MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞，贴壁生长，能分泌睾酮且对激素调控敏感，是生殖内分泌研究、肿瘤机制及相关药物筛选的重要模型。​

MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞

MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞是从小鼠睾丸间质细胞瘤（起源于睾丸间质中的 Leydig 细胞，负责合成雄激素）中分离纯化并建立的永生化肿瘤细胞系。其保留了正常睾丸间质细胞的核心功能 —— 合成并分泌睾酮，同时携带肿瘤细胞的恶性增殖特征，且对激素调控信号高度敏感，成为研究生殖内分泌机制、睾丸间质细胞瘤发病原理及相关药物筛选的核心实验模型，为解析雄激素合成调控、推动生殖系统疾病研究与肿瘤相关研发提供了标准化工具。

一、核心生物学特性

MLTC-1 细胞具睾丸间质细胞瘤细胞的典型形态，在倒置显微镜下观察为多边形或短梭形，细胞质丰富、呈透亮状，细胞核为圆形或椭圆形、位于细胞中央，核仁清晰可见（1-2 个），细胞排列紧密、呈贴壁生长，融合后形成连续的细胞单层，部分区域可出现轻度重叠，与体内小鼠睾丸间质细胞瘤细胞形态高度一致。该细胞稳定表达睾丸间质细胞特异性标志物：侧链裂解酶（CYP11A1，雄激素合成关键酶）、17β- 羟类固醇脱氢酶（HSD17B3，催化睾酮合成的核心酶）、黄体生成素受体（LHR，介导激素调控信号的关键受体），同时表达肿瘤相关抗原，不表达生殖细胞标志物（如 VASA）及支持细胞标志物（如 FSHR），明确其睾丸间质细胞瘤细胞的属性。

MLTC-1 细胞最核心的功能是稳定分泌睾酮—— 在标准培养条件下，细胞可持续向培养基中释放睾酮，基础分泌量约为 50-100pg/10⁶细胞 / 24 小时，且分泌过程受激素精准调控：加入黄体生成素（LH，与 LHR 结合）后，睾酮分泌量可增加 3-5 倍，而加入雄激素合成抑制剂则可显著降低分泌量，wan全模拟正常睾丸间质细胞的激素调控机制，这一特性使其成为研究雄激素合成与调控的理想模型。同时，细胞具肿瘤细胞的恶性特征：一是无限增殖能力，种群倍增时间约为 36-48 小时，传代后可快速恢复增殖活性；二是锚着依赖性生长，虽以贴壁生长为主，但在软琼脂培养基中可形成少量细胞集落，体现一定的恶性转化能力；三是体内致瘤性，将细胞接种于免疫缺陷裸鼠皮下，可形成实体瘤，且肿瘤组织仍能分泌睾酮，模拟体内睾丸间质细胞瘤的生长与功能特征。

MLTC-1 细胞对激素调控信号具高度敏感性，除 LH 调控睾酮合成外，还对其他生殖相关激素产生应答：如卵泡刺激素（FSH）可轻微促进细胞增殖，而催乳素（PRL）则可抑制睾酮分泌，进一步体现其与体内睾丸间质细胞相似的激素应答特性；此外，细胞对信号通路抑制剂（如 cAMP 抑制剂、PKA 抑制剂）敏感，可通过调控相关信号通路精准干预睾酮合成，为研究雄激素合成的分子调控网络提供可控的体外模型。

二、主要研究应用场景

MLTC-1 细胞是解析雄激素合成与调控机制的核心工具。例如，通过研究 LH-LHR 信号通路对睾酮合成的影响，发现 LH 结合 LHR 后可激活 cAMP/PKA 信号通路，进而促进 CYP11A1、HSD17B3 等关键酶的表达，最终推动睾酮合成；利用基因敲除技术敲除 LHR 后，细胞对 LH 的应答消失，睾酮分泌量降至基础水平，明确 LHR 在激素调控中的核心作用。此外，细胞还用于研究环境内分泌干扰物（如双酚 A）对生殖内分泌的影响，发现双酚 A 可通过抑制 CYP11A1 活性，降低 MLTC-1 细胞的睾酮分泌量，揭示环境污染物对男性生殖健康的潜在危害。

依托肿瘤细胞属性，MLTC-1 细胞广泛用于睾丸间质细胞瘤发病机制研究。例如，通过高通量测序对比 MLTC-1 细胞与正常睾丸间质细胞的基因表达差异，筛选出肿瘤相关的差异表达基因（如 CYP17A1、IGF-1R），进一步通过基因过表达实验验证功能 —— 过表达 IGF-1R 后，MLTC-1 细胞增殖速率加快 40%，睾酮分泌量增加 2 倍，明确 IGF-1R 信号通路在肿瘤发生与功能异常中的驱动作用。此外，利用该细胞研究表观遗传调控机制，发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂可下调肿瘤相关基因表达，抑制细胞增殖并恢复睾酮合成的正常调控，为表观靶向相关研究提供理论基础。

MLTC-1 细胞因具明确的功能特性与激素敏感性，成为生殖内分泌疾病及睾丸间质细胞瘤药物筛选的理想模型。在雄激素调节药物筛选中，通过 ELISA 检测候选药物（如激素激动剂、雄激素合成调节剂）对睾酮分泌的影响，若药物能精准调控睾酮水平（如提升低分泌量或降低过高分泌量）且无明显细胞毒性，则提示其具潜在治疗价值；在抗肿瘤药物筛选中，通过 CCK-8 法检测药物对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），同时检测药物对睾酮分泌的影响，筛选出 “抑制肿瘤增殖且维持正常激素功能" 的候选药物，为临床相关研究提供方向。

三、细胞培养关键要点

MLTC-1 细胞常规使用 DMEM 培养基（高糖配方，含 4.5g/L 葡萄糖）培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞增殖与睾酮合成需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免干扰激素检测）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需研究激素调控，可使用无酚红培养基（避免酚红对激素检测的干扰），并根据实验需求添加 LH 或药物试剂。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激影响细胞活性与睾酮分泌。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持睾酮合成相关酶（如 CYP11A1）的活性；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，若发现细胞出现梭形化、贴壁能力下降或睾酮分泌量异常，需及时更换新鲜培养基或复苏新的细胞。

传代时机选择细胞融合度达到 80%-90% 时（融合度过高易导致细胞脱落）：先用无菌 PBS 轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留培养基与分泌的睾酮；加入适量细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟，待细胞边缘收缩、间隙增大后，加入含血清的培养基终止消化；轻柔吹打细胞制成单细胞悬液（避免剧烈吹打损伤细胞），按 1:2-1:3 比例接种到新培养皿，加入新鲜培养基后放回培养箱。

冻存需选用对数生长期且睾酮分泌稳定的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注信息；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟），加入 5 倍体积预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO，用新鲜培养基重悬细胞后接种，复苏后 24 小时内不换液，提高细胞存活率。

四、实验使用注意事项