HPC-Y5人胰腺细胞系源自人胰腺组织，贴壁生长，具胰腺细胞相关功能特征，可用于胰腺生理机制、胰腺疾病发病机制研究，也为抗胰腺疾病药物筛选提供体外模型。

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更新时间：2025-11-11

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HPC-Y5人胰腺细胞系

一、细胞基本生物学特性

HPC-Y5人胰腺细胞系源自人正常胰腺组织（取自健康成年个体胰腺外分泌部，经体外原代分离、纯化及稳定传代培养建立），是研究人类胰腺外分泌功能调控、胰腺疾病（如胰腺炎、胰腺癌前病变）发病机制及胰腺相关药物研发的核心体外模型。其完整保留了正常胰腺外分泌细胞的结构特征与功能表型，在模拟胰腺消化酶分泌、胰腺微环境响应及病理损伤过程方面表现稳定，广泛应用于胰腺生理学、病理学、毒理学及临床转化医学领域。

形态上，该细胞呈典型胰腺外分泌细胞形态，常规培养状态下以不规则多边形、短柱状为主，部分细胞呈梭形（胞体长 12-18μm，宽 8-14μm）；胞质丰富呈弱嗜碱性，含大量分泌颗粒（经 PAS 染色呈阳性，为消化酶前体储存结构），细胞间形成松散连接（存在黏附连接，维持细胞群落结构）；细胞核大而规则，呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀（呈细颗粒状），核分裂象常见（正常培养条件下分裂象比例约 2%-3%，体现稳定增殖特性）。体外培养以贴壁生长为核心特性，细胞接种后 36-48 小时内完成贴壁，初期排列稀疏，随培养时间延长逐渐形成单层细胞群落，无明显接触抑制（融合度达 90% 以上时仍可缓慢增殖）；常规培养条件下可稳定传代 30 代以上，传代至 25 代后仍保持稳定的形态与功能，符合细胞系的长期研究需求。

功能特性方面，HPC-Y5 人胰腺细胞系具备正常胰腺外分泌细胞的三大核心生理功能：一是消化酶合成与分泌功能，可合成并分泌胰腺特异性消化酶（如脂肪酶、胰dan白酶原），在胆囊收缩素（CCK，10nmol/L）刺激下，消化酶分泌量提升 2.5-3 倍，且分泌过程受激素精准调控（胰岛素可促进消化酶合成，胰高血糖素则抑制）；二是胰腺微环境适应能力，可在含胰腺间质因子（如成纤维细胞生长因子 FGF）的培养基中维持良好活性，对胰腺损伤相关刺激（如脂多糖 LPS、高浓度消化酶前体）具敏感性，LPS（1μg/mL）处理 48 小时后，炎症因子 IL-6 表达量升高 5 倍以上，模拟胰腺炎早期炎症反应；三是代谢调节响应，对葡萄糖浓度变化具适应性，在高糖（25mmol/L）环境下，细胞糖酵解速率提升 30%，同时胰岛素受体表达上调，维持代谢稳态。

分子表型上，该细胞高表达胰腺外分泌细胞特异性标志物：胰dan白酶原（Trypsinogen，阳性率≥90%，胰腺外分泌细胞特征蛋白）、细胞角蛋白 19（CK19，阳性率≥95%，上皮细胞标志物），其中 Trypsinogen⁺CK19⁺双阳性表型是其身份鉴定的核心依据；同时表达胰腺功能相关蛋白，包括分泌调控蛋白（胆囊收缩素受体 CCK-R，细胞膜阳性率≥85%）、炎症响应蛋白（TLR4，介导 LPS 信号通路）、代谢相关蛋白（胰岛素受体 IR，阳性率≥80%）；细胞内存在正常胰腺细胞te有的信号通路稳态：MAPK/ERK 通路（调控消化酶分泌与增殖）、PI3K/Akt 通路（维持细胞存活与代谢）、NF-κB 通路（介导炎症响应，基础状态下低活性）；染色体核型为正常人类二倍体（46,XX/XY，无染色体缺失、扩增或易位），与健康人胰腺外分泌原代细胞的分子特征高度一致，确保实验结果的生理相关性与可靠性。

二、体外培养关键条件

HPC-Y5 人胰腺细胞系的体外培养需模拟胰腺外分泌部微环境，精准控制营养与信号因子，兼顾增殖与功能维持：

培养基选择：增殖阶段优先使用 DMEM/Ham's F-12 混合培养基（1:1 比例），添加 10% 胎牛血清（FBS，低内毒素≤5 EU/mL、无消化酶污染产品）、10nmol/L 胰岛素、5ng/mL 表皮生长因子（EGF，维持增殖活性）、1% 非必需氨基酸（NEAA），培养基 pH 值控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 290-310 mOsm/kg；若需诱导消化酶分泌功能，可在培养基中添加 10nmol/L 胆囊收缩素（CCK），培养 48 小时后检测消化酶分泌量；开展胰腺疾病模型实验时，根据需求添加刺激物（如胰腺炎模型加 1μg/mL LPS，胰腺癌前病变模型加 10ng/mL TGF-β1），作用时间 48-72 小时。

