HT-29人结肠癌细胞源自患者肿瘤组织，贴壁生长呈上皮样，具结肠癌恶性特征，可用于结肠癌机制研究、抗消化道肿瘤药物筛选及侵袭转移相关实验。

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更新时间：2025-11-11

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HT-29人结肠癌细胞

一、细胞基本生物学特性

HT-29人结肠癌细胞源自人结肠腺癌患者的肿瘤组织，经体外分离培养建立细胞株，是研究结肠癌发病机制、肿瘤细胞恶性行为及抗消化道肿瘤药物研发的核心体外模型。其保留了结肠腺癌的核心恶性特征，尤其在模拟肠道上皮分化与肿瘤微环境相互作用方面表现突出，在消化道肿瘤学、转化医学及精准医疗研究领域应用广泛。

形态上，该细胞呈典型上皮源性腺癌细胞形态，胞体为多边形或短梭形，胞质丰富且呈嗜酸性，部分细胞可见胞质内黏液空泡（符合结肠腺癌黏液分泌特征）；细胞核大而畸形，核仁明显且多为 1-2 个，染色质分布不均呈粗颗粒状，常见核分裂象及多核细胞（反映高恶性增殖活性）。体外培养以贴壁生长为主，呈单层 “铺路石" 样排列，无接触抑制特性，细胞密度较高时可形成局部堆积或腺管样结构（模拟体内腺体分化特征），部分脱落细胞悬浮于培养基中（提示侵袭潜能）。生长特性方面，其增殖活性中等，倍增时间约 48-72 小时，常规培养条件下可稳定传代 50 代以上，且长期维持结肠腺癌的关键恶性特征 —— 具备体外克隆形成能力，在软琼脂培养基中可形成致密克隆集落；可分泌结肠癌相关标志物（如癌胚抗原 CEA、糖类抗原 CA19-9）；具备一定侵袭与迁移能力，模拟体内结肠癌的肠壁浸润与淋巴结转移过程。

分子表型上，该细胞高表达结肠腺癌特异性标志物，如细胞角蛋白 20（CK20，肠道上皮特异性标志物）、上皮细胞黏附分子（EpCAM）、增殖相关蛋白 Ki-67（阳性率≥60%，反映增殖活性）；同时表达癌基因相关蛋白（如 EGFR、KRAS、c-Myc）及抑癌基因失活表型（如 p53 突变型表达）；细胞内存在结肠癌常见的异常信号通路激活，如 Wnt/β-catenin 信号通路（调控肠道干细胞增殖与癌变）、PI3K/Akt/mTOR 信号通路（促进细胞存活与代谢重编程）、MAPK/ERK 信号通路（增强细胞侵袭迁移），这些通路异常是导致细胞恶性转化、耐药形成的核心原因；染色体核型呈亚二倍体，存在特定染色体异常（如 18q 缺失、7p 扩增），与临床结肠腺癌患者肿瘤细胞的分子特征高度吻合，为结肠癌机制研究提供可靠实验基础。

二、体外培养关键条件

HT-29 人结肠癌细胞的体外培养需精准调控环境与营养，兼顾其贴壁生长需求与腺癌分化特征维持：培养基选择上，常用 McCoy's 5A 培养基（或 DMEM 培养基），需添加 10% 胎牛血清（FBS）及 1% 非必需氨基酸（NEAA），培养基 pH 值严格控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 280-300 mOsm/kg；若需诱导细胞向肠道上皮分化（如模拟正常肠道功能），可添加丁酸钠等分化诱导剂；开展药物敏感性或侵袭实验时，需在实验前 1-2 天更换新鲜培养基，确保细胞处于对数生长期，减少代谢废物干扰。

培养环境需稳定在 37℃恒温、5% CO₂浓度及饱和湿度的培养箱中，CO₂浓度波动≤±0.3%，温度偏差超过 ±1℃会导致细胞贴壁能力下降，黏液分泌及标志物表达异常。无需对培养器皿进行包被处理（细胞自身贴壁能力较强），但需定期更换培养瓶（每 3-5 代更换一次），避免细胞长期贴附导致的功能退化。传代管理是培养核心：当细胞融合度达 70%-80% 时需及时传代，操作前用无菌 PBS 清洗细胞 2 次，加入 0.25% 细胞消化液，37℃孵育 3-4 分钟至细胞边缘收缩、间隙增大，立即加入含血清培养基终止消化，轻柔吹打形成单细胞悬液（避免用力过猛破坏黏液层），按 1:2-1:4 比例接种至新培养瓶；需注意消化时间略长于其他上皮癌细胞，因细胞间黏附较紧密。此外，细胞对血清质量敏感，需选用低内毒素（≤10 EU/mL）、批次间一致性高的 FBS，劣质血清会导致细胞增殖率下降 40% 以上，CEA 分泌量及侵袭能力显著降低。

