HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞源自人胚胎眼巩膜组织，贴壁生长，参与巩膜基质合成与修复，用于青光眼巩膜重塑、眼轴发育及眼科药物筛选研究。

产品型号：

更新时间：2025-11-12

厂商性质：代理商

访问量：520

服务热线

021-34556080

立即咨询

产品分类

PRODUCT CLASSIFICATION

细胞/细菌培养试剂

血清细胞株

产品介绍

HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞

一、细胞基本生物学特性

HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞源自孕中期健康人胎儿眼巩膜组织（侧重巩膜基质层，该区域是巩膜结构支撑与重塑的核心部位），经原代酶解（胶原酶联合消化）、差速贴壁纯化及体外连续传代建株，属单一梭形成纤维细胞系。细胞形态均一，呈典型长梭形或纺锤形，贴壁生长时排列呈平行状或漩涡状，胞体直径 10-16μm，胞质丰富且含大量平行排列的微丝（电镜下可见微丝束，为细胞收缩与胶原合成提供结构基础），细胞核呈椭圆形、位于细胞中央，核仁清晰，染色质呈细网状，正常培养条件下核分裂象偶见（比例约 1%-2%），符合胚胎来源成纤维细胞增殖特性。

该细胞保留眼巩膜成纤维细胞专属功能，增殖周期稳定（传代次数 15-20 代，每代周期约 72-96 小时），核心功能集中在三方面：一是巩膜基质合成功能，可大量分泌 I 型胶原（占分泌胶原总量的 80% 以上）、III 型胶原（约 10%-15%）及蛋白多糖（如硫酸皮肤素、硫酸角质素），其中 I 型胶原分泌量达 15μg/mL/24h（ELISA 检测），构建巩膜组织的结构骨架；同时表达胶原酶（MMP-1）与胶原酶抑制剂（TIMP-1），通过二者平衡调控胶原降解，维持巩膜基质稳态。二是巩膜重塑响应功能，对眼轴发育相关因子呈敏感响应：10ng/mL TGF-β2 处理 24 小时，细胞胶原合成量增加 40%，α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达升高 3 倍（免疫荧光阳性率从基础 5% 升至 18%），模拟近视发生时巩膜重塑过程；10ng/mL FGF2 处理后，细胞增殖率提升 25%，胶原酶活性增强，参与巩膜组织修复。三是眼表微环境调节功能，分泌多种眼表保护因子，如 EGF（促进角膜上皮修复）、TGF-β3（抑制过度纤维化），同时对炎症因子有调控作用：10ng/mL IL-1β 处理 24 小时，IL-6 分泌量达 38pg/mL（空白组 10pg/mL），但添加 10ng/mL TGF-β3 可使 IL-6 分泌降至 16pg/mL，体现炎症平衡调节能力。

分子表型鉴定明确：细胞高表达成纤维细胞特异性标志物 —— 波形蛋白（Vimentin，免疫荧光阳性率≥95%）、成纤维细胞特异性蛋白 1（FSP1，阳性率≥90%）；同时表达巩膜成纤维细胞特征分子 ——CD90（细胞膜阳性率≥85%）、I 型胶原 α1 链（COL1A1，胞质阳性率≥90%），其中 Vimentin⁺FSP1⁺双阳性细胞占比≥95%，是细胞身份的核心标志。信号通路方面，TGF-β/Smad 通路（Smad2、Smad3 磷酸化水平高）调控胶原合成与细胞分化，MAPK/ERK 通路（ERK1/2 磷酸化活性强）介导细胞增殖信号，PI3K/Akt 通路（Akt 磷酸化率≥30%）参与细胞存活与功能维持，三者协同保障细胞功能稳定。核型分析显示为 46,XX/XY 正常二倍体，染色体畸变率 < 1%，裸鼠皮下接种 8 周无肿瘤形成，安全性可靠，是研究巩膜发育、近视机制及眼科疾病的理想体外模型。

二、体外培养关键条件

培养需精准控制营养与环境参数，以维持细胞基质合成与重塑功能：

培养基配置：采用 DMEM/F12（1:1）混合培养基，添加 10% 胎牛血清（需筛选批次，确保 TGF-β2 含量≤2pg/mL，避免干扰细胞功能）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、50μg/mL 抗坏血酸（促进胶原合成）。培养基 pH 值严格控制在 7.2-7.4（偏离 0.2 会导致胶原合成量下降 30%），渗透压 280-300 mOsm/kg（过高易导致细胞脱水，影响微丝结构）。开展巩膜重塑实验时，需用 5% FBS 培养基饥饿 12 小时，减少血清因子干扰；维持胶原合成功能需添加 10ng/mL 胰岛素，促进蛋白多糖合成。

环境参数：培养箱温度稳定在 37℃±0.5℃（温度波动 ±1℃会使增殖率下降 25%，胶原合成减少 20%），CO₂浓度 5%±0.3%（过低导致 pH 升高，过高抑制抗坏血酸活性），相对湿度≥95%（避免培养基蒸发浓缩，影响因子浓度）。模拟眼内低氧环境（巩膜深层氧浓度 5%-8%）时，需通入氮气调节氧浓度，诱导 HIF-1α 表达（Western blot 检测灰度值升高 1.8 倍），用于研究缺氧对巩膜重塑的影响。

