MM1.S人骨髓瘤细胞
MM1.S人骨髓瘤细胞。其保留多发性骨髓瘤细胞的核心特征 —— 具浆细胞表型、悬浮生长且对多种药物敏感，同时携带部分患者的疾病相关遗传学改变，成为多发性骨髓瘤基础研究、药物研发及耐药机制探索的 “标准化工具细胞"，为解析疾病发病机制、优化临床治疗方案提供关键支撑。
一、核心生物学特性
在倒置显微镜下，MM1.S 细胞呈圆形或类圆形，细胞质丰富且呈嗜碱性（因胞内富含粗面内质网，支持免疫球蛋白合成），细胞核大而圆、偏居于细胞一侧（浆细胞典型 “偏位核" 特征），核仁明显（1-2 个），染色质呈块状分布，与临床多发性骨髓瘤患者骨髓中浆细胞形态高度一致。
细胞稳定表达浆细胞特异性标志物：CD138（Syndecan-1，浆细胞表面核心标志物，参与细胞黏附与信号传递）、BCMA（B 细胞成熟抗原，调控浆细胞存活的关键受体）、IRF4（干扰素调节因子 4，维持浆细胞功能）；同时表达免疫球蛋白轻链（可分泌少量免疫球蛋白），不表达 B 细胞早期标志物 CD19 及 T 细胞标志物 CD3，明确其成熟浆细胞来源的肿瘤属性，与多发性骨髓瘤的免疫分型特征wan全匹配。
MM1.S 为wan全悬浮生长细胞系，无需贴附基质，细胞均匀分散于培养基中，少量可形成松散小聚团（直径≤3 个细胞，不影响活性）。在标准培养条件下，种群倍增时间约为 24-30 小时，增殖活性稳定，传代后可快速恢复生长，长期传代仍能维持一致的增殖速率。
最关键的特性是药物敏感性：对临床常用抗多发性骨髓瘤药物（如硼ti佐米、来那du胺）高度敏感，药物处理后会出现典型的凋亡特征（细胞皱缩、染色质凝聚、凋亡小体形成），且凋亡率与药物浓度呈剂量依赖性，为药物活性评价、作用机制研究提供理想模型。此外，细胞可模拟多发性骨髓瘤细胞的骨髓微环境依赖特性 —— 在骨髓基质细胞条件培养基中培养时，增殖速率加快、药物敏感性降低，与体内肿瘤细胞的微环境适应机制一致。
MM1.S 细胞携带多发性骨髓瘤相关的遗传学改变：存在染色体数目异常（如 13 号染色体缺失，部分患者也存在该异常），同时原癌基因 MYC 表达上调（驱动细胞恶性增殖），抑癌基因 p53 功能正常（因此对 DNA 损伤类药物敏感），与部分临床患者的遗传学背景相似，为研究多发性骨髓瘤的分子致病机制（如染色体异常与基因表达调控的关联）提供明确的实验对象。
二、主要研究应用场景
MM1.S 细胞是解析多发性骨髓瘤发病分子机制的核心工具。例如，通过高通量测序对比 MM1.S 细胞与正常浆细胞的基因表达差异，可筛选出疾病相关的关键基因（如 NOTCH2、NF-κB 通路相关基因），进一步通过基因敲除 / 过表达实验验证功能 —— 敲除 NOTCH2 后，MM1.S 细胞增殖速率下降 40%、凋亡率升高 30%，明确 NOTCH2 信号通路在多发性骨髓瘤细胞存活中的驱动作用。
同时，利用该细胞研究肿瘤代谢重编程机制，发现 MM1.S 细胞存在糖酵解增强现象（Warburg 效应），通过抑制糖酵解关键酶（如己糖激酶）可显著抑制细胞增殖，揭示代谢异常在疾病进展中的作用，为代谢靶向治疗提供理论基础。
依托明确的药物敏感性，MM1.S 广泛用于抗骨髓瘤药物筛选：通过 CCK-8 法、MTT 法检测候选药物（如新型蛋白酶体抑制剂、靶向 BCMA 的小分子化合物）对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），若化合物 IC50 低于 10μmol/L 且凋亡率超过 50%，则提示具潜在抗骨髓瘤活性。
在耐药机制研究中，通过长期低剂量药物诱导可建立耐药细胞株（如硼ti佐米耐药株 MM1.S/BOR），对比耐药株与亲本株的差异，发现耐药株中多药耐药基因 MDR1（编码 P - 糖蛋白）、抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达上调，使用 MDR1 抑制剂或 Bcl-2 拮抗剂可部分恢复药物敏感性，为逆转临床耐药提供靶点与策略。
MM1.S 细胞可用于模拟多发性骨髓瘤细胞与骨髓微环境的互作机制：通过构建 “MM1.S 细胞 - 骨髓基质细胞" 共培养模型，观察微环境对肿瘤细胞的影响 —— 发现骨髓基质细胞分泌的 IL-6、VEGF 等细胞因子可促进 MM1.S 细胞增殖、降低药物敏感性，同时 MM1.S 细胞可反过来诱导基质细胞分泌更多促癌因子，形成 “恶性循环"。通过阻断细胞因子受体（如 IL-6R），可打破该循环，抑制肿瘤细胞生长，为靶向微环境的联合治疗提供实验依据。
三、细胞培养关键要点
