二氢ye酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞特性及研究应用

二氢ye酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞（DHFR⁻CHO细胞）是生物制药领域的核心工程细胞系，通过化学诱变或基因敲除技术使野生型CHO细胞的二氢ye酸还原酶（DHFR）基因功能缺失构建而成。该细胞系因依赖外源性ye酸代谢产物存活，且具备高效的外源基因表达能力，成为重组蛋白药物表达、基因扩增筛选的黄金模型，在单克隆抗体、细胞因子等生物制品研发中不ke或缺。

生物学特性上，DHFR⁻CHO细胞呈现典型上皮细胞形态，体外以贴壁生长为主，部分悬浮适应株呈圆形或类圆形，核质比适中，核仁清晰，胞质均匀。其核心缺陷是DHFR功能缺失——DHFR是ye酸代谢关键酶，负责将二氢ye酸转化为四氢ye酸，缺陷后细胞无法自身合成嘌呤、嘧啶等核酸前体，需在添加次黄piao呤、胸腺嘧啶（HT）的培养基中才能存活。该细胞遗传背景稳定，染色体数目为20-22条，对外源基因整合容纳性强，且具备“基因共扩增"特性：导入含DHFR基因的表达载体后，可通过甲an蝶呤（MTX）加压筛选，使外源目的基因与DHFR基因同步扩增，大幅提升目的蛋白表达量。

体外培养的核心是精准控制筛选压力与代谢需求，zui适环境为37℃、5% CO₂恒温恒湿培养箱。基础培养需使用无血清或低血清CD-CHO培养基，添加HT（次黄piao呤100μM、胸腺嘧啶16μM）满足代谢缺陷；基因转染后筛选阶段，需更换无HT培养基，仅成功整合DHFR基因的细胞可存活；基因扩增阶段则逐步提高MTX浓度（从0.02μM至10μM），诱导目的基因扩增。传代时用0.25%消化酶-EDTA溶液消化3-5分钟，终止后轻柔吹打成单细胞悬液，贴壁株传代比例1:4-1:6，悬浮株按2×10⁵个/mL密度接种。特别注意：MTX加压需梯度进行，避免细胞大量死亡；长期培养需定期检测目的蛋白表达量，防止基因扩增片段丢失。

研究应用中，其价值集中体现于生物制药与基因工程领域。重组蛋白表达方面，是单克隆抗体（如赫赛汀、PD-1抑制剂）、重组人促红细胞生成素（EPO）、凝xue因子等药物的核心生产细胞，通过基因共扩增可实现目的蛋白商业化生产级表达量（1-10g/L）；基因工程研究领域，可用于外源基因表达调控机制解析，探究启动子强度、增强子序列对蛋白表达的影响，优化表达载体构建策略；药物筛选方面，因DHFR是hua疗药物MTX的靶点，该细胞系可用于MTX类药物的药效评估及耐药机制研究，筛选DHFR抑制剂的增效剂；此外，在细胞代谢工程研究中，其ye酸代谢缺陷特性可用于解析嘌呤、嘧啶合成通路，为代谢疾病研究提供模型。

需注意的是，该细胞系对培养基成分敏感，血清或添加剂批次差异会影响表达稳定性，需进行严格的培养基验证；高浓度MTX加压可能导致细胞遗传变异，需建立细胞库进行冻存保种。但凭借高效的基因扩增能力、稳定的蛋白表达特性及与人体蛋白修饰的高度相似性，DHFR⁻CHO细胞已成为生物制药工业的标gan细胞系，支撑了全qiu70%以上的重组蛋白药物研发与生产，为生物制药产业发展提供关键技术支撑。