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更新时间:2025-11-11
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HO-8910PM人高转移卵巢癌细胞
一、细胞基本生物学特性
HO-8910PM 人高转移卵巢癌细胞是通过 HO-8910 人卵巢癌细胞(母株)经体外 Transwell 筛选、体内腹腔转移传代诱导获得的高转移衍生株,保留卵巢浆液性囊腺癌的病理特征,且转移潜能显著增强,是研究卵巢癌转移机制、抗转移药物研发及转移相关靶点验证的核心模型。其在模拟卵巢癌腹腔种植、远处转移(如肝、肺转移)及转移微环境互作方面表现稳定,广泛应用于肿瘤转移生物学、妇科肿瘤学及药理学领域。
形态上,该细胞与母株相比更具侵袭表型:常规培养时以长梭形为主,部分呈多边形散在生长(胞体长 16-22μm,宽 10-16μm,比母株略大);胞质质地不均,含少量丝状伪足与层状伪足(光学显微镜下可见,提示强迁移能力),黏液样颗粒减少(PAS 染色阳性率降至 15%-25%,分泌功能减弱,能量更多用于转移相关活动);细胞间连接极松散(几乎无极性排列,黏附能力比母株低 30%-40%);细胞核畸形更明显(多为不规则形,核仁 2-4 个,染色质浓集呈块状,病理性核分裂象比例升至 8%-10%,高于母株)。体外培养以贴壁生长为主,接种后 20-30 小时完成贴壁(比母株快),无接触抑制,可稳定传代 50 代以上,传代过程中高转移表型无明显衰减,符合长期转移研究需求。
功能特性方面,HO-8910PM 细胞的核心优势在于ji强的转移能力,具体表现为三点。一是高效侵袭迁移能力:体外 Transwell 实验(加基质胶)24 小时穿膜细胞数达 150-200 个 / 视野(是母株的 2-3 倍,正常卵巢上皮细胞 < 4 个 / 视野);划痕愈合实验 24 小时愈合率达 80%-90%(母株为 55%-65%);可大量分泌基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9 表达量比母株高 2-3 倍,比正常细胞高 10-15 倍),且酶活性增强(MMP-9 活性比母株高 40%-50%),高效降解腹腔基质与血管基底膜。二是体内转移效率高:腹腔接种 6-8 周龄裸鼠后,14-21 天即可形成腹腔广泛种植(母株需 28-35 天),腹膜、大网膜、肠系膜均可见肿瘤结节,且易发生远处转移(28-35 天肺转移率达 70%-80%,肝转移率达 50%-60%,母株肺转移率 < 30%);尾静脉注射后,14 天肺内转移灶数达 30-50 个 / 肺(母株为 10-15 个 / 肺),模拟临床卵巢癌晚期广泛转移特征。三是转移微环境适应能力强:可分泌更多血管生成因子(VEGF 表达量比母株高 1.5-2 倍),促进肿瘤新生血管形成(体内肿瘤组织血管密度比母株高 50%-60%);分泌趋化因子(CXCL8、CXCL12 表达量高),招募巨噬细胞、成纤维细胞构建转移前微环境;对缺氧环境耐受性强(缺氧条件下增殖率仅下降 10%-15%,母株下降 25%-30%),且缺氧可进一步增强其转移能力(缺氧处理后 MMP-9 表达量再提升 30%)。
分子表型上,该细胞在母株基础上强化转移相关分子特征:高表达卵巢癌标志物(CA125 阳性率≥80%,CK18 阳性率≥90%,与母株接近),同时高表达转移相关标志物:波形蛋白(Vimentin,阳性率≥90%,母株为 60%-70%,EMT 关键蛋白)、CD44(阳性率≥85%,肿瘤干细胞标志物,与转移干性相关)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,阳性率≥75%,调控 MMP 活性);增殖相关蛋白 Ki-67 阳性率≥75%(略高于母株),耐药蛋白 ABCB1 阳性率≥70%(比母株高 10%-15%,转移与耐药协同增强);细胞内转移相关信号通路过度激活:PI3K/Akt 通路(磷酸化 Akt 水平比母株高 60%-70%)、MAPK/ERK 通路(磷酸化 ERK 水平比母株高 50%-60%)、Wnt/β-catenin 通路(β-catenin 核定位率比母株高 40%-50%),且通路抑制剂可显著抑制其转移能力(如 PI3K 抑制剂处理后,穿膜细胞数下降 70%-80%);染色体核型为非整倍体(47-49 条染色体,比母株多 1-2 条染色体异常,如 7 号染色体部分扩增,与转移相关基因富集区域一致),与临床高转移卵巢癌组织分子特征高度吻合。
二、体外培养关键条件
HO-8910PM 细胞的培养需重点维持其高转移表型,避免培养条件不当导致转移能力衰减,部分条件与母株有差异。
培养基选择:优先使用 RPMI-1640 培养基,添加 10% 胎牛血清(FBS 需选择低内毒素批次,≤5 EU/mL,无支原体污染,建议固定批次使用,避免血清差异导致转移表型波动)、1% 非必需氨基酸(NEAA),无需添加生长因子(外源因子可能干扰转移相关通路);培养基 pH 值控制在 7.2-7.4,渗透压 290-320 mOsm/kg。开展转移相关实验(如侵袭实验)前,需用无血清培养基饥饿处理 8-12 小时(比母株短,避免长时间饥饿影响细胞活性);构建转移耐药模型时,药物浓度梯度可比母株高 20%-30%(如从 0.8μmol/L 增至 10μmol/L)。
