MKN-28 人胃癌细胞 源自人高分化胃腺癌，贴壁生长，具胃腺癌细胞特征且增殖稳定，是胃癌分化机制、药物敏感性研究及相关药物筛选的重要模型。

MKN-28 人胃癌细胞

MKN-28 人胃癌细胞是 1980 年从日本一名 58 岁女性高分化胃腺癌患者的原发肿瘤组织中分离、纯化并建立的永生化人胃癌细胞系。作为临床高分化胃腺癌的经典体外模型，其完整保留了原发肿瘤 “分化程度高、恶性程度相对较低" 的核心病理特征，同时具备稳定的增殖能力、明确的腺上皮表型及可控的药物应答特性，成为胃癌分化机制研究、高分化胃癌药物研发及临床转化的关键工具细胞，为解析高分化胃癌的生物学行为、优化精准治疗方案提供了标准化实验载体。

一、核心生物学特性

在倒置显微镜下，MKN-28 细胞呈现典型高分化腺癌细胞的形态：细胞呈规则多边形或柱状，细胞质丰富且透亮，细胞核呈圆形或椭圆形、位于细胞中央，核仁清晰（1-2 个），染色质分布均匀，细胞排列紧密且具一定极性，部分区域可形成微小腺管样结构 —— 这与临床高分化胃腺癌组织中 “细胞异型性低、保留腺管结构" 的病理形态高度一致，直观反映了其高分化表型。

细胞稳定表达高分化胃腺癌细胞特异性标志物：癌胚抗原（CEA，胃癌诊断标志物，在高分化胃癌中表达水平高于低分化类型）、细胞角蛋白 19（CK19，腺上皮细胞标志，确认其胃腺上皮来源）、紧密连接蛋白 occludin（维持上皮极性与屏障功能，高表达体现分化成熟特征）；同时表达胃黏膜功能相关蛋白（如胃泌素受体），不表达低分化胃癌相关的侵袭标志物（如 MMP9 表达量显著低于 MKN-45 细胞），进一步印证其高分化属性。

MKN-28 为贴壁依赖性细胞，接种后 18-24 小时内完成贴壁，初期形成规则的细胞克隆，融合后呈单层生长，细胞间连接紧密，无明显重叠现象。在含 10%-15% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基、37℃、5% CO₂培养条件下，细胞种群倍增时间约为 60-72 小时，增殖速率较缓但稳定，传代后 24 小时进入对数生长期，长期传代（≤30 代）仍能维持一致的增殖特性，为研究胃癌分化与增殖的关联提供稳定实验对象。

其核心实验价值在于与高分化胃癌匹配的药物敏感性：对临床常用抗胃癌药物（如氟尿mi啶类、铂类衍生物）呈中度敏感性，药物处理 48-72 小时后，可观察到细胞凋亡特征（如染色质凝聚、凋亡小体形成），但半数抑制浓度（IC50）高于低分化胃癌细胞系（如 MKN-45），更贴近临床高分化胃癌患者对药物的应答特点；同时，该细胞系可通过诱导分化或药物处理，建立分化相关的实验模型，为研究胃癌分化调控机制提供理想载体。

MKN-28 细胞具稳定的高分化功能特征：在标准培养条件下，细胞可分泌少量胃黏液相关蛋白（如黏蛋白 MUC5AC，高分化胃腺癌细胞的功能标志），且分泌量受分化诱导剂（如维甲酸）调控 —— 添加维甲酸后，MUC5AC 分泌量可增加 2-3 倍，细胞腺管样结构更明显，进一步强化高分化表型；此外，细胞对胃黏膜保护因子（如表皮生长因子 EGF）敏感，EGF 可促进细胞增殖并维持分化状态，模拟体内高分化胃黏膜细胞的生长调控机制。

二、主要研究应用场景

MKN-28 细胞是解析胃癌分化调控机制的核心工具。例如，在分化相关信号通路研究中，通过检测发现 MKN-28 细胞中 Wnt/β-catenin 信号通路活性显著低于低分化胃癌细胞，用抑制剂激活该通路后，细胞分化标志物（如 CK19、MUC5AC）表达下调，腺管样结构消失，证实 Wnt/β-catenin 通路抑制是维持高分化表型的关键；在转录因子研究中，发现叉头框蛋白 A2（FOXA2）在 MKN-28 细胞中高表达，沉默 FOXA2 后，细胞分化程度降低、增殖速率加快，明确 FOXA2 在胃癌高分化中的调控作用。

此外，该细胞还用于胃癌去分化机制研究：通过缺氧或炎症因子（如 TNF-α）处理 MKN-28 细胞，可诱导其向低分化表型转化，观察到 MMP9 表达上调、增殖加快，模拟临床中高分化胃癌进展为低分化类型的过程，为研究胃癌恶性进展机制提供依据。

