HGC-27人胃癌细胞（未分化）源自人体未分化胃癌组织，贴壁生长，具高恶性增殖、强侵袭性，用于未分化胃癌机制研究、抗癌药物筛选及治疗策略探索。

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更新时间：2025-11-12

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HGC-27人胃癌细胞（未分化）

一、细胞基本生物学特性

HGC-27人胃癌细胞（未分化）源自人体未分化胃腺癌组织（多取自胃体或胃窦部晚期胃癌手术标本），经原代分离纯化建立，属上皮源性高度恶性肿瘤细胞系，保留未分化胃癌的核心形态与恶性生物学特征，具有无限增殖能力（可稳定传代 60 代以上），是研究未分化胃癌发病机制、侵袭转移及抗癌药物筛选的关键体外模型。其在模拟未分化胃癌的快速增殖、低分化表型及耐药性方面表现稳定，广泛应用于肿瘤学、胃肠病学及药理学领域。

形态上，该细胞呈典型未分化胃癌细胞形态：贴壁生长时呈圆形或不规则形，细胞排列松散无极性（丧失正常胃黏膜上皮的有序结构），胞体直径 12-20μm；胞质少而稀薄，HE 染色呈嗜碱性（低分化细胞的典型特征），无明显胞质特殊结构（如胃腺细胞的黏液颗粒缺失），细胞边界模糊（紧密连接、黏附连接缺失）；细胞核大而畸形，核质比高（约 1:1，正常细胞核质比约 1:4-1:6），核仁 2-4 个（明显增大且染色深），染色质呈粗颗粒状或块状分布（分布不均，无明显核周浓集），核分裂象多见（正常培养条件下分裂象比例约 15%-25%，出现多极分裂、染色质桥等异常分裂象），部分细胞可见多核、巨核或裸核。体外培养时，细胞形态随恶性程度变化：经转移诱导剂处理后，细胞呈梭形间质样改变更显著，迁移能力增强；对药物耐药后，细胞体积进一步缩小，核质比更高，恶性特征更明显，精准模拟临床未分化胃癌的病理形态学改变。

功能特性方面，HGC-27 细胞具备未分化胃癌的核心恶性功能，恶性程度显著高于分化型胃癌细胞。一是增殖能力：细胞周期短（倍增时间约 24-36 小时，显著快于分化型胃癌细胞），增殖不依赖外源性生长信号（自身分泌 EGF、bFGF 等促增殖因子，构建自分泌增殖回路）；平板克隆形成实验中，克隆形成率≥60%（分化型胃癌细胞克隆形成率约 30%-40%），软琼脂集落形成实验中集落数量多且体积大（提示锚定非依赖性生长能力）；细胞周期分析显示，S 期细胞比例达 40%-50%（分化型胃癌细胞 S 期比例约 25%-35%），增殖指数显著升高，复刻未分化胃癌的快速增殖特性。二是侵袭与转移潜能：具有较强的体外侵袭能力，Transwell 侵袭实验中 24 小时穿膜细胞数≥250 个 / 视野（分化型胃癌细胞穿膜数约 100-150 个 / 视野）；划痕愈合实验中 24 小时愈合率达 80%-90%（分化型胃癌细胞愈合率约 50%-60%），迁移速度快且无明显接触抑制；高表达上皮 - 间质转化（EMT）相关标志物（N - 钙黏蛋白、波形蛋白 Vimentin、Snail、Twist 转录因子表达量显著高于分化型细胞），低表达或极低表达上皮标志物（E - 钙黏蛋白、细胞角蛋白 18 表达水平低）；分泌基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9、MMP-14），降解细胞外基质与基底膜，同时分泌血管生成因子（VEGF、bFGF）促进肿瘤血管形成，为侵袭转移提供条件，是研究未分化胃癌转移机制的理想模型。三是耐药性与低分化功能：丧失正常胃黏膜上皮细胞的部分功能（如黏液蛋白分泌能力缺失），仅表达极低水平的胃上皮相关基因（如 MUC5AC、CDX2）；对多种抗癌药物具有天然耐药性（IC₅₀值是分化型胃癌细胞的 2-3 倍），高表达 ABC 转运蛋白（P-gp、ABCG2、ABCC1），同时高表达抗凋亡蛋白（Bcl-2、Bcl-xL、Survivin），凋亡通路（Caspase-3、Caspase-9）激活阈值升高，模拟临床未分化胃癌的治疗耐药难题。

