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更新时间：2025-11-11
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HP615小鼠肺癌瘤株
一、瘤株基本背景与生物学特性
HP615小鼠肺癌瘤株源自 615 近交系小鼠自发肺腺癌组织，经体内连续传代筛选纯化建立，是研究小鼠肺癌发病机制、体内抗肿瘤药物疗效及肿瘤微环境互作的经典动物模型。其遗传背景稳定（近交系小鼠遗传同源性≥98%），保留了肺腺癌的典型病理特征与生物学行为，在模拟肺癌体内生长、转移及药物响应方面表现一致，广泛应用于肿瘤学体内实验、药理学评价及相关抗肿瘤疗法研究领域。
病理特征上，该瘤株接种后形成的肿瘤组织呈典型腺癌细胞形态：癌细胞排列成腺管样或巢状结构，胞质丰富，含少量黏液分泌颗粒（PAS 染色阳性率约 40%-50%），细胞核大而畸形，核仁明显（1-2 个），染色质浓集不均，可见病理性核分裂象（每 10 个高倍视野 5-8 个）。肿瘤生长特性表现为可控性与稳定性：在 615 近交系小鼠背部皮下接种后，5-7 天可见直径 2-3mm 的肿瘤结节，随后进入快速生长期，平均倍增时间约 7-10 天，接种后 21-28 天肿瘤体积可达 1000-1500mm³（符合体内实验的肿瘤体积要求）；肺内原位接种时，14-21 天可形成肺内转移灶（HE 染色可见肺组织内多个癌结节），模拟临床肺癌的肺内扩散过程，且不同批次传代的瘤株生长速率差异 < 15%，确保实验重复性。
体内生物学行为方面，HP615 小鼠肺癌瘤株具备三大核心特征。一是肿瘤微环境适配性：皮下肿瘤组织内血管丰富（CD31 免疫组化染色可见密集血管网，血管密度约 80-100 个 /mm²），伴随少量淋巴细胞浸润（以 CD4⁺、CD8⁺T 细胞为主，占肿瘤浸润免疫细胞的 30%-40%），模拟临床肺癌的免疫微环境状态；肿瘤间质中纤维结缔组织较少（Masson 染色显示胶原纤维占比 < 20%），药物渗透效率较高（比纤维型肿瘤模型药物浓度高 2-3 倍）。二是转移潜能可控：皮下接种时远处转移率低（仅 5%-10% 出现肺转移），适合用于局部肿瘤生长与药物疗效评价；通过尾静脉注射瘤细胞悬液（1×10⁶个 / 只），28-35 天可建立稳定的肺转移模型（肺转移灶数 15-25 个 / 肺），满足转移机制研究需求。三是药物敏感性特征：对临床常用肺癌治疗药物表现出中等敏感性，特定药物（5mg/kg，腹腔注射，每周 1 次，连续 3 周）处理后，肿瘤抑制率达 40%-50%，存活期延长 30%-40%；对靶向药物（如 EGFR 抑制剂）的响应率约 30%-35%，与部分临床肺癌患者的药物响应特征相似，适合用于药物疗效对比研究。
分子表型上，该瘤株高表达肺腺癌相关标志物：细胞角蛋白 7（CK7，阳性率≥90%，肺腺癌特异性上皮标志物）、癌胚抗原（CEA，阳性率≥80%，肿瘤相关抗原）、表皮生长因子受体（EGFR，阳性率≥75%，细胞膜表达），其中 CK7⁺CEA⁺双阳性是其身份鉴定的核心依据；同时表达肿瘤相关蛋白，包括增殖标志物 Ki-67（阳性率≥60%，提示高增殖活性）、血管生成因子 VEGF（阳性率≥85%，促进肿瘤血管生成）、转移相关蛋白 MMP-9（阳性率≥70%，介导细胞外基质降解）；细胞内信号通路异常激活：PI3K/Akt 通路（磷酸化 Akt 阳性率≥65%）、MAPK/ERK 通路（磷酸化 ERK 阳性率≥70%），与临床肺腺癌组织的分子特征高度吻合，确保体内实验结果的临床参考价值。
