HMy2.CIR人B淋巴母细胞由 EB 病毒转化人 B 淋巴细胞获得，悬浮生长，具永生化特性，用于免疫应答、EB 病毒机制及抗体筛选研究，也可作细胞融合亲本。

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更新时间：2025-11-11

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HMy2.CIR人B淋巴母细胞

一、细胞基本生物学特性

HMy2.CIR人B淋巴母细胞源自健康人外周血 B 淋巴细胞，经 EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）体外转化永生化建立，保留正常 B 淋巴细胞的部分免疫功能与表型特征，同时具备无限增殖能力，是研究 B 淋巴细胞生物学、EB 病毒致病机制、免疫应答调控及单克隆抗体制备的核心体外模型。其在模拟 B 细胞活化、分化及病毒感染过程方面表现稳定，广泛应用于免疫学、病毒学、肿瘤学及生物技术领域。

形态上，该细胞呈典型淋巴母细胞形态：常规培养时以圆形或椭圆形为主，悬浮生长（少量细胞轻度贴壁，可通过轻柔吹打分散），胞体直径 8-12μm；胞质透亮，呈弱嗜碱性（Giemsa 染色呈淡蓝色），含少量细小颗粒（线粒体与核糖体，无明显分泌颗粒），部分细胞可见短小微绒毛（光学显微镜下隐约可见，参与细胞间识别）；细胞核大而圆，占细胞体积的 60%-70%，核仁 1-2 个（清晰可见，位于核中央或偏位），染色质呈细网状均匀分布（典型未成熟淋巴细胞特征），核分裂象偶见（正常培养条件下分裂象比例约 2%-3%，增殖活性适中）。体外培养可稳定传代 100 代以上，传代过程中 B 细胞表型与 EB 病毒潜伏感染状态无明显改变，符合长期实验需求。

功能特性方面，HMy2.CIR 细胞具备三大核心功能特征，兼顾 B 淋巴细胞属性与永生化优势。一是免疫相关功能保留：表达 B 细胞特异性表面标志物（如 CD19、CD20、CD21，CD19 阳性率≥95%，CD20 阳性率≥90%），可通过 CD21 结合 EB 病毒 gp350 蛋白（EB 病毒感染 B 细胞的关键受体）；能响应部分免疫刺激信号（如 LPS、IL-4），刺激后可上调共刺激分子 CD80、CD86 表达（CD86 阳性率从基础的 40%-50% 提升至 70%-80%），模拟 B 细胞活化过程；但因永生化改造，其抗体分泌能力较弱（仅分泌少量 IgM，约 5-10ng/10⁶细胞 / 24 小时，需通过细胞融合增强分泌功能）。二是EB 病毒潜伏感染特征：细胞内持续携带 EB 病毒基因组，处于潜伏感染 Ⅲ 型状态（表达 EB 病毒核抗原 EBNA1、EBNA2、EBNA3 及潜伏膜蛋白 LMP1、LMP2），LMP1 阳性率≥85%（EB 病毒致瘤相关蛋白，调控细胞永生化）；潜伏感染状态稳定，无明显病毒颗粒释放（病毒滴度 < 10² PFU/mL，安全性较高），可用于 EB 病毒潜伏感染机制及抗病du药物筛选研究。三是细胞融合兼容性：作为永生化 B 细胞，可与小鼠骨髓瘤细胞（如 SP2/0）进行细胞融合，构建杂交瘤细胞株，融合效率约 10⁻⁴-10⁻³（高于原代 B 细胞），且融合后的杂交瘤细胞可稳定传代并分泌特异性单克隆抗体，是单克隆抗体制备的常用亲本细胞之一。