分子表型上，该细胞高表达未分化胃癌特异性标志物：CD44（细胞膜阳性，阳性率≥90%，肿瘤干细胞标志物，与未分化程度正相关）、CD133（细胞膜阳性，阳性率≥80%，肿瘤干细胞标志物）、波形蛋白 Vimentin（胞质阳性，阳性率≥95%，间质细胞标志物，提示 EMT 程度高），其中 CD44⁺CD133⁺双阳性细胞比例≥70%（显著高于分化型胃癌细胞），是其未分化胃癌细胞身份的核心鉴定依据；同时高表达恶性相关分子（MMP-9 阳性率≥85%、P-gp 阳性率≥75%、Snail 阳性率≥80%）；细胞内信号通路异常激活：PI3K/Akt/mTOR 通路（持续激活，调控增殖与抗凋亡）、MAPK/ERK 通路（过度激活，促进细胞周期进展）、NF-κB 通路（异常激活，驱动炎症相关恶性表型与耐药性）；核型异常（呈现非整倍体，染色体数目波动范围大，可见染色体缺失、易位、扩增，如染色体 3p 缺失、8q 扩增、17p 缺失，与临床未分化胃癌遗传学改变高度一致），具有致瘤性（裸鼠皮下接种仅需 1×10⁶个细胞，2-3 周即可形成实体瘤，成瘤率 100%，肿瘤组织病理形态呈未分化癌特征，侵袭性强且易发生局部转移），确保实验的临床相关性与可靠性。

二、体外培养关键条件

HGC-27 细胞培养需重点维持其未分化表型与恶性功能，避免培养条件不当导致分化或恶性程度降低。

培养基选择：优先使用 RPMI-1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS，低内毒素≤5 EU/mL，选择未热灭活血清以保留促增殖与维持未分化表型的因子）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、100 U/mL 双抗；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 280-300 mOsm/kg（渗透压异常会导致细胞增殖率下降 50% 以上，且易诱导细胞分化）。开展侵袭实验时，用含 2% FBS 的培养基饥饿 12 小时（减少血清对细胞迁移的干扰）；药物敏感性实验需使用含 5% FBS 的培养基（平衡细胞增殖与药物响应，避免血清过多影响药物作用）；维持未分化表型时，可添加 10ng/mL bFGF（进一步抑制细胞分化，维持肿瘤干细胞特性）。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度≥95%；温度波动超过 ±1℃会导致细胞克隆形成率下降 60%，且易诱导 Vimentin 表达降低（提示开始分化）；CO₂浓度低于 4% 会导致细胞凋亡率显著升高；高于 6% 则导致 CD44⁺CD133⁺细胞比例下降 40%（未分化表型丢失），需通过培养箱实时监控调整；模拟未分化胃癌微环境缺氧状态时（实体瘤内部缺氧），可将氧气浓度降至 1%-3%，诱导 HIF-1α 高表达，用于研究缺氧对未分化胃癌耐药性的影响。

传代操作要点：细胞融合度达 60%-70% 时需及时传代（未分化细胞增殖快，过度融合易导致细胞堆积与分化）；操作步骤：用无菌 PBS 清洗 2 次（细胞贴壁较牢固，无需轻柔），加入含 EDTA 的 0.25% 细胞消化液（常规消化，未分化细胞抗消化能力强，可适当延长消化时间至 6-8 分钟），镜下见细胞变圆、开始脱落时终止消化，加入含血清的培养基中和，吹打至单细胞悬液（可适度用力吹打，细胞韧性较强），按 1:4-1:6 比例接种至普通培养皿（无需包被基质，贴壁率≥90%）；传代次数无严格限制，建议每 15 代检测一次未分化表型（如 CD44⁺CD133⁺细胞比例、Vimentin 表达），避免长期传代导致分化。

