HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞源自人胚胎眼 Tenon's 囊组织，贴壁生长，参与眼表修复，用于青光眼滤过术瘢痕机制、眼科药物筛选研究。

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更新时间：2025-11-12

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HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞

一、细胞基本生物学特性

HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞源自人胚胎眼 Tenon's 囊组织（多取自孕中期健康胚胎眼周筋膜层），经原代分离纯化建立，属间充质来源成纤维细胞系，保留 Tenon's 囊成纤维细胞te有的眼表修复与组织重塑功能，具有有限增殖能力（传代次数约 15-20 代），是研究眼科疾病机制、眼表修复及抗瘢痕药物筛选的关键体外模型。其在模拟 Tenon's 囊组织纤维化、分泌眼表修复相关因子及响应眼科药物调控方面表现稳定，广泛应用于眼科学、组织工程学及药理学领域。

形态上，该细胞呈典型成纤维细胞形态：贴壁生长时呈长梭形或纺锤形，细胞排列呈平行状或漩涡状（模拟体内 Tenon's 囊组织的纤维排列结构），胞体直径 10-16μm；胞质丰富且均匀，HE 染色呈淡嗜酸性，胞质内可见大量平行排列的微丝（为细胞收缩与胶原合成提供结构基础），细胞两端可见细长胞质突起（参与细胞间连接与基质相互作用）；细胞核呈椭圆形，位于细胞中央，核仁 1 个（清晰可见），染色质呈细网状，核分裂象偶见（正常培养条件下分裂象比例约 1%-2%，符合胚胎来源成纤维细胞增殖特性）。体外培养时，细胞形态随功能状态变化：在纤维化诱导条件下（如添加 TGF-β1），细胞体积增大，胞质微丝增多，呈 “肌成纤维细胞样" 改变；在抗瘢痕药物作用下，细胞形态恢复细长梭形，增殖与分泌功能减弱，精准模拟体内 Tenon's 囊组织的功能状态转换。

功能特性方面，HFTF 细胞具备 Tenon's 囊成纤维细胞专属功能，与其他部位成纤维细胞差异显著。一是眼表修复与基质合成功能：可分泌多种眼表修复关键因子，如表皮生长因子（EGF，促进角膜上皮细胞增殖）、成纤维细胞生长因子 2（FGF2，调控眼表组织再生）、血小板衍生生长因子（PDGF，促进血管修复）；同时合成并分泌眼周组织特异性基质成分，如 I 型胶原（占分泌胶原总量的 70%-80%）、III 型胶原（维持组织弹性）及透明质酸（维持眼表湿润环境），为眼表损伤修复提供结构与营养支持，是研究眼表修复机制的核心模型。二是纤维化响应与收缩功能：对纤维化相关细胞因子（如 TGF-β1、CTGF）高度敏感，TGF-β1 处理后（10ng/mL），细胞 α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达升高 3-5 倍，胶原合成量增加 40%-60%，同时细胞收缩能力增强（体外胶原凝胶收缩实验中，24 小时收缩率达 50%-60%），模拟青光眼滤过术后 Tenon's 囊组织纤维化过程，为研究眼科术后瘢痕形成机制提供依据。三是炎症与免疫调节功能：对眼表炎症因子（如 IL-1β、TNF-α）敏感，10ng/mL IL-1β 处理 24 小时，细胞分泌的抗炎因子（如 IL-10、TGF-β3）表达升高 4-6 倍，同时趋化因子（如 CXCL8）分泌增加，参与眼表炎症反应的调控，模拟眼表炎症状态下 Tenon's 囊细胞的功能变化，为研究炎症相关性眼病机制提供实验支持。

分子表型上，该细胞高表达 Tenon's 囊成纤维细胞特异性标志物：α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA，胞质阳性，基础状态下阳性率约 10%-15%，纤维化诱导后升至 60% 以上）、成纤维细胞特异性蛋白 1（FSP1，胞质阳性，阳性率≥90%）、透明质酸合成酶 2（HAS2，细胞膜阳性，阳性率≥85%，与眼表湿润功能相关），其中 FSP1⁺HAS2⁺双阳性是其 Tenon's 囊成纤维细胞身份的核心鉴定依据；同时表达眼表修复相关分子（EGF 受体阳性率≥70%、FGF2 受体阳性率≥65%）；细胞内信号通路符合眼科组织调控机制：TGF-β/Smad 通路（激活时促进纤维化）、PI3K/Akt 通路（调控细胞增殖与修复）、MAPK/ERK 通路（参与炎症因子介导的功能调节）；核型稳定（46,XX/XY 正常二倍体，染色体畸变率 < 1%），无致瘤性（裸鼠接种后无肿瘤形成），确保实验的临床相关性与可靠性。