三、核心科研应用领域

依托与临床结肠腺癌的高度相似性及分化可控性，HT-29 人结肠癌细胞在科研领域价值显著：

结肠癌发病机制研究：可用于解析结肠癌的分子发病机制，如探索 Wnt/β-catenin 通路异常激活（如 APC 基因突变）对肠道上皮细胞恶性转化的调控作用，研究 KRAS 突变对细胞增殖与耐药性的影响，分析炎症因子（如 TNF-α、IL-17）在溃疡性结肠炎进展为结肠癌中的促进作用，挖掘疾病诊断标志物（如 miR-92a、lncRNA CCAT1）与潜在治疗靶点（如 EGFR 抑制剂靶点、Wnt 通路抑制剂靶点），为理解结肠癌 “腺瘤 - 癌" 进展过程提供实验依据。

抗结肠癌药物筛选与评估：作为结肠腺癌特异性靶细胞模型，可用于筛选靶向药物（如抗 EGFR 单克隆抗体、KRAS 抑制剂）、hua疗增敏剂（如二jia双胍）及天然化合物（如茶多酚、姜黄素），通过 CCK-8 法测定药物对细胞增殖的抑制率，计算半数抑制浓度（IC₅₀）；结合流式细胞术（Annexin V/PI 双染）分析药物诱导的细胞凋亡率，通过 Western Blot 检测药物对异常通路相关蛋白（如 β-catenin、p-Akt）表达的影响，明确药物作用机制；尤其适用于 KRAS 突变型结肠癌的药物筛选，为临床个体化治疗提供数据支持。

结肠癌侵袭转移与肿瘤微环境研究：可用于研究结肠癌侵袭转移的分子机制，通过 Transwell 侵袭实验、划痕愈合实验评估细胞的侵袭迁移能力，观察基质金属蛋白酶（MMP-7、MMP-9）对肠壁基底膜的降解作用，分析上皮 - 间质转化（EMT）相关蛋白（E - 钙黏蛋白、N - 钙黏蛋白、Twist）的表达变化；同时可构建肿瘤微环境共培养模型（与成纤维细胞、免疫细胞共培养），探索微环境细胞对癌细胞侵袭的调控作用，为开发抗转移药物（如 MMP 抑制剂、EMT 抑制剂）提供实验基础。

结肠癌耐药机制研究：可通过体外逐步加药诱导构建耐药细胞株（如 5 - 氟尿mi啶耐药株、奥沙li铂耐药株），对比耐药株与亲本株的分子表型差异，如 ABC 转运蛋白（ABCG2、ABCB1）表达升高、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Mcl-1）高表达、DNA 修复酶（如 XRCC1）活性增强，揭示耐药形成机制；同时可用于筛选耐药逆转剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂、DNA 修复酶抑制剂），评估逆转剂对耐药细胞药物敏感性的恢复效果，为临床克服结肠癌hua疗耐药提供实验支持。

四、质量控制与使用注意事项

合格的 HT-29 人结肠癌细胞需通过严格质量检测：细胞活力≥85%（台盼蓝染色法）；无细菌、真菌、支原体污染（PCR 法或培养法检测阴性）；免疫表型符合 CK20⁺EpCAM⁺Ki-67⁺特征（免疫荧光或 Western Blot 验证）；功能指标达标（软琼脂克隆形成率≥30%，CEA 分泌量≥20ng/10⁶cells/24h，Transwell 侵袭实验穿膜细胞数≥50 个 / 视野）；增殖速率稳定（倍增时间 48-72 小时）；染色体核型与分子异常特征明确（提供检测报告）。

使用时需注意：传代次数控制在 50 代内，超过上限可能导致细胞分化特征丢失、KRAS 等基因突变频率改变；开展侵袭实验前，需将细胞同步化至对数生长期，通过饥饿处理（无血清培养基培养 12-24 小时）增强细胞迁移活性；细胞冻存需使用含 10% DMSO、20% FBS 的 McCoy's 5A 专用冻存液，采用梯度降温法（4℃ 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮保存），复苏时需在 37℃水浴中 1 分钟内快速融化，离心去除冻存液后接种至新鲜培养基，静置 48 小时待细胞恢复贴壁与功能；进行药物处理或功能实验时，需设置空白对照组、溶剂对照组及阳性对照组（如 5 - 氟尿mi啶阳性组），每组至少 3 个复孔，减少实验误差，保证结果可靠性。

上一个：呋喃唑酮试剂盒