HL人胚肺二倍体细胞源自人胚胎肺组织，贴壁生长，具正常二倍体核型、有限增殖特性，用于病毒培养、疫苗制备及药物毒性、染色体畸变检测研究。

产品型号：

更新时间：2025-11-12

厂商性质：代理商

访问量：1298

服务热线

021-34556080

立即咨询

产品分类

PRODUCT CLASSIFICATION

细胞/细菌培养试剂

血清细胞株

产品介绍

HL人胚肺二倍体细胞

一、细胞基本生物学特性

HL人胚肺二倍体细胞源自健康人胚胎肺组织（取自合法途径获得的早期胚胎肺叶，经原代分离、纯化建立），属正常二倍体细胞系，保留人类肺上皮细胞的典型生理功能与遗传特征，无永生化改造，具有限增殖能力（Hayflick 极限，传代次数约 40-50 代），是研究肺组织生理功能、病毒感染机制、药物毒性评估及疫苗制备的核心体外模型。其在模拟人肺组织细胞生物学行为、病毒复制环境及药物代谢响应方面表现稳定，广泛应用于病毒学、毒理学、呼吸病学及生物医药领域。

形态上，该细胞呈典型肺上皮细胞形态，常规培养时以梭形、多边形为主，贴壁生长且呈 “上皮样" 排列（细胞间连接紧密，形成单层连续细胞层，无明显聚集现象），胞体直径 12-18μm；胞质丰富均匀，呈弱嗜酸性（HE 染色呈淡红色），含较多线粒体与粗面内质网（光学显微镜下可见胞质轻度颗粒感，参与蛋白合成与代谢）；细胞核呈椭圆形或圆形，位于细胞中央，核仁 1-2 个（清晰可见，染色质呈细网状均匀分布），核分裂象偶见（正常培养条件下分裂象比例约 1%-2%，增殖活性温和，符合正常体细胞特征）。体外培养过程中，细胞形态随传代次数缓慢变化：早期传代（10-20 代）细胞饱满、增殖活跃；后期传代（35 代后）细胞逐渐扁平、增殖减缓，最终进入衰老期（β- 半乳糖苷酶染色阳性率≥80%），符合二倍体细胞 “有限增殖" 的核心特征，确保实验结果与体内正常肺细胞的生理相关性。

功能特性方面，HL 人胚肺二倍体细胞具备三大核心生理功能，高度模拟体内胚肺上皮细胞的生物学行为。一是肺上皮细胞功能保留：表达肺上皮特异性标志物（如细胞角蛋白 8/18，CK8/18，阳性率≥95%），可分泌肺表面活性物质相关蛋白（如 SP-A，少量分泌，约 5-10ng/10⁶细胞 / 24 小时，参与肺表面张力调节）；具备一定的气体交换模拟能力（体外培养时可响应氧气浓度变化，低氧条件下 HIF-1α 表达上调 3-4 倍）；对肺损伤因子（如氧化应激、炎症因子）敏感，H₂O₂（100μmol/L）处理 24 小时后，细胞存活率下降 40%-50%，模拟肺组织损伤过程。二是病毒易感特性：作为经典的病毒培养细胞系，对多种人类呼吸道病毒具高度敏感性，可支持病毒高效复制（如流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒 RSV），病毒感染后 24-48 小时可观察到明显细胞病变效应（CPE，如细胞圆缩、脱落、融合，CPE 出现率≥90%）；同时可支持病毒滴度检测（如 TCID₅₀测定，流感病毒滴度可达 10⁶-10⁷ TCID₅₀/mL），是病毒分离、鉴定及疫苗制备的关键工具。三是遗传稳定性与代谢功能：核型为正常人类二倍体（46,XX/XY，无染色体缺失、易位或扩增，染色体数目与结构稳定），基因表达谱与原代人胚肺细胞高度一致（转录组相似度≥90%）；具备完整的药物代谢酶系统（如 CYP450 酶家族，CYP1A1、CYP2E1 表达量与正常肺细胞接近），可用于药物代谢动力学与毒性评估（如检测药物对细胞活力、线粒体功能的影响）。

