MKN-45人胃癌细胞源自人胃腺癌组织，贴壁生长，具低分化胃癌特征且对药物敏感，是胃癌发病机制研究、耐药探索及抗肿瘤药物筛选的重要实验模型。

MKN-45人胃癌细胞

MKN-45人胃癌细胞是 1979 年从日本一名 62 岁男性胃腺癌患者的原发肿瘤组织中分离、纯化并建立的永生化人胃癌细胞系。作为低分化胃腺癌的典型代表，其保留了临床胃癌患者肿瘤细胞的核心病理特征与分子表型，兼具明确的疾病背景与稳定的实验属性，成为胃癌基础研究、药物研发及临床转化的 “标准化工具细胞"，为解析低分化胃癌发病机制、优化治疗方案提供关键支撑。

一、核心生物学特性

在倒置显微镜下，MKN-45 细胞呈不规则多边形或梭形，细胞质丰富且呈嗜碱性，细胞核大而不规则，核仁明显（1-3 个），染色质分布不均，部分细胞可见多核现象，与临床低分化胃腺癌组织中肿瘤细胞的形态高度一致 —— 低分化特征表现为细胞形态异型性高、结构紊乱，无明显腺体形成，wan全贴合临床低分化胃癌的病理形态学特点。

细胞稳定表达胃癌相关标志物：癌胚抗原（CEA，胃癌诊断与预后评估的重要指标）、细胞角蛋白 18（CK18，上皮源性肿瘤标志，确认其胃上皮来源）、基质金属蛋白酶 9（MMP9，与肿瘤侵袭转移相关）；不表达正常胃黏膜细胞特异性蛋白，同时携带幽门螺杆菌感染相关的分子改变（部分研究证实其对幽门螺杆菌毒素敏感），进一步贴近临床胃癌的发病背景。

MKN-45 为贴壁生长细胞系，需依赖培养皿表面贴附生长，细胞接种后 24 小时内即可完成贴壁，形成分散的细胞克隆，融合后呈单层生长，部分区域可出现轻度重叠。标准培养条件下，细胞种群倍增时间约为 48-60 小时，增殖活性稳定，传代后可快速恢复对数生长，长期传代（≤30 代）仍能维持一致的增殖速率。

最关键的特性是药物敏感性：对临床常用抗胃癌药物（如 5 - 氟尿mi啶类药物）均表现出明确敏感性，药物处理后 48-72 小时可观察到典型凋亡特征（细胞皱缩、染色质凝聚、凋亡小体形成），且凋亡率与药物浓度呈显著剂量依赖性；同时，该细胞系易通过长期低剂量药物诱导建立耐药模型，为胃癌耐药机制研究提供理想载体。

MKN-45 细胞携带低分化胃癌相关的遗传学改变：存在染色体数目异常（如 1 号、7 号染色体扩增，17 号染色体缺失），原癌基因 KRAS、MYC 表达上调（驱动细胞恶性增殖），抑癌基因 p53 发生突变（与胃癌低分化、不良预后相关），与临床低分化胃腺癌患者的遗传学背景高度吻合。

此外，细胞具较强的体外侵袭与迁移能力：在 Transwell 侵袭实验中，MKN-45 细胞可高效穿透基质胶膜，迁移至下层培养室；划痕愈合实验中，细胞 24 小时划痕愈合率可达 60% 以上，模拟临床胃癌的侵袭转移特性，为研究胃癌转移机制提供体外模型。

二、主要研究应用场景

MKN-45 细胞是解析低分化胃癌分子致病机制的核心工具。例如，通过高通量测序对比 MKN-45 细胞与正常胃黏膜细胞的基因表达差异，可筛选出 PI3K/Akt、NF-κB 等关键致病通路相关基因；进一步通过 CRISPR/Cas9 技术敲除 PI3K 基因后，细胞增殖速率下降 40%，侵袭能力降低 50%，明确 PI3K/Akt 通路在低分化胃癌增殖与转移中的驱动作用。

同时，利用该细胞研究幽门螺杆菌致胃癌机制，发现幽门螺杆菌毒素 CagA 可通过激活 MKN-45 细胞的 Src 信号通路，促进细胞恶性转化，且 CagA 处理后细胞 MMP9 表达上调 3 倍，进一步揭示幽门螺杆菌与胃癌进展的关联。

依托明确的药物敏感性，MKN-45 广泛用于抗胃癌药物筛选：通过 CCK-8 法检测候选药物（如新型靶向抑制剂、天然产物衍生物）对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），若化合物 IC50 低于 10μmol/L 且凋亡率超过 40%，则提示其具潜在临床价值。例如，筛选发现某黄酮类化合物可通过抑制 NF-κB 通路，使 MKN-45 细胞凋亡率提升至 60%，且与 5 - 氟尿mi啶类药物联用存在协同效应。

在耐药机制研究中，通过长期低剂量 5 - 氟尿mi啶类药物诱导，可建立耐药细胞株 MKN-45/5-FU；对比发现耐药株中多药耐药基因 ABCG2（编码药物外排泵）表达上调 4 倍，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达上调 2 倍，使用 ABCG2 抑制剂或 Bcl-2 拮抗剂，可部分恢复细胞对 5 - 氟尿mi啶类药物的敏感性，为临床逆转耐药提供靶点与策略。

MKN-45 细胞的高侵袭特性使其成为胃癌转移机制研究的理想模型。例如，通过蛋白质组学分析发现，MKN-45 细胞中整合素 β1 表达显著高于正常胃黏膜细胞，沉默整合素 β1 后，细胞黏附能力下降 60%，Transwell 侵袭数减少 70%，证实整合素 β1 在胃癌细胞侵袭中的关键作用。

同时，该细胞可用于转移干预药物筛选：通过 Transwell 实验检测候选药物对细胞侵袭的抑制效果，若药物能使侵袭细胞数减少 50% 以上且无明显细胞毒性，则提示其具抗转移潜力。例如，研究发现某中药提取物可通过下调 MKN-45 细胞的 MMP9 表达，显著抑制细胞侵袭，为胃癌转移的防治提供新方向。

三、细胞培养关键要点

MKN-45 细胞常规使用 RPMI-1640 培养基培养，该培养基含细胞增殖所需的必需氨基酸、维生素及微量元素，可满足其高代谢需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免刺激细胞过度活化）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需模拟临床肿瘤微环境，可在培养基中添加 5%-10% 胃癌患者腹水提取液，或补充重组 IL-6（胃癌微环境关键炎症因子）。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激，影响药物敏感性。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持正常的增殖速率与药物敏感性；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，若发现细胞出现梭形化、贴壁能力下降或增殖速率异常，需及时更换新鲜培养基或复苏新的细胞；传代前需确保细胞融合度达到 80%-90%，避免过度融合导致细胞脱落。

传代时，先用无菌 PBS 轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；加入适量细胞消化液，37℃孵育 3-5 分钟（低分化胃癌细胞贴壁较紧密，需延长孵育时间，观察细胞边缘收缩、间隙增大后终止）；加入含血清的培养基中和消化液，轻柔吹打细胞制成单细胞悬液（避免剧烈吹打导致细胞损伤）；按 1:3-1:5 的比例转移至新培养瓶，加入新鲜培养基后放回培养箱，每 3-4 天传代一次。

冻存需选用对数生长期且活力良好的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注细胞名称、代次、冻存日期；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟）；加入 5 倍体积预热的培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 24 小时内不换液，让细胞充分贴壁，提高存活率。

四、实验使用注意事项