分子表型上，该细胞高表达 B 淋巴母细胞特异性标志物：CD19（细胞膜阳性，B 细胞 lineage 标志物）、CD20（细胞膜阳性，B 细胞活化相关标志物）、CD21（细胞膜阳性，EB 病毒受体与补体受体），其中 CD19⁺CD20⁺双阳性是其身份鉴定的核心依据；同时表达 EB 病毒潜伏感染相关蛋白：EBNA1（核阳性，维持病毒基因组稳定）、LMP1（细胞膜阳性，调控细胞增殖信号）；免疫相关分子表达特征：MHCⅡ 类分子（HLA-DR，阳性率≥80%，抗原提呈相关）、共刺激分子 CD80/CD86（基础阳性率 40%-60%，刺激后上调）；细胞内信号通路维持永生化与免疫功能平衡：PI3K/Akt 通路（基础活性稳定，调控细胞存活）、NF-κB 通路（LMP1 激活，维持细胞永生化）、JAK/STAT 通路（IL-4 刺激后激活，调控 B 细胞活化）；染色体核型为人类二倍体伴随少量异常（46,XX/XY，部分细胞可见 1-2 条染色体微小缺失，无明显致瘤性染色体改变），与 EB 病毒转化的正常 B 淋巴母细胞分子特征高度一致。

二、体外培养关键条件

HMy2.CIR 细胞的体外培养需重点维持其悬浮生长状态、EB 病毒潜伏感染稳定性及免疫功能，避免培养条件不当导致表型改变或细胞死亡。

培养基选择：优先使用 RPMI-1640 培养基（添加 10%-15% 胎牛血清 FBS，低内毒素≤5 EU/mL，无支原体污染，建议选择热灭活血清，减少补体对细胞的影响）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1mmol/L 丙酮酸钠（提供额外能量，维持悬浮细胞活力）、50μmol/L β- 巯基乙醇（保护细胞内巯基，减少氧化损伤）；培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压 285-310 mOsm/kg。开展 EB 病毒相关实验时，可添加 100U/mL 青mei素 - 链mei素（抑制细菌污染，避免影响病毒潜伏状态）；进行细胞融合前，需使用含 15% FBS 的培养基培养 3-5 天，提升细胞活力（融合前细胞活力需≥90%）。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度 95% 以上；温度波动超过 ±1℃会导致细胞活力下降 15%-20%，EBNA2 表达减少（影响病毒潜伏状态）；CO₂浓度低于 4% 会导致培养基 pH 值升高，细胞出现肿胀；高于 6% 则导致 pH 值降低，细胞呈皱缩状，需通过培养箱实时监控调整。

传代操作要点：细胞密度达 2×10⁵-1×10⁶个 /mL 时需及时传代（悬浮细胞避免密度过高导致营养耗尽或代谢废物积累）；操作步骤：取对数生长期细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟（离心力过大会损伤细胞），弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，调整密度至 5×10⁴-1×10⁵个 /mL，按 1:3-1:5 比例接种至新培养瓶（选择透气盖培养瓶，保证气体交换）；传代过程中无需消化（悬浮生长，避免消化液损伤细胞表面标志物），且需轻柔吹打细胞沉淀（避免细胞聚集成团，影响生长）。

关键注意事项：细胞对血清质量高度敏感（不同批次血清可能导致 CD20 表达波动 25%-30%，EB 病毒潜伏蛋白表达异常），建议长期使用同一批次血清，更换批次前需进行小体积验证（检测细胞活力与 CD19/CD20 阳性率，确保与原批次差异 < 15%）；培养过程中避免剧烈摇晃或振动（防止细胞损伤，影响悬浮状态）；培养基每 2-3 天更换 1 次（悬浮细胞代谢较快，需及时补充营养与清除废物），更换时保留 1/4 旧培养基（减少环境突变对细胞的刺激）。

三、核心科研应用领域

B 淋巴细胞生物学研究：可用于解析 B 细胞活化、分化及信号调控机制，如研究 LMP1 对 B 细胞永生化的作用（沉默 LMP1 基因后，细胞增殖率下降 60%，CD20 表达减少 40%，证实 LMP1 的关键调控作用）；探索免疫刺激信号（如 IL-4、CD40L）对 B 细胞功能的影响（IL-4 处理后，细胞 HLA-DR 表达上调 50%，抗原提呈能力增强）；对比正常原代 B 细胞与永生化 B 细胞的表型差异，明确永生化对 B 细胞功能的影响。

