HL-7702[L-02]人肝细胞源自人胎肝，贴壁生长，具肝特异性代谢、解毒功能，用于肝脏疾病模型构建及药物肝毒性、代谢机制研究。

HL-7702[L-02]人肝细胞

一、细胞基本生物学特性

HL-7702[L-02]人肝细胞（L-02 为该细胞系曾用名，现通用名 HL-7702）源自健康人胎肝细胞，经原代分离纯化与有限传代建立，属正常二倍体肝细胞系，无永生化改造，保留成熟肝细胞的核心生理功能与表型特征，增殖能力有限（传代次数约 25-35 代），是研究肝脏生理代谢、疾病机制及药物安全性评估的经典体外模型。其在模拟体内肝细胞代谢行为、响应肝损伤信号及药物代谢动力学方面表现稳定，广泛应用于肝病学、药理学、毒理学及生物医药领域。

形态上，该细胞呈典型肝细胞形态：常规培养时以多边形、上皮样为主，贴壁生长且呈 “铺路石样" 紧密排列（细胞间连接完整，可见胆小管样结构，模拟肝小叶组织结构），胞体直径 18-25μm；胞质丰富均匀，HE 染色呈弱嗜酸性，含大量线粒体与内质网（光学显微镜下可见胞质轻度颗粒感，为代谢与解毒相关细胞器），部分细胞可见双核（比例约 5%-8%，符合正常肝细胞特征）；细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁 1-2 个，染色质呈细网状均匀分布，核分裂象偶见（正常培养条件下分裂象比例约 1%-2%，增殖活性温和，符合正常体细胞特性）。体外培养时，细胞形态随功能状态动态变化：对数生长期细胞饱满、连接紧密；受肝损伤因子（如四氯化碳）处理后，细胞出现肿胀、空泡化甚至脱落，精准模拟体内肝细胞损伤过程，确保实验结果与肝脏生理病理过程的相关性。

功能特性方面，HL-7702 [L-02] 人肝细胞具备三大核心肝细胞功能，高度贴合体内肝脏生理活动。一是物质代谢功能：表达肝细胞特异性代谢酶（如葡萄糖 - 6 - 磷酸酶、糖原合成酶），可合成并储存糖原（PAS 染色糖原阳性率≥80%）；具备脂质代谢能力，能摄取脂肪酸并合成甘油三酯（油红 O 染色阳性率≥70%）；参与蛋白质合成，持续分泌白蛋白（含量约 15-20μg/10⁶细胞 / 24 小时，ELISA 检测），且白蛋白分泌量随细胞状态稳定维持，是判断其功能正常的关键标志。二是解毒与药物代谢功能：表达完整的药物代谢酶系统，尤其是细胞色素 P450 酶家族（CYP450，如 CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4），活性与正常肝细胞接近，可代谢多种外源性物质（如苯ba比妥）；表达尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）等解毒酶，参与毒物转化与排泄；对肝毒性物质敏感（如 10mmol/L 四氯化碳处理 24 小时后，细胞存活率下降 50%-60%，LDH 释放量增加 4-5 倍），模拟肝脏解毒与毒性响应过程。三是肝损伤与修复响应：对炎症因子（如 TNF-α、IL-6）及肝损伤信号（如 TGF-β）敏感，10ng/mL TNF-α 处理 24 小时后，炎症相关基因（如 IL-8、ICAM-1）表达量升高 5-7 倍；受损伤信号刺激后，可激活 PI3K/Akt 等修复相关通路，促进细胞增殖与存活（损伤后 48 小时，细胞增殖率提升 30%-40%），模拟肝脏损伤后的自我修复机制。

分子表型上，该细胞高表达肝细胞特异性标志物：白蛋白（Albumin，胞质阳性，阳性率≥90%，肝细胞功能核心标志物）、细胞角蛋白 18（CK18，细胞膜及胞质阳性，阳性率≥95%，上皮细胞 lineage 标志物，肝细胞特异性表达）、细胞角蛋白 19（CK19，少量阳性，阳性率 10%-15%，提示细胞保留部分肝干细胞特性），其中 Albumin⁺CK18⁺双阳性是其身份鉴定的核心依据；同时表达药物代谢相关分子（如 CYP3A4，胞质阳性，阳性率≥80%）；细胞内信号通路维持肝细胞功能平衡：AMPK 通路调控糖脂代谢，Nrf2 通路在氧化应激时激活并调控解毒酶表达，JAK/STAT 通路参与炎症响应；无致瘤性（端粒酶活性阴性，裸鼠接种后无肿瘤形成），遗传背景稳定（核型为 46,XX/XY 正常二倍体，染色体畸变率 < 1%），确保实验安全性与重复性。

