MKN45人胃癌细胞源自人低分化胃腺癌，贴壁生长，对常用抗胃癌药物敏感且侵袭性强，是胃癌机制研究、耐药探索及抗肿瘤药物筛选的重要模型。

MKN45人胃癌细胞

MKN45人胃癌细胞是 1979 年从日本一名 62 岁男性低分化胃腺癌患者的原发肿瘤组织中分离、纯化并建立的永生化人胃癌细胞系。作为临床低分化胃腺癌的经典体外模型，其完整保留了原发肿瘤的病理特征与分子表型，不仅具备明确的疾病背景，还拥有稳定的增殖、药物应答及侵袭特性，成为胃癌基础研究、药物研发及临床转化研究中不ke或缺的 “标准化工具细胞"，为解析低分化胃癌的恶性生物学行为、开发精准治疗方案提供了关键实验载体。

一、核心生物学特性

在倒置显微镜下，MKN-45 细胞呈现典型低分化肿瘤细胞的形态特征：细胞呈不规则多边形或梭形，细胞质丰富且呈弱嗜碱性，细胞核体积大、形态不规则，核仁明显（1-3 个），染色质分布不均，部分细胞可见多核或核畸形现象，细胞排列无明显极性，无腺体结构形成 —— 这与临床低分化胃腺癌组织中肿瘤细胞 “异型性高、结构紊乱" 的病理形态高度一致，直观反映了低分化胃癌的恶性表型。

细胞稳定表达胃癌相关特异性标志物：癌胚抗原（CEA，胃癌诊断与预后监测的重要血清标志物，在 MKN-45 细胞中呈高表达）、细胞角蛋白 18（CK18，上皮源性肿瘤的标志性蛋白，确认其胃黏膜上皮来源）、基质金属蛋白酶 9（MMP9，与肿瘤侵袭转移密切相关的蛋白酶，为其强侵袭性提供分子基础）；同时不表达正常胃黏膜细胞的功能蛋白，且携带幽门螺杆菌感染相关的分子改变（对幽门螺杆菌毒素 CagA 敏感），进一步贴近临床胃癌的发病环境与分子特征。

MKN-45 为贴壁依赖性生长细胞系，接种后 24 小时内即可完成贴壁，初期形成分散的细胞克隆，融合后呈单层生长，部分区域因增殖活跃可出现轻度重叠。在含 10%-15% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基、37℃、5% CO₂培养条件下，细胞种群倍增时间约为 48-60 小时，增殖速率稳定，传代后 12-24 小时即可进入对数生长期，长期传代（≤30 代）内仍能维持一致的增殖特性，为实验重复性提供保障。

其最核心的实验价值在于明确的药物敏感性：对临床常用的抗胃癌药物（如 5 - 氟尿mi啶类、铂类衍生物等）均表现出剂量依赖性应答，药物处理 48-72 小时后，可观察到明显的细胞凋亡特征（细胞皱缩、染色质凝聚、凋亡小体形成），且半数抑制浓度（IC50）处于临床药物治疗的有效浓度范围内；同时，该细胞系可通过长期低剂量药物诱导，快速建立耐药细胞模型（如 MKN-45/5-FU 耐药株），为胃癌耐药机制研究与逆转策略开发提供理想载体。

作为低分化胃癌细胞，MKN-45 具备强侵袭与迁移能力，这也是其模拟临床胃癌转移特性的关键优势：在 Transwell 侵袭实验中，细胞可高效穿透人工基底膜（基质胶），24 小时内迁移至下层小室的细胞数显著高于高分化胃癌细胞系；划痕愈合实验中，细胞 24 小时划痕愈合率可达 60% 以上，且迁移过程中伴随 MMP9 等侵袭相关蛋白的高表达，wan美复现了低分化胃癌 “易侵袭、高转移" 的恶性生物学行为，为研究胃癌转移的分子机制提供了可靠的体外模型。

二、主要研究应用场景

MKN-45 细胞是解析低分化胃癌分子致病机制的核心工具。例如，在幽门螺杆菌相关胃癌研究中，通过用幽门螺杆菌毒素 CagA 处理 MKN-45 细胞，可观察到细胞内 Src 信号通路激活、细胞骨架重排及增殖速率加快，证实 CagA 可通过调控下游信号通路促进胃癌发生；在癌基因与抑癌基因研究中，发现 MKN-45 细胞中 KRAS 原癌基因高表达、p53 抑癌基因突变，通过基因编辑技术沉默 KRAS 或修复 p53 后，细胞增殖明显受抑、侵袭能力下降，明确了这些基因在低分化胃癌中的驱动作用。

此外，该细胞还用于胃癌代谢重编程研究：检测发现 MKN-45 细胞存在有氧糖酵解增强（Warburg 效应），通过抑制糖酵解关键酶（如己糖激酶），可显著降低细胞活力，为靶向胃癌代谢异常的治疗策略提供理论依据。

