HHCC人肝癌细胞源自人体肝癌组织，贴壁生长，具恶性增殖、侵袭转移特性，可响应抗癌药物，用于肝癌发病机制研究、抗癌药物筛选及治疗策略探索。

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更新时间：2025-11-12

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HHCC人肝癌细胞

一、细胞基本生物学特性

HHCC人肝癌细胞源自人体原发性肝细胞癌组织（多取自未接受放hua疗的肝癌患者手术标本），经原代分离纯化建立，属上皮源性恶性肿瘤细胞系，保留肝细胞癌的核心形态与恶性生物学特征，具有无限增殖能力（可稳定传代 50 代以上），是研究肝癌发病机制、侵袭转移及抗癌药物筛选的关键体外模型。其在模拟肝癌细胞增殖、肝特异性功能异常及对治疗信号的响应方面表现稳定，广泛应用于肿瘤学、肝病学及药理学领域。

形态上，该细胞呈典型肝细胞癌细胞形态：贴壁生长时呈多边形或不规则上皮样，细胞排列松散无明显极性（区别于正常肝细胞的有序排列），胞体直径 15-25μm；胞质丰富且不均匀，HE 染色呈嗜酸性或嗜双色性，部分细胞可见胞质空泡（提示肝细胞te有的脂滴或糖原储存功能异常），细胞边界模糊（紧密连接结构缺失）；细胞核大而畸形，呈多形性（圆形、椭圆形或不规则形），核仁 1-3 个（染色深且大小不一），染色质呈粗块状分布（核染色质增粗浓聚），核分裂象多见（正常培养条件下分裂象比例约 10%-18%，可见多极分裂、染色质桥等异常分裂象），部分细胞可见多核或巨核。体外培养时，细胞形态随恶性程度变化：经转移诱导剂处理后，细胞呈梭形间质样改变，迁移能力显著增强；对药物耐药后，细胞体积增大，核质比升高，恶性特征更明显，精准模拟临床肝癌的病理形态学改变。

功能特性方面，HHCC 细胞具备肝细胞癌的核心恶性功能，与正常肝细胞差异显著。一是恶性增殖能力：细胞周期短（倍增时间约 36-48 小时，显著快于正常肝细胞），增殖不依赖外源性生长信号（自身可分泌 EGF、HGF 等促增殖因子，构建自分泌增殖回路）；平板克隆形成实验中，克隆形成率≥50%（正常肝细胞克隆形成率 < 3%），软琼脂集落形成实验中可形成悬浮生长的细胞集落（提示锚定非依赖性生长能力，是恶性肿瘤的典型特征）；细胞周期分析显示，S 期细胞比例达 35%-45%（正常肝细胞 S 期比例约 10%-15%），增殖指数显著升高，wan美复刻肝癌的恶性增殖特性。二是侵袭与转移潜能：具有较强的体外侵袭能力，Transwell 侵袭实验中 24 小时穿膜细胞数≥200 个 / 视野（正常肝细胞几乎无穿膜能力）；划痕愈合实验中 24 小时愈合率达 70%-80%（正常肝细胞愈合率 < 20%），提示较强的迁移能力；高表达上皮 - 间质转化（EMT）相关标志物（如 N - 钙黏蛋白、波形蛋白 Vimentin、Snail 转录因子），低表达上皮标志物（E - 钙黏蛋白表达缺失或显著下调）；可分泌基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9），降解细胞外基质与基底膜，为肿瘤侵袭转移提供条件，是研究肝癌转移机制的理想模型。三是肝特异性功能异常：保留部分肝细胞特异性功能但存在异常，如可合成白蛋白（分泌量仅为正常肝细胞的 10%-20%）、表达尿素循环相关酶（活性显著降低），同时高表达肝癌特异性标志物（如甲胎蛋白 AFP、异常凝xue酶原 PIVKA-II），模拟肝癌细胞的分化异常与功能紊乱，为肝癌诊断标志物研究提供依据。

分子表型上，该细胞高表达肝癌特异性标志物：甲胎蛋白（AFP，胞质阳性，阳性率≥85%，临床肝癌诊断核心标志物）、细胞角蛋白 19（CK19，胞质阳性，阳性率≥70%，肝癌干细胞相关标志物）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3（GPC3，细胞膜阳性，阳性率≥65%，肝癌特异性表面标志物），其中 AFP⁺GPC3⁺双阳性是其肝细胞癌细胞身份的核心鉴定依据；同时表达恶性相关分子（N - 钙黏蛋白阳性率≥75%、MMP-9 阳性率≥60%、ABC 转运蛋白 P-gp 阳性率≥50%）；细胞内信号通路异常激活：PI3K/Akt/mTOR 通路（持续激活，调控恶性增殖与抗凋亡）、MAPK/ERK 通路（过度激活，促进细胞周期进展与侵袭）、Wnt/β-catenin 通路（异常激活，驱动 EMT 与肝癌干细胞特性维持）；核型异常（呈现非整倍体，可见染色体缺失、易位或扩增，如染色体 1p 缺失、8q 扩增，与临床肝癌遗传学改变一致），具有致瘤性（裸鼠皮下接种后 3-5 周可形成实体瘤，成瘤率 100%，肿瘤组织病理形态与原发肝癌一致），确保实验的临床相关性与可靠性。