二、体外培养关键条件

HFTF 细胞培养需重点维持其眼表修复功能与纤维化响应能力，避免培养条件不当导致功能丢失。

培养基选择：优先使用 DMEM/F12（1:1）混合培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS，低内毒素≤5 EU/mL，选择热灭活血清以减少对细胞分泌功能的干扰）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、10ng/mL 表皮生长因子（EGF，维持细胞活性）、100U/mL 双抗；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 280-300 mOsm/kg（渗透压异常会导致细胞胶原合成能力下降 40% 以上）。开展纤维化实验时，用含 2% FBS 的培养基饥饿 12 小时（减少血清对细胞纤维化响应的干扰）；抗瘢痕药物筛选实验可使用无血清培养基（排除血清成分对药物功效的影响）；维持基质合成功能时，需添加 50μg/mL 抗坏血酸（促进胶原合成）。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度≥95%；温度波动超过 ±1℃会导致细胞增殖率下降 30%，α-SMA 表达减少 40%；CO₂浓度低于 4% 会导致培养基 pH 值升高，细胞形态畸变；高于 6% 则导致 HAS2 表达下降，需通过培养箱实时监控调整；模拟眼表缺氧微环境时（如角膜损伤后缺氧），可将氧气浓度降至 5%-10%，诱导 VEGF 表达升高，用于研究缺氧对眼表修复的影响。

传代操作要点：细胞融合度达 80%-90% 时进行传代（避免过度融合导致细胞接触抑制，影响分泌功能）；操作步骤：用无菌 PBS 轻柔清洗 2 次（避免剧烈冲洗破坏细胞胞质突起），加入含 EDTA 的 0.25% 消化液（温和消化，防止过度消化损伤细胞表面受体），37℃孵育 3-5 分钟（镜下见细胞间隙增大、边缘收缩后立即终止消化），加入含血清的培养基中和，轻柔吹打至单细胞悬液（避免用力吹打导致细胞破碎），按 1:2-1:3 比例接种至预包被明胶的培养皿（明胶促进细胞黏附与形态维持，贴壁率≥90%）；传代次数建议不超过 18 代，避免细胞衰老导致眼表修复功能衰减。

关键注意事项：细胞对血清批次敏感（不同批次血清可能导致胶原分泌量波动 35%、α-SMA 表达差异 30%），建议长期使用同一批次 Tenon's 囊细胞专用血清，更换前需验证 FSP1/HAS2 表达、胶原合成量及纤维化响应能力，确保与原批次差异 < 15%；培养过程中避免频繁换液（每 3 天换液 1 次，频繁换液会破坏细胞分泌的因子微环境）；定期检测细胞功能（如每 5 代检测一次胶原分泌量，需≥10μg/mL/24h）；操作时严格无菌（胚胎来源细胞对污染抵抗力弱，培养基可添加 0.1% 抗真菌试剂）。

三、核心科研应用领域

眼科疾病机制研究：HFTF 细胞是解析眼表修复与纤维化相关疾病机制的核心模型，可构建眼表损伤模型（如划伤损伤、缺氧处理）、纤维化模型（如 TGF-β1 诱导），研究关键基因（如 TGF-βR1、Smad3、α-SMA）在眼表修复、术后瘢痕形成中的作用（如敲除 Smad3 后，细胞胶原合成量下降 60%，纤维化程度显著降低）；探索外界因素（如紫外线、化学损伤）对眼表组织的影响（如紫外线照射导致细胞 HAS2 表达下降，眼表湿润功能受损），为理解眼科疾病病理机制提供实验依据。

抗瘢痕与眼表修复药物筛选：适用于眼科抗瘢痕、眼表修复类药物的高通量筛选，如通过检测细胞增殖率、α-SMA 表达量、胶原合成量，评估天然提取物（如积雪草苷、透明质酸）、合成化合物的抗纤维化活性；验证药物对眼表修复的促进作用（如检测药物处理后 EGF、FGF2 分泌量的变化），为青光眼滤过术、角膜移植术等术后抗瘢痕药物研发，及干眼症、角膜损伤等眼表疾病治疗药物研发提供体外功效评估模型。