依托稳定的药物敏感性，MKN-45 广泛应用于抗胃癌药物的体外筛选与活性评价。在新型小分子药物筛选中，通过 CCK-8 法检测候选化合物对细胞增殖的抑制效果，结合流式细胞术分析细胞凋亡率，可快速筛选出具有潜在活性的药物；例如，在天然产物筛选中，发现某黄酮类化合物可通过抑制 NF-κB 信号通路，使 MKN-45 细胞凋亡率提升至 60%，且与 5 - 氟尿mi啶类药物联用存在协同效应，为复方药物研发提供方向。

同时，该细胞还用于药物递送系统的有效性验证：将hua疗药物包裹于纳米载体中，处理 MKN-45 细胞后，通过检测细胞内药物浓度与杀伤效果，可评估纳米载体的靶向递送效率，为提高胃癌治疗效果、降低毒副作用提供实验支持。

MKN-45 细胞及其耐药株是研究胃癌耐药机制的重要模型。例如，通过对比 MKN-45 亲本株与 MKN-45/5-FU 耐药株的基因表达差异，发现耐药株中多药耐药基因 ABCG2（编码药物外排泵）表达上调 4 倍、抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达上调 2 倍，使用 ABCG2 抑制剂或 Bcl-2 拮抗剂处理后，耐药株对 5 - 氟尿mi啶的敏感性可部分恢复，证实这些分子是介导胃癌耐药的关键靶点；此外，在耐药逆转研究中，发现某中药提取物可通过下调 ABCG2 表达，增强 MKN-45 耐药株对hua疗药物的敏感性，为开发耐药逆转剂提供了新思路。

三、细胞培养关键要点

MKN-45 细胞常规使用 RPMI-1640 培养基培养，该培养基含细胞增殖所需的必需氨基酸、维生素及微量元素，可满足其代谢需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（选择低内毒素批次，避免刺激细胞过度活化）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需模拟临床肿瘤微环境，可在培养基中添加 5%-10% 胃癌患者腹水提取液或重组 IL-6（胃癌微环境中的关键炎症因子），以诱导细胞呈现更贴近体内的表型。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前 37℃水浴预热至室温，避免低温刺激影响细胞活性。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养，稳定的温湿度与气体环境是维持细胞形态与功能的关键：37℃确保细胞代谢酶活性正常，5% CO₂维持培养基 pH 稳定，避免细胞因 pH 异常出现形态皱缩或脱落；培养过程中需每天观察细胞状态，包括细胞密度、形态变化及培养基颜色（若培养基变黄、出现浑浊，提示可能污染或需传代）。当细胞融合度达到 80%-90% 时需及时传代，避免过度融合导致细胞营养不足、功能异常。

传代时，先用无菌 PBS 轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；加入适量 0.25% 胰蛋bai酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 3-5 分钟（低分化胃癌细胞贴壁较紧密，需不时在显微镜下观察，待细胞边缘收缩、间隙增大后终止消化）；加入含血清的培养基中和消化液，轻柔吹打细胞制成单细胞悬液（避免剧烈吹打导致细胞损伤）；按 1:3-1:5 的比例接种至新培养瓶，添加新鲜培养基后放回培养箱，每 3-4 天传代一次。

冻存需选用对数生长期、活力≥90% 的细胞，冻存液为 90% 胎牛血清 + 10% DMSO（DMSO 需缓慢加入，避免细胞渗透压骤变）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注信息，遵循 “4℃30 分钟→-20℃1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存" 的梯度降温程序；复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟），加入 5 倍体积预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种，复苏后 24 小时内不换液，让细胞充分贴壁恢复活性。

四、实验使用注意事项

MKN-45 细胞属于人源肿瘤细胞系，操作时需严格遵守生物安全二级（BSL-2）实验室规范，佩戴无菌手套、口罩与实验服，避免细胞接触皮肤或黏膜；实验器材（如培养瓶、移液器吸头）需一次性使用，使用后经高压灭菌处理；实验废液需加入含氯消毒剂（终浓度 0.5%）处理 1 小时后排放，防止细胞污染与生物安全风险。

开展药物实验或机制研究时，需使用对数生长期细胞，确保细胞状态一致；设置空白对照组（仅培养基）、溶剂对照组（如药物溶解用的 DMSO）及阳性对照组（如已知活性的抗胃癌药物），排除溶剂干扰与实验系统误差；同一实验需至少重复 3 次，以保证结果的可靠性与统计学意义。

长期培养过程中，需每传代 10-15 代通过 STR 分型检测验证细胞身份，对比标准 STR 图谱，避免与其他胃癌细胞系（如 SGC-7901、BGC-823）交叉污染；每传代 5-8 代需通过 Western blot 检测 CEA、CK18 等标志物表达，通过 CCK-8 法检测药物敏感性，防止细胞因传代次数过多发生遗传漂变，导致表型改变（如标志物丢失、耐药性增强）。

细胞传代次数建议不超过 30 代，超过后易出现增殖速率下降、药物敏感性降低、侵袭能力减弱等问题；需提前冻存低代次细胞（如第 5-10 代），当高代次细胞功能异常时，及时复苏早期冻存细胞，保证实验结果的稳定性与一致性。