HS-746T人胃癌细胞源自人胃癌组织，贴壁生长呈上皮样，具恶性增殖特性，可用于胃癌发病机制、转移及耐药研究，也可用于抗胃癌药物筛选。

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更新时间：2025-11-11

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HS-746T人胃癌细胞

一、细胞基本生物学特性

HS-746T人胃癌细胞源自人胃癌组织（病理类型为未分化胃癌，取自晚期胃癌患者的原发灶），经体外原代分离、纯化及传代培养建立细胞株，是研究人类胃癌恶性生物学行为、发病机制及抗胃癌药物筛选的重要体外模型。其完整保留了胃癌细胞的核心恶性特征，在模拟肿瘤增殖、侵袭转移及耐药性形成方面表现稳定，广泛应用于肿瘤学、药理学、分子生物学及临床转化医学研究领域。

形态上，该细胞呈典型上皮源性肿瘤细胞形态，常规培养状态下以多边形、不规则圆形为主，部分细胞呈梭形（胞体长 12-20μm，宽 8-15μm）；胞质丰富呈嗜酸性，可见少量颗粒状物质（为肿瘤细胞代谢旺盛的特征），部分细胞存在多核或核畸形现象（体现恶性肿瘤细胞的核异常特征）；细胞核大而圆，位于细胞一侧（偏心位），核仁明显且数量增多（2-3 个），染色质分布不均（呈粗颗粒状或块状），核分裂象易见（正常培养条件下分裂象比例约 5%-8%）。体外培养以贴壁生长为核心特性，细胞接种后 24-36 小时内完成贴壁，初期排列疏松，随培养时间延长逐渐融合形成单层，且存在重叠生长现象（无接触抑制，为恶性肿瘤细胞的典型特征）；常规培养条件下可无限传代（具永生化特性），增殖速率快，倍增时间约 28-36 小时，传代后可快速恢复增殖活性（48 小时内增殖率提升 3-4 倍）。

功能特性方面，HS-746T 人胃癌细胞具备胃癌细胞的三大核心恶性功能：一是强恶性增殖能力，细胞周期进程异常加快（G1 期缩短，S 期细胞比例升高至 35% 以上），可在低血清培养基（2% FBS）中维持高效增殖（正常成纤维细胞在此条件下增殖显著受抑），且对营养剥夺的耐受性较强（葡萄糖浓度降至 1g/L 时，增殖率仅下降 15% 左右）；二是高侵袭转移潜能，细胞可分泌基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9，降解基底膜胶原），Transwell 侵袭实验中 24 小时穿膜细胞数达 80-120 个 / 视野（显著高于正常上皮细胞），划痕实验中 24 小时划痕愈合率达 70% 以上（体现强迁移能力），可模拟体内胃癌细胞突破胃壁屏障、发生淋巴结转移的过程；三是耐药性特征，细胞高表达耐药相关蛋白（如 P - 糖蛋白 P-gp、多药耐药相关蛋白 MRP1），对多种常用抗胃癌药物存在天然耐药性（IC50 值为敏感胃癌细胞的 2-3 倍），可用于胃癌耐药机制研究及耐药逆转药物筛选。

分子表型上，该细胞高表达胃癌相关标志物：上皮细胞黏附分子（EpCAM，阳性率≥95%）、细胞角蛋白 18（CK18，阳性率 100%，为上皮源性肿瘤的特征标志物）、癌胚抗原 CEA（阳性率约 60%-70%，为胃癌诊断相关标志物），其中 EpCAM⁺CK18⁺双阳性表型是其身份鉴定的核心依据；同时表达恶性肿瘤相关蛋白，包括增殖相关蛋白（Ki-67，阳性率≥80%，反映高增殖活性）、侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9，表达量显著高于正常胃黏膜细胞）、耐药相关蛋白（P-gp、MRP1，膜定位表达）；细胞内存在胃癌相关异常激活的信号通路：PI3K/Akt/mTOR 通路（持续激活，促进细胞存活与代谢重编程）、NF-κB 通路（异常激活，调控炎症与耐药基因表达）、Wnt/β-catenin 通路（激活后促进肿瘤细胞增殖与干细胞样特性维持）；染色体核型为非整倍体（染色体数目 48-52 条，存在染色体缺失、易位等异常），与临床晚期胃癌患者肿瘤细胞的分子特征高度一致，确保实验结果的临床相关性与转化价值。

二、体外培养关键条件

HS-746T 人胃癌细胞的体外培养需精准控制环境与营养条件，兼顾细胞增殖需求与恶性特征维持：

培养基选择：增殖阶段优先使用 RPMI-1640 培养基（或 DMEM 高糖培养基），添加 10% 胎牛血清（FBS，需选择热灭活处理的产品，避免血清中补体成分影响细胞活性），培养基 pH 值严格控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 280-300 mOsm/kg；若需诱导特定功能状态（如模拟药物耐药模型，可逐步提高目标药物浓度至 1μg/mL，培养 2-3 周建立耐药亚株；模拟侵袭表型增强模型，可添加 10ng/mL TGF-β1，48 小时后 MMP-9 表达量提升 2 倍以上）；开展药物敏感性实验时，需使用无血清培养基稀释药物（避免血清成分与药物发生相互作用），药物作用时间根据实验目的调整（增殖抑制实验为 48-72 小时，凋亡检测实验为 24-48 小时）。