培养环境参数：温度稳定维持在 37℃（±0.5℃），CO₂浓度控制在 5%（±0.3%），相对湿度 95% 以上；温度波动超过 ±1℃会导致细胞分泌颗粒减少、消化酶分泌量下降 40%；CO₂浓度异常会改变培养基 pH 值，当 pH<7.1 或> 7.5 时，细胞活性下降，炎症因子表达异常升高，需通过培养箱实时监控调整。

传代操作要点：细胞融合度达 80%-85% 时需及时传代（避免过度融合导致功能下降），操作步骤如下：用无菌 PBS 轻柔清洗细胞 2 次（避免用力冲洗破坏分泌颗粒），加入细胞消化液（37℃孵育 2-3 分钟），显微镜下观察到细胞间隙增大、边缘收缩时，立即加入含血清培养基（体积为消化液的 8 倍）中和，用移液器轻柔吹打（沿培养皿壁缓慢吹打，避免反复用力）形成单细胞悬液，按 1:4 比例接种至新培养皿；传代过程中需注意，消化时间不宜超过 4 分钟（否则细胞活性下降至 80% 以下），吹打次数控制在 4-6 次（减少细胞损伤）。

关键注意事项：细胞对血清质量与添加因子敏感，劣质血清或无胰岛素培养基会导致细胞 72 小时内死亡率达 25% 以上；培养器皿无需额外包被（细胞可通过自身黏附分子直接贴壁），但需使用表面经亲水处理的培养皿（提升贴壁率至 95% 以上）；培养基需每 3-4 天更换 1 次（细胞代谢较快，避免代谢废物积累），更换时保留 1/3 旧培养基（维持微环境中激素与因子稳态），避免全量更换导致细胞应激。

三、核心科研应用领域

胰腺生理机制研究：可用于解析胰腺外分泌功能调控机制，如沉默胆囊收缩素受体（CCK-R）后，观察消化酶分泌变化（分泌量下降 70% 以上，证实 CCK 对分泌功能的关键调控作用）；研究代谢对胰腺功能的影响，通过高糖处理观察细胞糖代谢与消化酶合成的关联（高糖下消化酶 mRNA 表达升高 40%，揭示代谢与分泌的协同关系），为理解胰腺生理功能提供实验依据。

胰腺疾病机制研究：构建多种胰腺疾病体外模型，如急性胰腺炎模型（LPS 诱导）、胰腺纤维化模型（TGF-β1 诱导），检测模型中炎症因子（IL-6、TNF-α）、纤维化相关蛋白（α-SMA、胶原 Ⅰ）的表达变化（TGF-β1 处理 7 天后，α-SMA 表达升高 8 倍）；筛选疾病相关差异基因（如胰腺炎模型中 TLR4 通路相关基因高表达），为明确胰腺疾病发病机制提供直接证据。

胰腺相关药物筛选与评价：用于高通量筛选治疗胰腺疾病的候选药物，如检测中药活性成分（如甘草酸苷）对 LPS 诱导的炎症反应抑制作用（甘草酸苷 50μmol/L 处理后，IL-6 表达下降 60%）；评价药物对胰腺功能的影响，通过检测药物处理后消化酶分泌量、细胞活性，判断药物的胰腺保护作用或潜在毒性（如某些抗生素会导致消化酶分泌减少，提示胰腺毒性风险）。

胰腺疾病诊断标志物验证：验证胰腺疾病诊断标志物的临床价值，如检测胰腺炎患者血清中与 HPC-Y5 细胞分泌相关的蛋白（如胰dan白酶原激活肽），对比健康人与患者的表达差异（患者血清中含量比健康人高 8 倍以上）；通过蛋白质组学技术筛选 HPC-Y5 细胞与胰腺病变细胞的差异蛋白，挖掘新型诊断标志物（如炎症相关蛋白 S100A8 在病变细胞中高表达）。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

细胞活力：台盼蓝染色法检测活力≥90%（死细胞比例 < 10%）；

纯度检测：Trypsinogen⁺CK19⁺细胞比例≥90%，无胰腺导管细胞、成纤维细胞等杂细胞污染；

功能验证：CCK 刺激后消化酶分泌量提升≥2 倍，LPS 处理后 IL-6 表达量升高≥4 倍；

污染检测：无细菌、真菌、支原体、病毒（如 HIV、HBV、EBV）污染，STR 分型与标准 HPC-Y5 细胞图谱一致性≥95%；

稳定性检测：传代至 30 代后，仍保持≥85% 的标志物阳性率与稳定的分泌功能。

（二）使用注意事项

培养操作：避免频繁更换血清批次（不同批次血清可能导致细胞功能波动）；培养过程中需定期观察分泌颗粒数量（通过倒置显微镜观察，颗粒减少提示功能下降）；

实验设计：开展药物筛选时，需设置溶剂对照组与阳性对照组（如用已知抗炎作用的药物作为胰腺炎模型的阳性对照）；检测消化酶分泌时，需收集无血清培养上清（避免血清成分干扰检测结果）；

冻存复苏：冻存需选择对数生长期细胞（活力≥95%），冻存液配方为 DMEM/F12 培养基 + 10% DMSO+20% FBS+10nmol/L 胰岛素，梯度降温至液氮保存；复苏时在 37℃水浴中 1-2 分钟内快速融化，立即加入 5 倍体积含血清培养基，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，接种后 48 小时内不更换培养基；