BT-474人乳腺导管瘤细胞

BT-474人乳腺导管瘤细胞是源自60岁女性乳腺浸润性导管癌患者的上皮源性肿瘤细胞系，因稳定表达雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及人表皮生长因子受体2（HER2），兼具激素敏感性与HER2扩增特性，成为研究luminal B型乳腺癌发病机制、靶向治疗及耐药机制的经典模型，为这类乳腺癌的精准诊疗研究提供了关键实验支撑。

生物学特性上，BT-474细胞呈典型的乳腺导管瘤细胞形态，贴壁生长且排列呈巢状或片状，显微镜下以多边形为主，细胞边界清晰，胞质丰富呈嗜酸性，部分细胞可见分泌空泡；细胞核大而圆，核仁明显且多为1-2个，核质比适中，核分裂象可见但较三阴性乳腺癌细胞少。其增殖活性温和，传代周期约48-72小时，具有一定接触抑制特性，密集生长时形成规则的细胞集落。细胞核心表型为ER（+）、PR（+）、HER2（+++），高表达luminal型乳腺癌标志物细胞角蛋白18（CK18），同时携带PIK3CA基因突变，经STR鉴定遗传背景稳定，无微生物污染，体外可稳定维持luminal B型乳腺癌的功能特征。

培养条件需兼顾激素敏感性与HER2信号稳定性：常规采用含10%-15%胎牛血清的RPMI-1640培养基，添加10nmol/L雌二醇以维持激素受体活性，培养环境控制在37℃、5%CO₂及95%相对湿度。胎牛血清中的胰岛素样生长因子（IGF）可协同HER2信号促进细胞增殖，雌二醇能维持ER介导的信号通路活性，保障细胞表型稳定。传代操作时，用无菌PBS轻柔清洗细胞表面2次，加入含0.02%EDTA的0.25%消化液，37℃孵育5-7分钟，待细胞间隙增大后用含血清培养基终止消化，吹打为单细胞悬液按1:2-1:4比例传代，避免剧烈操作破坏细胞间的连接结构。

研究应用中，BT-474细胞是解析luminal B型乳腺癌核心机制的理想工具。在信号通路研究方面，可用于探究ER与HER2信号通路的交叉对话机制，分析PIK3CA突变对AKT/mTOR通路激活的影响，明确激素与生长因子协同调控细胞增殖的分子网络，为开发联合靶向治疗策略提供依据。在耐药机制研究中，因该细胞易对曲妥zhu单抗（HER2抑制剂）和他mo昔芬（ER拮抗剂）产生耐药，常被用于构建耐药模型，筛选耐药相关基因及逆转耐药的潜在靶点。

在药物研发领域，该细胞系应用价值突出：体外可通过CCK-8法检测药物IC50值，结合Western blot分析药物对ER、HER2及PI3K/AKT通路蛋白的调控作用，评估联合用药的协同效应；体内构建裸鼠乳腺肿瘤移植瘤模型时，其成瘤率达95%以上，可直观评估靶向药物的体内抑瘤活性。使用时需注意：传代控制在50代以内，每10代通过免疫染色验证ER、PR及HER2表达稳定性；培养中保持雌二醇浓度恒定，避免激素环境波动导致表型改变；实验中建议设置三阴性乳腺癌细胞（如BT-549）作为对照，明确luminal B型乳腺癌的特异性特征。作为luminal B型乳腺癌研究的标准化模型，BT-474细胞为推动乳腺癌精准治疗提供了不可替代的实验基础。