依托与高分化胃癌匹配的药物敏感性，MKN-28 广泛用于高分化胃癌针对性药物的体外筛选。在分化诱导药物筛选中，通过检测候选化合物（如天然提取物、小分子化合物）对细胞分化标志物（MUC5AC、CK19）表达的影响，若化合物能上调标志物表达、促进腺管样结构形成且无明显细胞毒性，则提示其具潜在分化诱导活性；例如，筛选发现某中药提取物可通过激活 FOXA2 信号，使 MKN-28 细胞 MUC5AC 表达增加 3 倍，为高分化胃癌的分化治疗提供方向。

在hua疗药物敏感性研究中，对比 MKN-28 与低分化胃癌细胞系的药物应答差异，可明确高分化胃癌的药物敏感谱，为临床中高分化胃癌患者的个体化用药提供实验依据 —— 如研究发现 MKN-28 对氟尿mi啶类药物的敏感性虽低于 MKN-45，但联合分化诱导剂后，敏感性可提升 2 倍，为联合治疗方案研发提供支持。

MKN-28 细胞因保留完整上皮表型，成为研究胃癌 EMT 机制的理想模型。EMT 是胃癌获得侵袭转移能力的关键过程，在高分化胃癌中 EMT 发生率较低，通过 TGF-β（EMT 诱导因子）处理 MKN-28 细胞，可诱导其发生 EMT：观察到细胞形态从多边形变为梭形，上皮标志物（occludin、CK19）表达下调，间质标志物（vimentin、Snail）表达上调，细胞侵袭能力显著增强（Transwell 侵袭数增加 4 倍）。

利用该模型可筛选 EMT 抑制剂：通过检测候选药物对 TGF-β 诱导的 EMT 过程的抑制效果，若药物能恢复上皮标志物表达、降低侵袭能力，则提示其具抗 EMT 活性，为抑制高分化胃癌进展为侵袭性类型提供治疗靶点。

三、细胞培养关键要点

MKN-28 细胞常规使用 RPMI-1640 培养基培养，该培养基含细胞增殖与分化所需的必需氨基酸、维生素，可满足其高分化表型维持需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（选择低内毒素批次，避免刺激细胞去分化）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需诱导细胞分化，可在培养基中添加维甲酸（终浓度 1μmol/L）或 EGF（终浓度 10ng/mL）；若模拟 EMT 过程，可添加 TGF-β（终浓度 5ng/mL）。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前 37℃水浴预热至室温，避免低温刺激导致细胞去分化。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃确保细胞代谢酶活性正常，维持分化表型；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度防止培养基蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，重点关注细胞形态（是否保持多边形、有无梭形化）、连接紧密程度（是否松散），若出现去分化迹象，需及时更换新鲜培养基或调整培养条件；传代前需确保细胞融合度达到 80%-90%，避免过度融合导致细胞功能异常。

传代时，先用无菌 PBS 轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；加入适量含 EDTA 的细胞消化液，37℃孵育 4-6 分钟（高分化腺癌细胞贴壁较紧密，需延长孵育时间，观察到细胞边缘收缩、间隙增大后终止）；加入含血清的培养基中和消化液，轻柔吹打细胞制成单细胞悬液（避免剧烈吹打导致细胞损伤或去分化）；按 1:2-1:3 的比例接种至新培养瓶，加入新鲜培养基后放回培养箱，每 4-5 天传代一次。

冻存需选用对数生长期且分化表型稳定的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% 胎牛血清 + 10% DMSO（DMSO 需缓慢加入，避免细胞渗透压骤变）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注细胞名称、代次、冻存日期；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟）；加入 5 倍体积预热的培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 48 小时内不换液，让细胞充分贴壁并恢复分化表型，提高存活率。

四、实验使用注意事项

MKN-28 细胞属于人源肿瘤细胞系，操作时需严格遵守生物安全二级（BSL-2）实验室规范，佩戴无菌手套、口罩与实验服，避免细胞接触皮肤或黏膜；实验器材（如培养瓶、移液器吸头）需一次性使用，使用后经高压灭菌处理；实验废液需加入含氯消毒剂（终浓度 0.5%）处理 1 小时后排放，防止细胞污染与生物安全风险。

开展分化相关实验时，需使用分化表型稳定的细胞（如传代 10-20 代的细胞），避免高代次细胞因遗传漂变出现去分化；每传代 5-8 代需通过免疫荧光法检测分化标志物（如 MUC5AC、occludin）表达，通过倒置显微镜观察腺管样结构形成情况，确保细胞维持高分化表型；若需长期培养，建议每传代 10 代后复苏早期冻存的低代次细胞（如第 5-8 代），保证实验结果的一致性。

开展药物实验或分化机制研究时，需使用对数生长期细胞，确保细胞状态一致；设置空白对照组（仅培养基）、溶剂对照组（如药物溶解用的 DMSO）及阳性对照组（如维甲酸用于分化诱导实验），排除溶剂干扰与实验系统误差；同一实验需至少重复 3 次，结合统计学分析，保证结果的可靠性。

细胞传代次数建议不超过 30 代，超过后易出现增殖速率加快、分化标志物表达下调、腺管样结构消失等去分化现象；需提前规划冻存策略，在细胞分化表型稳定的代次（如第 5-15 代）大量冻存，当高代次细胞功能异常时，及时复苏早期冻存细胞，保障实验的连续性与准确性。