传代操作：细胞融合度达 80%-90% 时传代，操作步骤如下：①无菌 PBS 轻柔清洗 2 次（每次 1 分钟，避免破坏细胞间连接）；②加入 0.25% 含 EDTA 的消化液，37℃孵育 4-6 分钟（镜下观察细胞间隙增大、胞体收缩变圆）；③加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打（吹打次数≤8 次，避免细胞破碎）；④1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬；⑤按 1:3 比例接种至普通培养皿（无需包被，细胞贴壁率≥90%）。传代超过 18 代后，细胞功能开始衰减（胶原合成量降至 10μg/mL 以下），需及时冻存备用。

培养注意事项：细胞对血清批次敏感，不同批次血清可导致胶原分泌量波动 35%，需通过预实验筛选；每 3 天换液 1 次（换液量为培养基总量的全量，因细胞代谢旺盛，旧液中代谢废物易积累）；每 5 代检测细胞功能（胶原分泌量≥12μg/mL、α-SMA 基础阳性率≤8%）；需加强无菌操作，预防细菌污染（成纤维细胞对细菌毒素敏感，污染后易出现细胞凋亡）。

三、核心科研应用领域

近视机制与巩膜发育研究：可构建近视相关巩膜重塑模型，如 TGF-β2 诱导模型（10ng/mL 处理 72 小时，胶原合成增加 40%，α-SMA 升高 3 倍），研究关键基因（如 COL1A1、MMP-1、TIMP-1）在巩膜变薄、眼轴增长中的作用；模拟近视环境（低氧 + TGF-β2 联合处理），观察到细胞胶原降解率提升 28%，为解释近视发生时巩膜基质流失提供实验依据；同时可研究眼轴发育关键因子（如 FGF2、IGF-1）对细胞增殖与胶原合成的调控，揭示巩膜发育规律。

眼科疾病研究与药物筛选：用于青光眼、高度近视等疾病机制研究，如构建青光眼巩膜纤维化模型（添加 10ng/mL TGF-β1，α-SMA 阳性率升至 25%），探索巩膜硬度增加与眼压升高的关联；针对高度近视，筛选抑制巩膜过度重塑的药物，如检测杜仲提取物（100μg/mL）处理后，细胞胶原降解率从 28% 降至 15%，α-SMA 表达恢复至基础水平，验证其对巩膜的保护作用；同时可筛选眼用抗纤维化药物，评估药物对细胞胶原合成与 MMP 活性的影响，为眼科疾病治疗提供候选药物。

眼用生物材料研发与评价：作为种子细胞用于巩膜修复材料研发，与生物材料（如胶原支架、丝素蛋白膜）复合构建人工巩膜，体外培养 14 天，细胞黏附率≥90%，胶原分泌量达 12μg/mL，且材料可促进细胞定向排列，模拟天然巩膜结构；同时用于眼用材料生物相容性评价，检测材料浸提液对细胞活力（台盼蓝染色活力≥85%）、胶原合成（≥10μg/mL）的影响，确保材料安全性与功能性，推动人工巩膜临床转化。

眼表损伤修复研究：用于眼表损伤修复机制探索，如构建细胞划伤模型（划伤宽度 200μm），观察到细胞 24 小时迁移距离达 150μm，同时分泌 EGF 促进划伤区域 “上皮化"；研究修复因子（如 TGF-β3、EGF）对细胞迁移与胶原合成的协同作用，发现二者联合使用可使划伤愈合时间缩短 30%，为眼表损伤修复治疗提供新策略。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与纯度：台盼蓝染色活力≥90%，传代 24 小时贴壁率≥90%；流式检测 Vimentin⁺细胞≥95%、FSP1⁺细胞≥90%、CD90⁺细胞≥85%，无其他眼周细胞污染（角膜上皮细胞 CK12⁺<3%、视网膜色素上皮细胞 RPE65⁺<3%）。

功能验证：I 型胶原分泌≥12μg/mL/24h（ELISA 检测）；10ng/mL TGF-β2 处理 24 小时，α-SMA 表达升高≥2 倍；细胞划伤模型 24 小时愈合率≥60%（验证迁移修复能力）。

遗传与安全：核型为 46,XX/XY 正常二倍体，畸变率 < 1%；STR 分型与标准 HFSF 细胞图谱一致性≥95%；裸鼠接种无致瘤性，无 HIV、HBV、HCV 污染。

（二）使用注意事项

培养管理：每 5 代进行表型与功能验证，避免细胞功能漂移（如出现 FSP1 表达下降、胶原合成减少，需更换血清或调整培养基成分）；与其他眼周细胞（如角膜上皮细胞、视网膜细胞）分开培养，使用独立试剂耗材，防止交叉污染；操作时轻柔吹打，保护细胞微丝结构（过度吹打易导致微丝断裂，影响胶原合成）。

实验设计：设置空白对照、阳性对照（正常巩膜组织匀浆）与溶剂对照，确保实验重复性；开展药物筛选实验时，设置浓度梯度组（如 10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL），确定药物有效剂量范围；共培养实验需设置单独材料对照组，明确细胞与材料的相互作用。

冻存复苏：对数生长期细胞用含 10% DMSO、20% FBS、50μg/mL 抗坏血酸的冻存液，梯度降温冻存（4℃30min→-20℃1h→-80℃过夜→液氮）；复苏时 37℃水浴 1 分钟，离心后用含抗坏血酸的培养基重悬，72 小时检测胶原分泌量（需≥10μg/mL），确保功能恢复后再进行实验。