二、体外培养关键条件

HHCC 细胞培养需重点维持其恶性生物学特性（如增殖能力、侵袭潜能）与肝特异性标志物表达，避免培养条件不当导致恶性特征丢失。

培养基选择：优先使用 RPMI-1640 培养基（添加 10% 胎牛血清，FBS 低内毒素≤5 EU/mL，选择未热灭活血清以保留促增殖因子）、2% 非必需氨基酸（NEAA）、100 U/mL 双抗；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 280-300 mOsm/kg（渗透压异常会导致细胞增殖率下降 45% 以上）。开展侵袭实验时，用含 2% FBS 的培养基饥饿 12 小时（减少血清对细胞迁移的干扰）；药物敏感性实验可使用含 5% FBS 的培养基（平衡细胞增殖与药物响应）；检测肝特异性功能时，需使用含 1% 胰岛素 - 转铁蛋白 - 硒（ITS）的培养基（促进白蛋白合成）。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度≥95%；温度波动超过 ±1℃会导致细胞克隆形成率下降 55%；CO₂浓度低于 4% 会导致细胞凋亡率升高；高于 6% 则导致 AFP 表达下降 30%，需通过培养箱实时监控调整；模拟肝癌微环境缺氧状态时（如实体瘤内部缺氧），可将氧气浓度降至 1%-5%，诱导 HIF-1α 表达，用于研究缺氧对肝癌侵袭转移的影响。

传代操作要点：细胞融合度达 70%-80% 时及时传代（避免过度融合导致细胞接触抑制，影响增殖活性）；操作步骤：用无菌 PBS 清洗 2 次（肿瘤细胞贴壁较牢固，无需轻柔），加入含 EDTA 的 0.25% 细胞消化液（常规消化，无需温和处理），37℃孵育 5-8 分钟（镜下见细胞变圆、脱落时终止消化），加入含血清的培养基中和，吹打至单细胞悬液（可适度用力吹打，肿瘤细胞韧性较强），按 1:3-1:5 比例接种至普通培养皿（无需包被基质，贴壁率≥90%）；传代次数无严格限制，建议每 20 代检测一次恶性特征（如克隆形成率、AFP 表达），避免长期传代导致恶性表型漂移。

关键注意事项：细胞对血清批次敏感（不同批次血清可能导致克隆形成率波动 40%、AFP 分泌量差异 35%），建议长期使用同一批次肿瘤细胞专用血清，更换前需验证增殖速率、AFP 表达及侵袭能力，确保与原批次差异 < 20%；培养过程中避免频繁换液（每 2-3 天换液 1 次，频繁换液会破坏细胞分泌的促增殖因子微环境）；定期检测细胞功能（如每月检测一次 AFP 分泌量，需≥20ng/mL/24h）；操作时严格无菌（肿瘤细胞易受细菌污染，培养基可添加 0.1% 抗真菌试剂预防污染）。

三、核心科研应用领域

肝癌发病机制研究：HHCC 细胞是解析肝癌恶性进展机制的核心模型，可构建多种分子调控模型（如基因过表达、RNA 干扰或基因敲除），研究关键基因（如 p53、MYC、TERT）在肝癌增殖、侵袭中的作用（如敲除 MYC 后，细胞增殖率下降 60%，侵袭能力减弱 70%）；探索 EMT 调控机制（如 Snail 转录因子对 E - 钙黏蛋白、N - 钙黏蛋白表达的调控）；分析肿瘤微环境因素（如缺氧、炎症因子 IL-6）对肝癌恶性表型的影响（如缺氧诱导 HIF-1α 表达，促进 MMP-9 分泌，增强侵袭能力），为肝癌的分子机制研究提供实验依据。