二、体外培养关键条件

HL-7702 [L-02] 人肝细胞的体外培养需重点维持其肝细胞特异性功能（如白蛋白分泌、CYP450 活性）及正常形态，避免培养条件不当导致功能丢失或细胞分化异常。

培养基选择上，优先使用 RPMI-1640 培养基，添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，低内毒素≤5 EU/mL，无支原体污染，建议选择热灭活血清以减少补体对细胞的损伤）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1mmol/L 丙酮酸钠（提供额外能量）、10μg/mL 胰岛素（促进代谢与白蛋白合成）及 100U/mL 双抗；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 285-310 mOsm/kg。开展药物代谢实验时，需用含 2% FBS 的低血清培养基饥饿处理 12-24 小时；构建肝损伤模型时，可使用无血清培养基以避免血清成分干扰。

培养环境参数需严格控制：温度 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度 95% 以上；温度波动超过 ±1℃会导致细胞增殖率下降 20%-25%，白蛋白分泌减少 30%-40%；CO₂浓度异常会影响细胞活力与 CYP450 活性，需通过培养箱实时监控调整；模拟肝脏缺氧微环境时，可将氧气浓度降至 8%-10%，观察缺氧对细胞代谢的影响。

传代操作需注意：细胞融合度达 70%-80% 时及时传代，用无菌 PBS 轻柔清洗 2 次后，加入细胞消化液 37℃孵育 5-8 分钟，镜下见细胞边缘收缩后加血清终止消化，轻柔吹打至脱落，按 1:2-1:3 比例接种至预包被 0.1% 明胶的培养皿（贴壁率≥90%）；传代次数不宜超过 30 代，避免细胞衰老导致功能衰减。

三、核心科研应用领域

在肝脏疾病机制研究中，该细胞可构建乙型肝炎病毒（HBV）感染模型（转染 HBV 质粒后表达 HBsAg、HBeAg），研究肝损伤机制（如肝毒性物质诱导氧化应激升高），探索肝纤维化早期过程（TGF-β 诱导 α-SMA 上调），为病毒性肝炎、药物性肝损伤等疾病的机制解析提供依据。

药物肝毒性与代谢研究方面，可通过 MTT 法、LDH 释放实验检测药物对细胞活力的影响（计算 IC₅₀值筛选低肝毒性药物），利用 CYP450 酶抑制剂明确药物代谢途径，评估药物代谢产物的毒性，为药物临床前安全性评价提供关键数据。

肝脏代谢功能研究中，可解析糖、脂、蛋白质代谢的调控机制（如胰岛素促进糖原合成），构建非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型（高糖高脂培养基诱导甘油三酯积累），分析肝细胞与肝星状细胞的代谢互作，为代谢性肝病研究提供支持。

抗肝病药物筛选与评价领域，可检测抗 HBV 药物对病毒抗原表达的抑制作用，评价肝保护成分对细胞损伤的修复效果，筛选抗肝纤维化药物（如丹参提取物抑制胶原合成），为肝病治疗药物研发提供实验基础。

四、质量控制与注意事项

质量控制需满足：台盼蓝染色活力≥90%，Albumin⁺CK18⁺细胞比例≥90%；白蛋白分泌≥15μg/10⁶细胞 / 24 小时，CYP3A4 活性≥10pmol/min/mg protein；核型正常，无细菌、真菌、支原体及肝炎病毒污染。

使用时需注意：长期培养每 5 代验证功能，优先使用 10-20 代细胞；与肿瘤细胞分开培养防止交叉污染；冻存选择对数生长期细胞，复苏后 48 小时检测白蛋白分泌恢复情况；操作遵守生物安全二级规范，废弃材料高压灭菌处理。