关键注意事项：细胞对血清批次敏感（不同批次血清可能导致克隆形成率波动 50%、CD44⁺CD133⁺细胞比例差异 45%），建议长期使用同一批次肿瘤细胞专用血清，更换前需验证增殖速率、未分化标志物表达及侵袭能力，确保与原批次差异 < 25%；培养过程中避免频繁换液（每 2 天换液 1 次，未分化细胞代谢快，需及时补充营养，但频繁换液会破坏促增殖微环境）；定期检测细胞功能（如每 2 周检测一次 Transwell 侵袭能力，穿膜细胞数需≥200 个 / 视野）；操作时严格无菌（未分化细胞对污染抵抗力弱，培养基可添加 0.1% 抗真菌试剂预防污染）。

三、核心科研应用领域

未分化胃癌发病机制研究：HGC-27 细胞是解析未分化胃癌恶性机制的核心模型，可构建多种分子调控模型（如基因过表达、RNA 干扰或基因敲除），研究关键基因（如 MYC、SOX9、NANOG）在未分化胃癌增殖、分化中的作用（如敲除 MYC 后，细胞增殖率下降 70%，CD44⁺CD133⁺细胞比例下降 50%，出现部分分化特征）；探索 EMT 与未分化表型的关联机制（如 Snail/Twist 转录因子对上皮、间质标志物表达的调控）；分析肿瘤微环境因素（如缺氧、炎症因子 IL-1β、IL-8）对未分化胃癌恶性表型的影响（如缺氧诱导 HIF-1α 高表达，促进 MMP-9 与 ABCG2 分泌，增强侵袭与耐药性），为未分化胃癌的分子机制研究提供实验依据。

抗癌药物筛选与耐药研究：适用于未分化胃癌抗癌药物的高通量筛选，如通过 MTT 法、CCK-8 法筛选天然产物、合成化合物或候选药物的抗未分化胃癌活性（筛选 IC₅₀<10μmol/L 的潜在活性药物，重点针对耐药性）；评估药物对未分化胃癌细胞恶性功能的影响（如药物处理后克隆形成率、侵袭能力、CD44⁺CD133⁺细胞比例的变化）；研究药物作用机制（如检测药物对耐药通路、凋亡通路的调控，如抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路可逆转其耐药性）；构建耐药模型（长期低剂量药物诱导，建立耐药细胞株），研究耐药机制（如 ABC 转运蛋白过表达、抗凋亡基因激活）并筛选逆转耐药的药物组合（如药物与 ABC 转运蛋白抑制剂联用），为未分化胃癌临床药物治疗提供数据支持。

未分化胃癌侵袭转移研究：可用于未分化胃癌转移机制的深入研究，如通过 Transwell 实验、划痕实验评估调控因子（如 MMP 抑制剂、EMT 抑制剂、肿瘤干细胞抑制剂）对胃癌细胞迁移、侵袭的影响；分析细胞外基质与未分化胃癌侵袭的互作（如不同硬度基质对细胞形态、迁移速度的影响）；构建体内转移模型（如尾静脉注射 HGC-27 细胞，建立肺转移、肝转移模型，未分化胃癌转移率显著高于分化型细胞），研究未分化胃癌的体内转移过程、器官靶向性及转移前微环境形成机制；探索转移相关标志物（如 CircRNA、miRNA、外泌体）在未分化胃癌转移中的作用（如 miR-10b 过表达可促进 HGC-27 细胞肺转移，抑制 miR-10b 后转移率下降 80%），为未分化胃癌转移的早期诊断与干预提供靶点。