培养环境参数：温度需稳定维持在 37℃（±0.5℃），CO₂浓度控制在 5%（±0.3%），相对湿度保持 95% 以上；温度波动超过 ±1℃会导致细胞增殖速率下降 25% 以上，低温（<35℃）还会诱导细胞凋亡（凋亡率升高至 10% 以上）；CO₂浓度异常会改变培养基 pH 值，当 pH<7.0 时细胞贴壁能力下降，pH>7.6 时胞质颗粒增多、核固缩现象增加（提示细胞损伤），需通过培养箱 CO₂调节系统及时校正。

传代操作要点：细胞融合度达 70%-80% 时需及时传代（避免过度融合导致细胞脱落与凋亡），操作步骤如下：用无菌 PBS 快速清洗细胞 1 次（去除残留培养基与代谢废物，避免长时间清洗导致细胞脱壁），加入细胞消化液（覆盖培养皿底部即可），37℃孵育 1-2 分钟（显微镜下观察到细胞间隙增大、形态变圆即可终止），立即加入含血清培养基（体积为消化液的 5-10 倍）中和消化液，用移液器轻轻吹打（沿培养皿壁圆周方向吹打，避免反复用力导致细胞破碎）形成单细胞悬液，按 1:3-1:5 比例接种至新培养皿；传代过程中需注意，消化时间不宜过长（超过 3 分钟会导致细胞活性下降至 80% 以下），吹打力度需适中（过度吹打会破坏细胞表面黏附分子，影响后续侵袭实验结果）。

关键注意事项：细胞对血清质量敏感，需选择低内毒素（≤5 EU/mL）、批次间差异小的胎牛血清（建议同一实验使用同一批次血清，避免批次差异导致耐药性检测结果偏差），劣质血清会导致细胞增殖率下降 30% 以上，MMP-9 表达量减少 40%；培养器皿无需额外包被（细胞可通过自身黏附分子快速贴壁），但需确保培养皿表面洁净无划痕（划痕会影响细胞迁移路径，导致划痕实验结果不准确）；培养基需每周更换 2-3 次（因细胞代谢旺盛，易产生大量酸性代谢产物，导致培养基 pH 值快速下降），避免培养基变黄后继续使用（pH<7.0 时会抑制细胞增殖）。

三、核心科研应用领域

依托与临床胃癌细胞的高度相似性及强恶性特征，HS-746T 人胃癌细胞在科研与应用领域具有重要价值：

胃癌恶性机制研究：可用于解析胃癌细胞恶性增殖、侵袭转移的分子机制，如探索 PI3K/Akt/mTOR 通路抑制剂对细胞周期的调控作用（抑制剂处理后 G1 期细胞比例升高至 50% 以上，S 期比例下降）、MMP-2/MMP-9 对基底膜降解的分子机制（沉默 MMP-9 后，Transwell 穿膜细胞数减少 60% 以上）、耐药蛋白 P-gp 的药物外排机制（检测 P-gp 抑制剂维拉帕米对目标药物 IC50 值的影响，可使 IC50 降低 50% 左右）；通过基因沉默（siRNA）、过表达等技术，研究胃癌相关基因（如 MYC、TP53 突变体）对细胞恶性表型的调控作用，为挖掘胃癌驱动基因、明确发病机制提供实验依据。

胃癌疾病模型构建与机制研究：可构建多种胃癌相关疾病模型：①胃癌药物耐药模型（通过逐步提高药物浓度建立耐药亚株，耐药指数达 3.5，用于研究耐药形成机制）；②胃癌转移模型（通过 Transwell 小室筛选高侵袭亚株，24 小时穿膜细胞数达 150 个 / 视野以上，用于研究转移相关基因表达特征）；③胃癌微环境模型（与胃癌相关成纤维细胞、巨噬细胞共培养，模拟体内肿瘤 - 微环境相互作用，观察微环境细胞对胃癌细胞侵袭能力的促进作用）；通过检测模型细胞中疾病标志物（如耐药相关蛋白 P-gp、转移相关基因 Twist1）的表达变化，为胃癌耐药、转移的临床干预提供靶点。

抗胃癌药物筛选与评价：可用于高通量筛选抗胃癌候选药物，涵盖多种药物类型：①常用抗胃癌药物的新剂型或联合用药方案，通过 MTT 法检测药物对细胞增殖的抑制率，计算 IC50 值（评价药物敏感性）；②靶向药物（如抗 EGFR 抗体、PI3K 抑制剂），通过 Western Blot 检测靶点蛋白磷酸化水平（评价药物作用效果），流式细胞术检测细胞凋亡率（评价药物诱导凋亡能力）；③中药活性成分（如姜黄素），通过 Transwell 实验检测药物对细胞侵袭的抑制作用（如姜黄素浓度为 20μM 时，穿膜细胞数减少 70% 以上）；同时可用于药物耐药逆转研究，如筛选 P-gp 抑制剂（如维拉帕米、槲皮素），观察其对耐药细胞 IC50 值的降低效果（逆转倍数达 2-3 倍），为临床胃癌耐药患者的治疗提供新策略。