EB 病毒致病机制与抗病毒研究：作为 EB 病毒潜伏感染模型，可用于研究 EB 病毒潜伏基因（如 EBNA2、LMP1）的功能（EBNA2 过表达可激活 CD21 表达，促进病毒基因组复制）；筛选针对 EB 病毒潜伏感染的抗病du药物（如检测药物对 LMP1 表达的抑制作用，10μmol/L 药物处理后，LMP1 阳性率下降 70%，细胞增殖率降低 50%）；研究 EB 病毒与宿主细胞的相互作用（如病毒基因整合位点、宿主细胞信号通路调控）。

单克隆抗体制备：作为杂交瘤技术的常用 B 细胞亲本，可与免疫小鼠的脾细胞融合，构建分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，适用于抗人蛋白抗体（如抗 CD 分子、抗细胞因子抗体）的制备；其永生化特性可确保杂交瘤细胞稳定传代，且抗体分泌能力持久（杂交瘤细胞可连续分泌抗体 6 个月以上，效价稳定）。

免疫相关疾病模型与药物筛选：可用于构建 B 细胞相关疾病（如 B 细胞淋巴瘤、自身免疫病）的体外模型，如通过过表达 LMP1 模拟 EB 病毒相关 B 细胞淋巴瘤的病理特征（过表达后细胞出现异常增殖，NF-κB 通路过度激活）；筛选调控 B 细胞功能的免疫药物（如检测药物对 B 细胞活化标志物 CD86 的抑制作用，50μmol/L 药物处理后，CD86 阳性率从 75% 降至 30%），为 B 细胞相关疾病的治疗提供实验支持。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力与表型：台盼蓝染色法检测活力≥90%，传代后 48 小时细胞密度增长至初始密度的 2-3 倍；流式细胞术检测 CD19⁺CD20⁺细胞比例≥85%，HLA-DR⁺细胞比例≥75%，LMP1⁺细胞比例≥80%。

EB 病毒感染状态：通过 RT-PCR 检测 EB 病毒潜伏基因（EBNA1、LMP1）表达，确保基因表达稳定；病毒释放检测（如空斑实验）显示病毒滴度 < 10² PFU/mL，无明显病毒颗粒释放。

细胞融合能力：与 SP2/0 骨髓瘤细胞融合后，杂交瘤形成率≥10⁻⁴，且融合细胞可稳定分泌抗体（抗体效价≥1:10⁴，ELISA 检测）。

污染检测：无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法或培养法检测）；无其他病毒（如 HIV、HBV、HCV）污染（通过 RT-PCR 或 ELISA 检测病毒标志物）；STR 分型与标准 HMy2.CIR 细胞图谱一致性≥95%（避免细胞交叉污染）。

（二）使用注意事项

培养操作：长期培养需每 10 代进行一次表型验证（检测 CD19/CD20/LMP1 表达），避免细胞表型漂移；与其他悬浮细胞（如 T 细胞、骨髓瘤细胞）分开培养（使用独立培养箱与试剂，防止交叉污染）；操作时轻柔处理细胞，避免反复离心或剧烈吹打（防止细胞表面标志物破坏）。

实验设计：开展 B 细胞活化实验时，需设置未刺激对照组与阳性刺激组（如 LPS 或 IL-4 刺激），明确刺激信号的作用效果；进行 EB 病毒相关实验时，需设置 EB 病毒阴性 B 细胞（如原代 B 细胞）作为对照，区分病毒依赖与非依赖效应；细胞融合实验前，需确保细胞处于对数生长期（活力≥90%），提升融合效率。

冻存复苏：冻存需选择对数生长期细胞（活力≥95%，密度 1×10⁶个 /mL），冻存液配方为 RPMI-1640 培养基 + 10% DMSO+20% FBS+50μmol/L β- 巯基乙醇，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮保存）；复苏时在 37℃水浴中快速融化（1 分钟内），加入 10 倍体积预热的新鲜培养基，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用培养基重悬（避免 DMSO 残留损伤细胞），复苏后 24 小时内避免换液，提升存活率（复苏存活率需≥70%）。