未分化胃癌诊断标志物与靶向研究：可通过基因芯片、蛋白质组学、代谢组学等技术，筛选未分化胃癌特异性诊断标志物（如差异表达的蛋白、lncRNA、代谢物），并在 HGC-27 细胞中验证其表达与功能（如 CD44v6、GPC3 的表达水平与细胞未分化程度、恶性程度的相关性）；研究潜在靶向位点（如 PI3K、MMP-9、CD44、ABCG2）的生物学功能，评估靶向药物的疗效（如 CD44 单克隆抗体可显著抑制 HGC-27 细胞增殖与侵袭）；构建靶向药物的动物模型（如裸鼠移植瘤模型、转移模型），验证靶向药物的体内抗肿瘤与抗转移效果，为未分化胃癌的精准诊断与靶向干预提供实验基础。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与表型：台盼蓝染色法检测细胞活力≥85%，传代后 24 小时贴壁率≥90%；免疫荧光或流式细胞术检测 CD44⁺CD133⁺细胞比例≥70%，Vimentin⁺细胞比例≥90%，E - 钙黏蛋白⁺细胞比例 < 5%；HE 染色可见典型未分化胃癌细胞形态（核大畸形、核质比高、核分裂象多、细胞排列松散），无正常胃上皮细胞污染（正常胃上皮细胞 CK18 阳性率 < 3%）。

功能验证：平板克隆形成率≥60%；Transwell 侵袭实验 24 小时穿膜细胞数≥250 个 / 视野；对常用抗癌药物的 IC₅₀值≥5μmol/L（验证天然耐药性）；裸鼠皮下接种 1×10⁶个细胞，3 周内成瘤率 100%，肿瘤组织病理诊断为未分化腺癌。

遗传与安全性：染色体核型分析显示非整倍体，具有未分化胃癌典型的染色体异常（如 3p 缺失、8q 扩增、17p 缺失）；STR 分型与标准 HGC-27 细胞图谱一致性≥95%（避免细胞交叉污染）；无致瘤性以外的安全性风险（如无病毒污染）。

污染检测：无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法检测支原体，培养法检测细菌与真菌）；无人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）污染（ELISA 检测病毒抗原）；无其他肿瘤细胞系交叉污染（STR 分型验证）。

（二）使用注意事项

培养操作：长期培养需每 15 代进行一次表型与功能验证（检测 CD44/CD133/Vimentin 表达、克隆形成率、侵袭能力），避免细胞分化（如出现 E - 钙黏蛋白表达升高、Vimentin 表达降低，需更换血清或调整培养条件）；与分化型胃癌细胞、正常胃上皮细胞严格分开培养（使用独立的培养箱、试剂与耗材，防止交叉污染）；操作时无需过度轻柔（未分化细胞韧性较强，适度吹打可获得单细胞悬液，避免细胞聚团影响实验）。

实验设计：开展药物筛选实验时，需设置空白对照组、阳性药物对照组与溶剂对照组；研究未分化表型实验时，需设置分化诱导对照组（如添加维甲酸，观察细胞分化变化）；体内成瘤实验需设置低细胞浓度组（如 5×10⁵、1×10⁶个细胞 / 只裸鼠），评估未分化胃癌的低剂量成瘤能力。

冻存复苏：冻存需选择对数生长期、未分化表型稳定的细胞（增殖活跃、CD44⁺CD133⁺细胞比例≥75%），冻存液配方为 RPMI-1640 培养基 + 10% DMSO+20% FBS+10ng/mL bFGF（维持未分化表型），梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时在 37℃水浴中快速融化（1 分钟内，避免 DMSO 长时间作用损伤细胞），加入 10 倍体积预热的新鲜培养基，1000rpm 离心 5 分钟（离心力过大会导致细胞活力下降），弃上清后用含 bFGF 的培养基重悬（调整细胞密度至 1×10⁵-5×10⁵个 /mL），接种至普通培养皿；复苏后 24 小时检测细胞活力（需≥80%），48 小时观察细胞形态（需维持未分化特征），72 小时检测 CD44⁺CD133⁺细胞比例（需≥65%），确保功能恢复后再进行实验。

安全防护：该细胞属人类高度恶性肿瘤细胞系，操作时需严格遵守生物安全二级防护规范（穿戴无菌手套、护目镜，在生物安全柜内进行所有操作）；废弃培养物（如细胞悬液、培养基、吸头、培养皿）需分类处理：细胞悬液与培养基需加入 0.5% 次氯酸钠溶液处理 30 分钟后，再高压灭菌（121℃ 30 分钟）；耗材需放入医疗废物专用包装袋，经高压灭菌后统一

上一个：人白细胞介素-2试剂盒