培养环境参数:温度 37℃±0.5℃,CO₂浓度 5%±0.3%,相对湿度 95% 以上;温度波动超过 ±1℃会导致转移能力下降(如穿膜细胞数减少 25%-30%,母株减少 18%-25%);CO₂浓度异常会导致细胞活力下降,但转移相关蛋白(如 Vimentin)表达短期内无明显改变,需实时监控调整。
传代操作要点:细胞融合度达 60%-70% 时需传代(比母株早,避免过度融合导致细胞聚集,影响转移表型);操作步骤:用无菌 PBS 快速清洗 1 次,加入细胞消化液(37℃孵育 2-4 分钟,比母株消化时间短,因其贴壁能力较弱),镜下见细胞变圆后立即加入含血清培养基终止消化,轻柔吹打至脱落(避免过度吹打破坏伪足结构),按 1:5-1:6 比例接种(比母株接种密度低,给细胞足够空间伸展伪足,维持迁移能力)。
关键注意事项:细胞对血清批次敏感(不同批次血清可能导致 MMP-9 表达波动 30%-40%),首ci使用新批次血清需先进行小体积培养验证(检测 Transwell 穿膜数,确保与原批次差异 < 20%);培养器皿无需包被(包被会增强细胞黏附,减弱转移表型);培养基每 2 天更换 1 次(比母株频繁,因其代谢更快,需及时清除转移相关因子积累)。
三、核心科研应用领域
卵巢癌转移机制研究:是解析转移关键步骤(侵袭、血管穿透、远处定植)的理想模型,如研究 EMT 在转移中的作用(沉默 Vimentin 基因后,穿膜细胞数下降 80%,体内肺转移率降至 10%-20%);通过对比 HO-8910PM 与母株的转录组、蛋白组差异,筛选转移相关基因(如 SNAI1、TWIST1,在 PM 株中高表达),并验证其功能(过表达 SNAI1 可使母株转移能力提升至 PM 株水平);研究转移前微环境构建机制(如 PM 株分泌的 CXCL8 可招募 CD11b⁺细胞至肺组织,促进转移灶形成)。
抗转移药物筛选与评价:适用于高通量筛选抑制转移的药物(如靶向 MMP、VEGF、CXCL8 的药物),如检测 MMP-9 抑制剂对 PM 株的作用(10μmol/L 抑制剂处理后,穿膜细胞数下降 75%,体内肺转移灶数减少 65%);评价药物对转移不同阶段的影响(如抑制侵袭、阻断血管穿透、抑制定植);对比药物对 PM 株与母株的效果差异,筛选针对高转移肿瘤的te效药物。
转移相关靶点验证与诊断标志物筛选:可验证潜在转移靶点(如 CD44、β-catenin),如靶向 CD44 的抗体处理后,PM 株肿瘤干细胞比例下降 60%,转移能力减弱 70%;筛选转移特异性标志物(如 PM 株高表达的 miR-10b、miR-21,血清中含量与转移程度正相关),对比高转移与低转移卵巢癌患者血清,验证其作为转移诊断与预后评估的价值。
转移干预策略研究:研究联合干预方案(如抗转移药物与hua疗药物联合),如 MMP-9 抑制剂与hua疗药物联合使用,不仅提升肿瘤抑制率(比单独hua疗高 30%),还可减少转移发生率(肺转移率从 70% 降至 20%);探索免yi治疗对转移的抑制作用(如 PD-1 抗体处理后,PM 株肺转移灶中 CD8⁺T 细胞浸润增加,转移灶数减少 50%)。
四、质量控制与使用注意事项
(一)质量控制标准
转移能力验证:Transwell(加基质胶)24 小时穿膜细胞数≥150 个 / 视野;裸鼠腹腔接种 21 天腹腔种植率 100%,肺转移率≥70%;MMP-9 表达量比母株高 2 倍以上(Western blot 检测)。
细胞活力与纯度:台盼蓝染色活力≥90%,传代 24 小时贴壁率≥85%;CA125⁺CK18⁺细胞比例≥80%,Vimentin⁺细胞比例≥85%,无杂细胞污染(免疫荧光或流式验证)。
分子表型稳定:Western blot 检测 PI3K/Akt、MAPK/ERK 通路磷酸化水平,需比母株高 50% 以上;STR 分型与标准 HO-8910PM 图谱一致性≥95%(避免与母株或其他细胞混淆)。
稳定性检测:传代 50 代后,Transwell 穿膜数波动 < 20%,体内转移率下降 < 15%,确保长期实验重复性。
(二)使用注意事项
培养操作:长期培养每 8 代验证一次转移能力(检测 Transwell 穿膜数与 Vimentin 表达),避免表型漂移;与母株 HO-8910 分开培养(使用独立培养箱与试剂,防止交叉污染导致转移表型混淆)。
实验设计:开展转移实验需设置母株与正常卵巢上皮细胞对照组,明确 “高转移" 特性的差异;体内实验建议使用裸鼠(无免疫排斥),且每组裸鼠数量≥6 只(确保转移结果统计学有效);检测转移相关指标时,需统一实验条件(如基质胶浓度、细胞接种密度、培养时间)。
冻存复苏:冻存选择对数生长期细胞(活力≥95%,传代 10-30 代,转移表型zui稳定),冻存液配方为 RPMI-1640+10% DMSO+20% FBS,梯度降温(4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮);复苏时 37℃水浴 1 分钟内融化,加入 5 倍体积培养基,离心后轻吹接种(避免剧烈操作破坏伪足),复苏后 24 小时检测细胞活力(需≥85%)。
安全防护:属人类肿瘤细胞系,操作遵守生物安全二级规范,废弃培养物高压灭菌(121℃ 30 分钟);体内实验需符合动物伦理,裸鼠饲养于 SPF 级环境,实验后妥善处理动物尸体。
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