MM1.S 细胞常规使用 RPMI-1640 培养基培养，该培养基含细胞增殖所需的必需氨基酸、维生素及微量元素，可满足其高代谢与免疫球蛋白合成需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免刺激细胞过度活化）、1% 抗菌制剂（预防细菌污染）。若需模拟骨髓微环境，可在培养基中添加 5%-10% 骨髓基质细胞条件培养基，或补充重组 IL-6（终浓度 10ng/mL）。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激，影响药物敏感性。
细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持正常的增殖速率与药物敏感性；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐平衡维持 pH 稳定，避免 pH 异常导致细胞形态改变；95% 湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压升高导致细胞脱水。培养过程中需每天观察细胞状态，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布，避免细胞沉降导致局部密度过高；通过台盼蓝染色法每周检测 1-2 次细胞活力，确保活率维持在 85% 以上，活力过低会影响实验结果的重复性。
传代时机选择细胞密度达到 1×10⁶-2×10⁶个 /mL 时（密度过高易导致营养匮乏、代谢废物堆积，降低细胞活力）：将培养瓶中的细胞悬液轻轻吹打均匀（力度需轻柔，避免损伤细胞表面 CD138），按 1:3-1:5 的比例转移至新培养瓶，加入新鲜培养基后放回培养箱（悬浮细胞无需消化，直接分装即可），每 2-3 天传代一次。
冻存需选用对数生长期且活力良好的细胞（活率≥90%），冻存液为 90% FBS+10% DMSO（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 混合均匀，分装至冻存管并标注细胞名称、代次、冻存日期；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 37℃水浴融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间低温损伤）；加入 5 倍体积预热的培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 24 小时内不换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。
四、实验使用注意事项
MM1.S 细胞属于人源肿瘤细胞系，操作时需严格遵守生物安全二级（BSL-2）实验室规范，佩戴无菌手套、口罩与实验服，避免细胞接触皮肤或黏膜；实验结束后需对实验器材（如移液器、培养瓶、离心管）、台面用 75% 乙醇彻di消毒，实验废液需经灭菌处理后排放，防止细胞污染与生物安全风险。
开展药物实验或微环境互作实验时，需使用对数生长期细胞，确保细胞状态一致，减少实验误差；设置空白对照组（仅培养基）、溶剂对照组（如药物溶解用的 DMSO）及阳性对照组（如已知活性的抗骨髓瘤药物硼ti佐米），排除溶剂干扰并验证实验体系的有效性；药物处理时需根据预实验确定合适的浓度范围，避免浓度过高导致细胞过度死亡或过低无明显效应。
长期培养过程中，需每传代 10-15 代通过 STR 分型检测验证细胞身份，对比细胞系标准 STR 图谱，避免与其他悬浮生长的浆细胞瘤细胞系（如 RPMI-8226 细胞）交叉污染；每传代 5-8 代需通过流式细胞术检测 CD138、BCMA 等浆细胞标志物表达，通过 CCK-8 法检测对硼it佐米的敏感性，防止细胞发生遗传漂变导致表型改变（如标志物丢失、耐药性增强），影响实验结果的准确性。
细胞传代次数建议不超过 30 代，超过后细胞易出现增殖速率下降、药物敏感性降低、遗传学特征改变等问题，需从液氮中复苏早期冻存的低代次细胞（如第 5-10 代），保证实验结果的稳定性与重复性；培养过程中避免频繁更换培养基或剧烈摇晃培养瓶，防止细胞应激导致凋亡率升高；同时避免使用含血清浓度过高的培养基（超过 15%），防止细胞过度增殖导致功能紊乱。
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更新时间：2025-10-30
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