胃癌诊断标志物与治疗靶点研究：可用于挖掘胃癌诊断相关标志物，如通过蛋白质组学技术筛选 HS-746T 细胞与正常胃黏膜细胞的差异表达蛋白（如发现血清中 CEA、CA19-9 的分泌水平显著升高，可作为胃癌诊断的候选标志物）；通过 CRISPR/Cas9 基因编辑技术敲除候选治疗靶点（如 MMP-9、PI3K），观察细胞恶性表型的变化（如敲除 MMP-9 后，细胞侵袭能力下降 80%，体内移植瘤生长减缓 50%），验证靶点的临床价值；还可用于胃癌预后评估研究，如检测细胞中耐药蛋白、转移相关基因的表达水平，分析其与临床胃癌患者预后（如生存期、复发率）的相关性，为胃癌患者个体化治疗方案制定提供参考。

四、质量控制与使用注意事项

（一）质量控制标准

合格的 HS-746T 人胃癌细胞需满足以下检测指标：

细胞活力：台盼蓝染色法检测活力≥90%（死细胞比例 < 10%）；

微生物污染检测：PCR 法或培养法检测无细菌、真菌、支原体、病毒（如 HIV、HBV、EBV）污染（肿瘤细胞长期培养易受支原体污染，需定期检测）；

身份鉴定：①免疫荧光染色验证 EpCAM⁺CK18⁺CEA⁺表型，阳性率≥90%；②短串联重复序列（STR）分型检测，与标准 HS-746T 细胞 STR 图谱一致性≥95%（避免细胞交叉污染）；

功能指标：①增殖特性：倍增时间稳定在 28-36 小时，Ki-67 阳性率≥80%；②侵袭能力：Transwell 实验 24 小时穿膜细胞数≥80 个 / 视野；③耐药性：对常用抗胃癌药物的 IC50 值≥5μg/mL（符合耐药特征）；

核型分析：染色体数目为 48-52 条，存在明确的染色体异常（如 7 号染色体扩增、17 号染色体缺失），与胃癌细胞核型特征一致。

（二）使用注意事项

培养操作：①细胞培养需在生物安全柜中进行（因肿瘤细胞具潜在生物危害，需符合生物安全二级标准），操作前后需对台面进行消毒（使用 75% 乙醇擦拭）；②避免频繁传代（建议每 2-3 天传代 1 次，过度传代可能导致细胞恶性表型改变，如侵袭能力下降）；③培养过程中需定期观察细胞形态（每周至少观察 3 次），若发现细胞出现大量漂浮、核固缩等异常现象，需及时更换培养基或重新复苏细胞；

功能实验要点：①开展侵袭转移实验时，Transwell 小室需提前用 Matrigel 胶包被（浓度 50μg/mL，37℃孵育 4 小时使其凝固），避免未包被导致假阳性结果；②药物敏感性实验中，药物需用无血清培养基稀释（避免血清成分与药物结合影响药效），且设置浓度梯度（至少 5 个浓度点），确保 IC50 值计算的准确性；③流式细胞术检测凋亡时，需使用 Annexin V-FITC/PI 双染法（区分早期凋亡与晚期凋亡细胞），避免单独使用 PI 染色导致结果偏差；

细胞冻存与复苏：①冻存需选择对数生长期细胞（活力≥95%），冻存液配方为 RPMI-1640 培养基 + 10% DMSO+20% FBS，采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮长期保存），冻存密度为 1×10⁶-2×10⁶cells/mL（确保复苏后细胞浓度适宜）；②复苏时需在 37℃水浴中快速融化（1-2 分钟内完成），立即加入 5 倍体积含血清培养基（稀释 DMSO，降低细胞毒性），1000rpm 离心 5 分钟后弃上清（去除死细胞与残留 DMSO），接种后 24 小时内不更换培养基（让细胞充分贴壁恢复活性）；

实验设计原则：①进行药物筛选或机制研究时，需设置空白对照组（仅培养基）、溶剂对照组（含药物溶剂，如 0.1% DMSO）、阳性对照组（如常用抗胃癌药物，浓度 5μg/mL），每组至少 3 个复孔，重复实验 3 次以上；②因细胞具永生化特性，长期培养后可能出现表型漂移（如耐药性增强），建议每 6 个月从液氮中复苏早期传代细胞（如 P10-P20 代），确保实验结果的一致性；③开展体内移植瘤实验时，需选择免疫缺陷小鼠（如裸鼠、NOD/SCID 小鼠），接种细胞密度为 1×10⁶cells / 只（确保成瘤率≥90%），定期测量肿瘤体积（每周 2 次），分析药物对肿瘤生长的抑制作用。

上一个：去氢睾酮试剂盒