分子表型上，该细胞高表达人胚肺上皮细胞特异性标志物：细胞角蛋白 8（CK8，细胞膜及胞质阳性，阳性率≥95%）、细胞角蛋白 18（CK18，阳性率≥95%，上皮细胞 lineage 标志物）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin，细胞膜阳性，阳性率≥90%，上皮细胞连接标志物），其中 CK8⁺CK18⁺双阳性是其身份鉴定的核心依据；同时表达病毒受体相关分子（如流感病毒受体唾液酸 α-2,6 - 半乳糖苷，阳性率≥85%，介导病毒吸附）、炎症响应分子（如 TLR3，阳性率≥80%，介导病毒双链 RNA 识别）；细胞内信号通路维持正常体细胞稳态：PI3K/Akt 通路（基础活性稳定，调控细胞存活与代谢）、p53 通路（细胞衰老时激活，调控增殖停滞，35 代后 p53 表达量上调 2-3 倍）、NF-κB 通路（病毒感染或炎症刺激时激活，介导炎症因子分泌）；无致瘤性相关分子表达（如端粒酶活性阴性，c-Myc、Ras 等癌基因低表达），裸鼠接种后无肿瘤形成，安全性高。

二、体外培养关键条件

HL 人胚肺二倍体细胞的体外培养需重点维持其正常二倍体核型、肺上皮功能及病毒易感特性，避免培养条件不当导致细胞衰老加速或功能丢失。

培养基选择：优先使用 MEM 培养基（含 Earle's 盐，添加 10%-15% 胎牛血清 FBS，低内毒素≤5 EU/mL，无支原体污染，建议选择热灭活血清，减少补体对细胞的影响）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1mmol/L 丙酮酸钠（提供额外能量，维持细胞活性）、100U/mL 青mei素 - 链mei素（抑制细菌污染，避免影响细胞功能）；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 285-310 mOsm/kg。开展病毒培养实验时，需使用含 2%-5% FBS 的低血清培养基（减少血清对病毒复制的干扰）；进行药物毒性实验时，可使用无血清培养基饥饿处理 8-12 小时（消除血清成分对药物的影响）。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度 95% 以上；温度波动超过 ±1℃会导致细胞增殖率下降 20%-25%，病毒易感能力减弱（如流感病毒 CPE 出现时间延迟 12-24 小时）；CO₂浓度低于 4% 会导致培养基 pH 值升高，细胞出现空泡化；高于 6% 则导致 pH 值降低，细胞活力下降，需通过培养箱实时监控调整；病毒培养时可适当提升湿度至 98% 以上，避免培养基过快蒸发影响病毒浓度。

传代操作要点：细胞融合度达 70%-80% 时需及时传代（避免过度融合导致细胞接触抑制增强，加速衰老）；操作步骤：用无菌 PBS 轻柔清洗细胞 2 次（避免破坏细胞间连接），加入 0.05% 胰dan白酶 - 0.02% EDTA 消化液，37℃孵育 5-8 分钟（正常二倍体细胞消化时间较长，需镜下观察至细胞边缘收缩、间隙增大），加入含血清的培养基终止消化，用移液器轻柔吹打至细胞wan全脱落（避免过度吹打导致细胞损伤，影响增殖能力），按 1:2-1:3 比例接种至新培养皿（无需包被，正常上皮细胞可直接贴壁，贴壁率≥90%）；传代过程中需严格控制消化时间（过度消化会导致细胞表面标志物破坏，降低病毒易感能力），且传代次数需记录准确（避免超过 Hayflick 极限，35 代后建议优先使用早期冻存细胞）。

关键注意事项：细胞对血清质量高度敏感（不同批次血清可能导致 CK8/18 表达波动 15%-20%，病毒 CPE 出现率差异 25%），建议长期使用同一批次血清，更换批次前需进行小体积验证（检测细胞活力、病毒感染效率，确保与原批次差异 < 15%）；培养过程中避免频繁换液或剧烈振动（防止细胞损伤，加速衰老）；培养基每 3-4 天更换 1 次（正常二倍体细胞代谢较慢，无需频繁补充营养），更换时保留 1/3 旧培养基（减少环境突变对细胞的刺激）；早期传代细胞（10-20 代）建议大量冻存（每支冻存细胞数≥1×10⁶个），避免后期传代细胞功能衰减影响实验。

三、核心科研应用领域

病毒学研究与疫苗制备：作为经典的病毒培养细胞系，可用于呼吸道病毒（流感病毒、腺病毒、RSV）的分离、鉴定与复制机制研究，如观察流感病毒感染后细胞内病毒核蛋白（NP）的表达动态（感染后 12 小时 NP 阳性率达 80%，24 小时达 95%）；用于病毒滴度测定（TCID₅₀、空斑实验），为抗病du药物筛选提供量化依据（如检测药物对病毒滴度的抑制作用，10μmol/L 药物处理后病毒滴度下降 10³-10⁴倍）；同时是疫苗生产的关键细胞基质（如流感灭活疫苗、腺病毒载体疫苗），其正常二倍体核型确保疫苗安全性（无致瘤性风险）。

