，胞体直径 10-16μm，胞质丰富且含大量平行排列的微丝（电镜下可见微丝束，为细胞收缩与胶原合成提供结构基础）；细胞核呈椭圆形、位于细胞中央，核仁清晰，染色质呈细网状，正常培养条件下核分裂象偶见（比例约 1%-2%），符合胚胎来源细胞增殖特性。体外培养时，细胞形态受外界信号调控：在纤维化诱导条件下（如添加 TGF-β1），细胞体积增大，胞质微丝增多，呈 “肌成纤维细胞样" 改变（α-SMA 表达升高）；在抗炎药物作用下，细胞形态恢复细长梭形，分泌功能减弱，精准模拟体内肺间质细胞的功能状态转换。

核心功能集中在三方面：一是肺基质合成与重构功能，可大量分泌肺间质特异性基质成分，如 I 型胶原（占分泌胶原总量的 70%-80%）、III 型胶原（维持肺组织弹性）及透明质酸（调节肺间质含水量），其中 I 型胶原分泌量达 12μg/mL/24h（ELISA 检测）；同时表达基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）与组织抑制剂（TIMP-1），通过二者平衡调控胶原降解，维持肺间质稳态。二是肺损伤修复功能，对肺损伤相关因子敏感：10ng/mL PDGF 处理 24 小时，细胞增殖率提升 30%，迁移能力增强（划痕实验 24 小时愈合率达 60%）；10ng/mL EGF 处理后，细胞分泌的上皮修复因子（如 KGF）增加 40%，协同促进肺上皮细胞再生，模拟肺损伤后的修复过程。三是肺部炎症调节功能，对炎症因子呈剂量依赖性响应：10ng/mL IL-1β 处理 24 小时，促炎因子（IL-6、TNF-α）分泌量分别达 35pg/mL、28pg/mL（空白组分别为 8pg/mL、6pg/mL）；10ng/mL TGF-β3 处理后，抗炎因子（IL-10）表达升高 5 倍，可抑制过度炎症反应，体现肺部炎症平衡调控能力。

分子表型鉴定明确：细胞高表达肺成纤维细胞特异性标志物 —— 波形蛋白（Vimentin，免疫荧光阳性率≥95%）、成纤维细胞特异性蛋白 1（FSP1，阳性率≥90%）；同时表达肺间质细胞特征分子 ——CD90（细胞膜阳性率≥85%）、纤连蛋白（FN，胞质阳性率≥90%），其中 Vimentin⁺FSP1⁺双阳性细胞占比≥95%，是细胞身份的核心标志。信号通路方面，TGF-β/Smad 通路（Smad2、Smad3 磷酸化水平高）调控胶原合成与纤维化，PI3K/Akt 通路（Akt 磷酸化率≥30%）介导细胞增殖与迁移，NF-κB 通路（p65 核转位率≥25%）参与炎症反应，三者协同维持细胞功能。核型分析显示为 46,XX/XY 正常二倍体，染色体畸变率 < 1%，裸鼠皮下接种 8 周无肿瘤形成，安全性可靠。

培养需精准控制营养与环境参数，以维持细胞肺间质功能：

• 培养基配置：采用 DMEM/F12（1:1）混合培养基，添加 10% 胎牛血清（需筛选批次，确保 PDGF 含量≤2pg/mL，避免干扰细胞功能）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、50μg/mL 抗坏血酸（促进胶原合成）。培养基 pH 值严格控制在 7.2-7.4（偏离 0.2 会导致胶原合成量下降 30%），渗透压 280-300 mOsm/kg（过高易导致细胞脱水，影响微丝结构）。开展肺纤维化实验时，需用 5% FBS 培养基饥饿 12 小时，减少血清因子干扰；维持基质合成功能需添加 10ng/mL 胰岛素，促进透明质酸合成。

• 环境参数：培养箱温度稳定在 37℃±0.5℃（温度波动 ±1℃会使增殖率下降 25%，胶原合成减少 20%），CO₂浓度 5%±0.3%（过低导致 pH 升高，过高抑制抗坏血酸活性），相对湿度≥95%（避免培养基蒸发浓缩，影响因子浓度）。模拟肺部低氧环境（如肺损伤后缺氧，氧浓度 5%-8%）时，需通入氮气调节氧浓度，诱导 HIF-1α 表达（Western blot 检测灰度值升高 1.8 倍），用于研究缺氧对肺间质重构的影响。

• 传代操作：细胞融合度达 80%-90% 时传代，操作步骤如下：①无菌 PBS 轻柔清洗 2 次（每次 1 分钟，避免破坏细胞间连接）；②加入 0.25% 含 EDTA 的消化液，37℃孵育 4-6 分钟（镜下观察细胞间隙增大、胞体收缩变圆）；③加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打（吹打次数≤8 次，避免细胞破碎）；④1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬；⑤按 1:3 比例接种至普通培养皿（无需包被，细胞贴壁率≥90%）。传代超过 18 代后，细胞功能开始衰减（胶原合成量降至 8μg/mL 以下），需及时冻存备用。

• 培养注意事项：细胞对血清批次敏感，不同批次血清可导致胶原分泌量波动 35%，需通过预实验筛选；每 3 天换液 1 次（换液量为培养基总量的全量，因细胞代谢旺盛，旧液中代谢废物易积累）；每 5 代检测细胞功能（胶原分泌量≥10μg/mL、α-SMA 基础阳性率≤5%）；需加强无菌操作，预防细菌污染（肺成纤维细胞对细菌毒素敏感，污染后易出现细胞凋亡）。