二、瘤株培养与体内接种操作要点
HP615 小鼠肺癌瘤株的应用需兼顾体内传代维持与实验接种操作，精准控制培养条件与接种参数，保障模型稳定性。
（一）瘤株体内传代与维持
传代动物选择：优先使用 6-8 周龄、体重 18-22g 的雌性 615 近交系小鼠（雌性小鼠肿瘤生长更稳定，排斥反应发生率 < 5%），每代传代小鼠数量≥5 只，避免近亲繁殖导致遗传漂变。
传代操作步骤：取生长状态良好（接种后 21-28 天，体积 800-1200mm³，无坏死）的皮下肿瘤，无菌条件下剥离肿瘤组织，去除包膜与坏死区，用生理盐水冲洗 3 次；将肿瘤组织处理成 1-2mm³ 的小块，用无菌针头将肿瘤小块接种于传代小鼠背部右侧皮下（避开脊柱与血管），每只小鼠接种 1 块；接种后每周测量肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽 ²/2），待肿瘤体积达 1000mm³ 左右时进行下一代传代，传代间隔约 3-4 周，连续传代≤50 代（超过 50 代需重新验证瘤株特性）。
传代注意事项：肿瘤组织处理过程需在 30 分钟内完成（避免组织缺血坏死）；传代过程中使用无菌器械，每只小鼠更换一次针头（防止交叉污染）；若发现肿瘤生长异常（如生长停滞、坏死率 > 30%），需及时更换传代来源（选择其他传代小鼠的肿瘤组织）。
（二）实验性接种与模型构建
皮下肿瘤模型（药物疗效评价常用）：
肿瘤细胞悬液制备：取对数生长期的 HP615 肺癌细胞（体外培养时用 RPMI-1640 培养基 + 10% FBS 培养，细胞活力≥95%），用无血清培养基调整浓度至 5×10⁶个 /mL；
接种操作：取 6-8 周龄 615 小鼠，背部皮下注射 0.2mL 细胞悬液（含 1×10⁶个细胞），每实验组小鼠数量≥6 只（满足统计学要求）；
模型监测：接种后第 5 天开始，每周测量 2 次肿瘤体积与小鼠体重，当肿瘤体积达 100-150mm³ 时开始药物处理（此时肿瘤处于对数生长期，药物敏感性最佳）。
肺原位肿瘤模型（转移机制研究常用）：
麻醉与定位：小鼠用 1% 戊巴bi妥钠（50mg/kg）腹腔麻醉，仰卧固定，左侧胸部去毛消毒；
原位接种：用 1mL 注射器（30G 针头）在小鼠左侧第 4-5 肋间，距胸骨 1-2mm 处垂直进针，深度约 3-4mm，缓慢注射 5×10⁴个细胞（0.05mL 细胞悬液），停留 5 秒后拔针（避免细胞外溢）；
模型验证：接种后 21 天处死小鼠，取肺组织固定切片，HE 染色观察肿瘤灶数量与大小，确保模型构建成功率≥80%。
三、核心科研应用领域
体内抗肿瘤药物疗效评价：可用于筛选抗肿瘤药物、靶向药物及中药复方的体内抗肿瘤活性，如评估新型 EGFR 抑制剂对皮下肿瘤的抑制作用（计算肿瘤抑制率、小鼠存活期延长率）；对比不同给药方案（如静脉注射 vs 口服、单药 vs 联合用药）的疗效差异，为临床用药方案优化提供依据。例如，两种不同作用机制的药物联合处理后，HP615 皮下肿瘤抑制率从单药的 45% 提升至 65%，证实联合用药的协同作用。