抗癌药物筛选与评价：适用于肝癌抗癌药物的高通量筛选，如通过 MTT 法、CCK-8 法筛选天然产物、合成化合物或候选药物的抗肝癌活性（筛选 IC₅₀<10μmol/L 的潜在活性药物）；评估药物对肝癌细胞恶性功能的影响（如药物处理后克隆形成率、侵袭能力的变化）；研究药物作用机制（如检测药物对凋亡通路、信号通路的调控，如索拉非尼可抑制 RAF 通路，诱导细胞凋亡）；构建药物耐药模型（长期低剂量药物诱导，建立耐药细胞株），研究耐药机制并筛选逆转耐药的药物组合，为肝癌临床药物治疗提供数据支持。

肝癌侵袭转移研究：可用于肝癌侵袭转移机制的深入研究，如通过 Transwell 实验、划痕实验评估调控因子（如 MMP 抑制剂、EMT 抑制剂）对肝癌细胞迁移、侵袭的影响；分析细胞外基质与肿瘤侵袭的互作（如胶原酶处理基质后，细胞侵袭能力的变化）；构建体内转移模型（如尾静脉注射 HHCC 细胞，建立肺转移或肝内转移模型），研究肝癌的体内转移过程与器官靶向性；探索转移相关标志物（如 CircRNA、miRNA）在肝癌转移中的作用（如 miR-21 过表达可促进 HHCC 细胞肺转移，抑制 miR-21 后转移率下降 75%），为肝癌转移的早期诊断与干预提供靶点。

肝癌诊断标志物与靶向研究：可通过基因芯片、蛋白质组学等技术，筛选肝癌特异性诊断标志物（如差异表达的蛋白、lncRNA），并在 HHCC 细胞中验证其表达与功能（如 AFP、GPC3 的表达水平与细胞恶性程度的相关性）；研究潜在靶向位点（如 PI3K、MMP-9、PD-L1）的生物学功能，评估靶向药物的疗效（如 PI3K 抑制剂可抑制 HHCC 细胞增殖，诱导凋亡）；构建靶向药物的动物模型（如裸鼠移植瘤模型），验证靶向药物的体内抗肿瘤效果，为肝癌的精准诊断与靶向干预提供实验基础。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与表型：台盼蓝染色法检测细胞活力≥85%，传代后 24 小时贴壁率≥90%；免疫荧光或流式细胞术检测 AFP⁺GPC3⁺细胞比例≥80%，CK19⁺细胞比例≥65%；HE 染色可见典型肝细胞癌细胞形态（核大畸形、核分裂象多、细胞排列松散），无正常肝细胞污染（正常肝细胞 ALB 阳性率 < 5%）。

功能验证：平板克隆形成率≥50%；Transwell 侵袭实验 24 小时穿膜细胞数≥200 个 / 视野；细胞分泌 AFP 水平≥20ng/mL/24h（ELISA 检测）；10μmol/L 常用抗癌药物处理 48 小时后，细胞凋亡率≥35%（Annexin V/PI 双染检测）。

遗传与安全性：染色体核型分析显示非整倍体，具有肝癌典型的染色体异常（如 1p 缺失、8q 扩增）；STR 分型与标准 HHCC 细胞图谱一致性≥95%（避免细胞交叉污染）；裸鼠皮下接种成瘤率 100%，肿瘤组织病理诊断为肝细胞癌。

污染检测：无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法检测支原体，培养法检测细菌与真菌）；无人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）污染（ELISA 检测病毒抗原）；无其他肿瘤细胞系交叉污染（STR 分型验证）。

（二）使用注意事项

培养操作：长期培养需每 10 代进行一次表型与功能验证（检测 AFP/GPC3/CK19 表达、克隆形成率、侵袭能力），避免细胞恶性表型漂移（如向良性上皮细胞转化，E - 钙黏蛋白表达升高）；与正常肝细胞严格分开培养（使用独立的培养箱、试剂与耗材，防止交叉污染）；操作时无需过度轻柔（肿瘤细胞耐受性较强，适度吹打可获得单细胞悬液）。

实验设计：开展药物筛选实验时，需设置空白对照组、阳性药物对照组（如索拉非尼）与溶剂对照组；研究侵袭转移实验时，需设置基质胶对照组与阴性对照组（正常肝细胞）；体内成瘤实验需设置不同细胞浓度组（如 1×10⁶、5×10⁶个细胞 / 只裸鼠），评估成瘤的剂量依赖性。

冻存复苏：冻存需选择对数生长期、恶性特征稳定的细胞（增殖活跃、AFP 分泌量≥25ng/mL/24h），冻存液配方为 RPMI-1640 培养基 + 10% DMSO+20% FBS，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时在 37℃水浴中快速融化（1-2 分钟内），加入 10 倍体积预热的新鲜培养基，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后重悬接种；复苏后 24 小时检测活力≥80%，48 小时观察形态，72 小时检测增殖速率，确保功能恢复。