HPC-Y5人胰腺细胞源自人正常胰腺外分泌部，贴壁生长，能合成分泌消化酶、响应微环境刺激，可用于胰腺生理、疾病机制研究及相关药物筛选。

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更新时间：2025-11-11

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HPC-Y5人胰腺细胞

一、细胞基本生物学特性

HPC-Y5人胰腺细胞源自健康成年个体的正常胰腺外分泌组织，经体外原代分离、纯化及稳定传代培育而成，是研究胰腺外分泌功能、胰腺疾病机制及相关药物研发的重要体外模型。其完整保留正常胰腺外分泌细胞的结构与功能特征，在模拟胰腺生理活动和病理过程中表现稳定，广泛应用于胰腺生理学、病理学、毒理学等领域。

形态上，该细胞呈典型胰腺外分泌细胞形态，常规培养时以不规则多边形、短柱状为主，部分呈梭形，胞体长 12-18μm、宽 8-14μm；胞质丰富且呈弱嗜碱性，含大量经 PAS 染色呈阳性的分泌颗粒，为消化酶前体储存结构，细胞间通过黏附连接形成松散群落；细胞核大而规则，呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁 1-2 个且清晰，染色质均匀分布呈细颗粒状，正常培养条件下核分裂象比例约 2%-3%，体现稳定增殖能力。体外培养以贴壁生长为主，接种后 36-48 小时完成贴壁，随培养时间推移形成单层细胞群落，无明显接触抑制，融合度达 90% 以上仍可缓慢增殖，且能稳定传代 30 代以上，传至 25 代后仍保持稳定形态与功能。

功能层面，HPC-Y5 人胰腺细胞具备三大核心生理功能。一是消化酶合成与分泌功能，可合成并分泌脂肪酶、胰dan白酶原等胰腺特异性消化酶，在 10nmol/L 胆囊收缩素（CCK）刺激下，消化酶分泌量能提升 2.5-3 倍，且分泌过程受激素调控，胰岛素促进消化酶合成，胰高血糖素则起抑制作用。二是胰腺微环境适应能力，在含成纤维细胞生长因子（FGF）等胰腺间质因子的培养基中活性良好，对脂多糖（LPS）、高浓度消化酶前体等胰腺损伤刺激敏感，1μg/mL LPS 处理 48 小时后，炎症因子 IL-6 表达量升高 5 倍以上，可模拟胰腺炎早期炎症反应。三是代谢调节响应能力，能适应葡萄糖浓度变化，在 25mmol/L 高糖环境下，细胞糖酵解速率提升 30%，胰岛素受体表达上调，维持代谢稳态。

分子表型方面，该细胞高表达胰腺外分泌细胞特异性标志物，胰dan白酶原（Trypsinogen）阳性率≥90%，细胞角蛋白 19（CK19）阳性率≥95%，Trypsinogen⁺CK19⁺双阳性为其身份鉴定核心依据；同时表达多种功能相关蛋白，如胆囊收缩素受体（CCK-R）细胞膜阳性率≥85%、炎症响应蛋白 TLR4、代谢相关蛋白胰岛素受体（IR）阳性率≥80%；细胞内 MAPK/ERK、PI3K/Akt、NF-κB 等信号通路维持正常胰腺细胞te有的稳态，染色体核型为 46,XX/XY 正常二倍体，与健康人胰腺外分泌原代细胞分子特征高度一致。

二、体外培养关键条件

HPC-Y5 人胰腺细胞体外培养需模拟胰腺外分泌部微环境，精准控制各项条件以保障细胞增殖与功能稳定。

培养基选择上，增殖阶段优先采用 DMEM/Ham's F-12（1:1）混合培养基，添加 10% 低内毒素（≤5 EU/mL）且无消化酶污染的胎牛血清（FBS）、10nmol/L 胰岛素、5ng/mL 表皮生长因子（EGF）及 1% 非必需氨基酸（NEAA），培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 290-310 mOsm/kg。若需诱导消化酶分泌，可在培养基中加入 10nmol/L CCK，培养 48 小时后检测分泌量；构建胰腺疾病模型时，根据需求添加刺激物，如 1μg/mL LPS 构建胰腺炎模型、10ng/mL TGF-β1 构建胰腺癌前病变模型，作用时间 48-72 小时。