肺癌转移机制研究：通过尾静脉注射建立肺转移模型，研究肿瘤细胞与宿主器官的互作机制，如检测肺转移灶中 MMP-9 的表达变化（转移灶中 MMP-9 阳性率比原发灶高 30%-40%）；验证转移相关基因的功能，如沉默肿瘤细胞的 VEGF 基因后，肺转移灶数量从 20 个 / 肺降至 8 个 / 肺，证实 VEGF 对转移的促进作用。
肿瘤免疫微环境研究：利用该模型分析肺癌免疫微环境的动态变化，如检测肿瘤生长过程中 CD8⁺T 细胞的浸润规律（肿瘤体积达 1000mm³ 时，CD8⁺T 细胞浸润比例从早期的 40% 降至 15%，提示免疫抑制微环境形成）；评估针对免疫微环境的抗肿瘤疗法效果，特定抗体（10mg/kg，腹腔注射，每 3 天 1 次）处理后，肿瘤内 CD8⁺T 细胞浸润比例提升至 35%，肿瘤抑制率达 50%-60%。
肺癌诊断与预后标志物验证：通过检测肿瘤组织与小鼠血清中潜在标志物的表达，验证其诊断与预后价值，如发现 HP615 肿瘤小鼠血清中 CEA 浓度比正常小鼠高 15-20 倍，且 CEA 浓度与肿瘤体积呈正相关（R²=0.85），提示 CEA 可作为肺癌进展的监测指标；对比不同转移潜能的肿瘤组织，筛选出转移相关标志物（如 MMP-9、VEGF），为临床肺癌转移预测提供参考。
四、质量控制与使用注意事项
（一）质量控制标准
遗传背景验证：通过 STR 分型检测 615 小鼠遗传纯度，确保与标准 615 近交系小鼠遗传一致性≥98%；瘤株传代过程中每 10 代进行一次短串联重复序列（STR）鉴定，避免遗传漂变。
病理与分子验证：每代传代时取肿瘤组织切片，HE 染色验证腺癌细胞形态，免疫组化检测 CK7、CEA 阳性率（需≥80%）；Western blot 检测 EGFR、PI3K/Akt 通路蛋白表达，确保分子表型稳定。
生长与转移稳定性：记录每代瘤株的皮下生长曲线，确保倍增时间波动 < 20%；肺原位接种模型构建成功率≥80%，转移灶数量差异 < 30%。
微生物检测：传代小鼠需定期进行微生物学检测（每 3 个月一次），确保无细菌（如沙门氏菌、葡萄球菌）、真菌（如念珠菌）及病毒（如小鼠肝炎病毒、仙台病毒）污染，瘤株组织需无菌处理后接种。
（二）使用注意事项
动物伦理与防护：实验需遵守动物伦理审查规范，小鼠饲养环境需符合 SPF 级标准（温度 22-25℃，湿度 40%-60%，12 小时光暗循环）；操作时穿戴无菌手套、口罩，肿瘤组织处理后器械需高压灭菌（121℃，30 分钟），避免生物污染。
模型选择与设计：根据实验目的选择合适模型（皮下模型适合药物疗效，原位模型适合转移研究）；设置空白对照组（生理盐水）、阳性对照组（如常用抗肿瘤药物），每组小鼠数量≥6 只，确保统计学效力；肿瘤体积超过 2000mm³ 时需处死小鼠（符合动物福利要求）。
瘤株保存与复苏：短期保存可通过体内传代维持（每 3-4 周传代一次）；长期保存需将肿瘤组织处理成小块，用含 10% DMSO 的胎牛血清冻存液浸泡，梯度降温后置于液氮保存（-196℃），保存期≤5 年；复苏时取冻存肿瘤组织，解冻后立即接种于 615 小鼠皮下，复苏成功率≥90%。
实验重复性保障：使用同一批次、同周龄的 615 小鼠；瘤株接种前确保细胞活力≥95%；药物处理时严格控制给药剂量、途径与时间，避免操作误差导致结果偏差。
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