眼科组织工程研究：在眼科组织工程领域，HFTF 细胞是眼表修复材料研发的关键种子细胞，可与生物材料（如胶原支架、丝素蛋白支架）复合构建人工 Tenon's 囊组织、角膜基质替代物；评估材料的生物相容性（如细胞黏附率、增殖活性）与功能协同性（如材料对细胞胶原合成、修复因子分泌的调控），为眼表缺损修复、人工角膜移植等临床治疗提供技术支持，推动眼科组织工程的临床转化。

眼用制剂安全性评估：可用于眼用制剂（如眼yao水、眼yong凝胶）的体外安全性评估，通过检测细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、炎症因子分泌变化，评估制剂对眼表细胞的毒性；同时观察制剂对细胞形态、修复功能的影响，为眼用制剂的研发与临床应用提供安全性数据，降低临床使用风险。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与表型：台盼蓝染色法检测细胞活力≥90%，传代后 24 小时贴壁率≥90%；免疫荧光或流式细胞术检测 FSP1⁺HAS2⁺细胞比例≥85%，α-SMA⁺细胞比例（基础状态）≤15%；HE 染色可见典型 Tenon's 囊成纤维细胞形态（长梭形、平行排列、胞质突起明显），无其他眼周细胞污染（如角膜上皮细胞 CK12 阳性率 < 5%、内皮细胞 ZO-1 阳性率 < 5%）。

功能验证：细胞胶原分泌水平≥10μg/mL/24h（ELISA 检测 I 型胶原）；10ng/mL TGF-β1 处理 24 小时后，α-SMA 表达升高≥3 倍（验证纤维化响应正常）；与角膜上皮细胞共培养 7 天，可促进上皮细胞增殖率提升 20%-30%（验证眼表修复能力）。

遗传与安全性：染色体核型分析为 46,XX/XY 正常二倍体，畸变率 < 1%；STR 分型与标准 HFTF 细胞图谱一致性≥95%（避免细胞交叉污染）；端粒酶活性检测为阴性，裸鼠皮下接种后无肿瘤形成（排除致瘤性）。

污染检测：无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法检测支原体，培养法检测细菌与真菌）；无人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）污染（ELISA 检测病毒抗原）；无其他细胞系交叉污染（STR 分型验证）。

（二）使用注意事项

培养操作：长期培养需每 5 代进行一次表型与功能验证（检测 FSP1/HAS2/α-SMA 表达、胶原分泌量、纤维化响应能力），避免细胞功能漂移（如向普通成纤维细胞转化，HAS2 表达下降）；与其他眼周细胞（如角膜上皮细胞、内皮细胞）严格分开培养（使用独立的培养箱、试剂与耗材，防止交叉污染）；操作时轻柔处理细胞（Tenon's 囊细胞胞质突起脆弱，过度吹打易导致突起断裂，影响细胞间信号传递）。

实验设计：开展纤维化实验时，需设置空白对照组（未加 TGF-β1）、阳性对照组（添加已知抗纤维化药物）与溶剂对照组（排除溶剂对细胞的影响）；眼表修复实验需设置单独上皮细胞对照组（明确 HFTF 细胞的促进作用）；药物毒性评估实验需设置浓度梯度组（确定药物安全剂量范围）。

冻存复苏：冻存需选择对数生长期、功能稳定的细胞（增殖活跃、胶原分泌量≥12μg/mL/24h），冻存液配方为 DMEM/F12 培养基 + 10% DMSO+20% FBS+50μg/mL 抗坏血酸（维持胶原合成功能），梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时在 37℃水浴中快速融化（1 分钟内，避免 DMSO 长时间作用损伤细胞），加入 10 倍体积预热的新鲜培养基，1000rpm 离心 5 分钟（离心力过大会导致细胞活力下降），弃上清后用含 EGF 的培养基重悬（调整细胞密度至 5×10⁴个 /cm²），接种至预包被明胶的培养皿；复苏后 24 小时检测细胞活力（需≥80%），48 小时观察细胞形态（需维持长梭形，胞质突起完整），72 小时检测胶原分泌量（需≥8μg/mL/24h），确保功能恢复后再进行实验。

安全防护：该细胞属人类胚胎来源细胞，操作时需严格遵守生物安全二级防护规范（穿戴无菌手套、护目镜，在生物安全柜内进行操作）；废弃培养物（如细胞悬液、培养基、吸头、培养皿）需加入 0.5% 次氯酸钠溶液处理 30 分钟后，再高压灭菌（121℃ 30 分钟）；细胞冻存管需标注清晰（细胞名称、冻存日期、操作人员），存放于专用液氮罐中；实验人员需定期进行健康检查，避免职业暴露（如皮肤接触细胞悬液后，立即用肥皂水清洗）。

上一个：人白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4试剂