培养环境参数需严格把控，温度稳定在 37℃±0.5℃，CO₂浓度 5%±0.3%，相对湿度 95% 以上。温度波动超过 ±1℃会导致细胞分泌颗粒减少、消化酶分泌量下降 40%；CO₂浓度异常会改变培养基 pH 值，pH<7.1 或> 7.5 时，细胞活性下降且炎症因子表达异常升高，需通过培养箱实时监控调整。

传代操作需在细胞融合度达 80%-85% 时进行，先用无菌 PBS 轻柔清洗细胞 2 次，加入细胞消化液 37℃孵育 2-3 分钟，待细胞间隙增大、边缘收缩后，加入 8 倍体积含血清培养基中和，轻柔吹打形成单细胞悬液，按 1:4 比例接种至新培养皿。消化时间不宜超过 4 分钟，吹打次数控制在 4-6 次，避免细胞损伤。

培养过程中还需注意，细胞对血清质量与添加因子敏感，劣质血清或无胰岛素培养基会使细胞 72 小时内死亡率达 25% 以上；培养器皿无需额外包被，但需选用表面亲水处理的产品以提升贴壁率至 95% 以上；培养基每 3-4 天更换 1 次，更换时保留 1/3 旧培养基，维持微环境激素与因子稳态，避免全量更换引发细胞应激。

三、核心科研应用领域

胰腺生理机制研究：可用于解析胰腺外分泌功能调控机制，例如沉默 CCK-R 后，消化酶分泌量下降 70% 以上，能证实 CCK 对分泌功能的关键调控作用；通过高糖处理观察细胞糖代谢与消化酶合成关联，发现高糖环境下消化酶 mRNA 表达升高 40%，为理解胰腺生理功能提供实验依据。

胰腺疾病机制研究：可构建多种胰腺疾病体外模型，如 LPS 诱导的急性胰腺炎模型、TGF-β1 诱导的胰腺纤维化模型。在胰腺纤维化模型中，TGF-β1 处理 7 天后，α-SMA 表达升高 8 倍，同时可筛选疾病相关差异基因，如胰腺炎模型中 TLR4 通路相关基因高表达，为明确胰腺疾病发病机制提供直接证据。

胰腺相关药物筛选与评价：适用于高通量筛选治疗胰腺疾病的候选药物，如检测甘草酸苷对 LPS 诱导炎症反应的抑制作用，50μmol/L 甘草酸苷处理后，IL-6 表达下降 60%；还可评价药物对胰腺功能的影响，通过检测消化酶分泌量与细胞活性，判断药物的胰腺保护作用或潜在毒性，如部分抗生素会导致消化酶分泌减少，提示存在胰腺毒性风险。

胰腺疾病诊断标志物验证：可验证胰腺疾病诊断标志物的临床价值，如检测胰腺炎患者血清中胰dan白酶原激活肽含量，发现患者血清中该物质含量比健康人高 8 倍以上；通过蛋白质组学技术筛选 HPC-Y5 细胞与胰腺病变细胞的差异蛋白，挖掘 S100A8 等新型诊断标志物，该蛋白在病变细胞中高表达。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力：采用台盼蓝染色法检测，活力需≥90%，死细胞比例 < 10%；

纯度检测：Trypsinogen⁺CK19⁺细胞比例≥90%，无胰腺导管细胞、成纤维细胞等杂细胞污染；

功能验证：CCK 刺激后消化酶分泌量提升≥2 倍，LPS 处理后 IL-6 表达量升高≥4 倍；

污染检测：确保无细菌、真菌、支原体及 HIV、HBV、EBV 等病毒污染，STR 分型与标准 HPC-Y5 细胞图谱一致性≥95%；

稳定性检测：传代至 30 代后，仍保持≥85% 的标志物阳性率与稳定的分泌功能。

（二）使用注意事项

培养操作：避免频繁更换血清批次，不同批次血清可能导致细胞功能波动；培养过程中定期观察分泌颗粒数量，颗粒减少提示细胞功能下降。

实验设计：开展药物筛选时，需设置溶剂对照组与阳性对照组，如用已知抗炎作用的药物作为胰腺炎模型的阳性对照；检测消化酶分泌时，收集无血清培养上清，避免血清成分干扰检测结果。

冻存复苏：冻存需选择活力≥95% 的对数生长期细胞，冻存液配方为 DMEM/F12 培养基 + 10% DMSO+20% FBS+10nmol/L 胰岛素，采用梯度降温法保存至液氮；复苏时在 37℃水浴中 1-2 分钟快速融化，加入 5 倍体积含血清培养基，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，接种后 48 小时内不更换培养基。