肺疾病机制研究：可构建肺损伤、炎症及纤维化的体外模型，如用脂多糖（LPS，1μg/mL）处理模拟肺炎症（处理 24 小时后，炎症因子 IL-6、TNF-α 表达量升高 5-7 倍）；用转化生长因子 -β（TGF-β，5ng/mL）处理模拟肺纤维化（处理 7 天后，胶原 Ⅰ 表达量上调 3-4 倍，细胞形态呈纤维化改变）；研究肺上皮细胞与免疫细胞的互作（如与巨噬细胞共培养，观察巨噬细胞对肺上皮损伤的修复作用），为慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺纤维化等疾病的机制解析提供实验支持。

药物毒性与安全性评估：适用于呼吸道药物、化学毒物的体外毒性检测，如通过 MTT 法、LDH 释放实验评估药物对细胞活力的影响（计算 IC₅₀值，筛选低毒性药物）；检测药物对细胞遗传物质的损伤（染色体畸变实验、彗星实验，如hua疗药物处理后染色体畸变率从 0.5% 升至 15%，提示遗传毒性）；评估药物对肺上皮屏障功能的影响（如 Transwell 小室培养检测药物对细胞单层通透性的改变），为药物临床前安全性评价提供数据。

肺上皮细胞生物学研究：可用于解析肺上皮细胞的分化、增殖与衰老机制，如研究 p53 基因对细胞衰老的调控（沉默 p53 后，细胞传代次数延长 5-8 代，β- 半乳糖苷酶阳性率下降 40%）；探索胚胎肺发育相关基因（如 NKX2.1、GATA6）的功能（过表达 NKX2.1 后，SP-A 分泌量增加 2 倍，肺上皮细胞分化标志物表达上调）；对比正常与疾病状态（如肺癌）肺上皮细胞的表型差异，明确疾病相关分子改变（如肺癌细胞中 CK18 表达异常，E-cadherin 表达下降）。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与表型：台盼蓝染色法检测活力≥90%，传代后 48 小时贴壁率≥90%；流式细胞术检测 CK8⁺CK18⁺细胞比例≥95%，E-cadherin⁺细胞比例≥90%，无杂细胞污染（如成纤维细胞 vimentin 阳性率 < 1%）。

遗传稳定性：染色体核型分析显示为 46,XX/XY 正常二倍体，无染色体异常（畸变率 < 1%）；STR 分型与标准 HL 细胞图谱一致性≥98%（避免细胞交叉污染）；端粒酶活性检测为阴性（排除永生化细胞污染）。

功能验证：流感病毒感染后 24-48 小时 CPE 出现率≥90%，病毒滴度≥10⁶ TCID₅₀/mL；LPS 处理后 IL-6 表达量升高≥5 倍；传代至 40 代后，细胞仍保持≥85% 的标志物阳性率，无明显衰老特征（β- 半乳糖苷酶阳性率 < 30%）。

污染检测：无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法或培养法检测）；无病毒（如 HIV、HBV、HCV）污染（RT-PCR 检测病毒基因）；无细胞交叉污染（STR 分型验证）。

（二）使用注意事项

培养操作：长期培养需每 5 代进行一次核型分析与表型验证（检测 CK8/18 表达、病毒易感能力），避免细胞遗传漂变；传代时严格记录传代次数，优先使用 10-20 代细胞进行实验（功能zui稳定）；与永生化细胞（如肿瘤细胞）分开培养（使用独立培养箱与试剂，防止交叉污染）。

实验设计：开展病毒实验时，需设置未感染对照组与阳性对照细胞（如 Vero 细胞），明确病毒感染效率；进行药物毒性实验时，需设置浓度梯度与溶剂对照组，排除溶剂对细胞的影响；细胞衰老实验需同时设置不同传代次数的细胞组（如 10 代、30 代、40 代），观察衰老相关指标变化。

冻存复苏：冻存需选择早期传代细胞（10-20 代，活力≥95%），冻存液配方为 MEM 培养基 + 10% DMSO+20% FBS，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时在 37℃水浴中快速融化（1 分钟内），加入 10 倍体积预热的 MEM 培养基，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用培养基重悬（避免 DMSO 残留损伤细胞），复苏后 24 小时检测细胞活力（需≥80%），72 小时后再进行实验（确保细胞恢复正常功能）。