J774A.1小鼠单核巨噬细胞源自小鼠腹水，具吞噬活性，可分泌细胞因子，常用于炎症反应、免疫调控机制研究及病原体与宿主相互作用实验。

J774A.1小鼠单核巨噬细胞

一、细胞基本生物学特性

J774A.1小鼠单核巨噬细胞源自小鼠腹水诱导的单核巨噬细胞系，是研究巨噬细胞功能、炎症免疫机制及病原体感染的经典体外模型，因保留单核巨噬细胞的核心生物学功能与活化特性，在免疫学、微生物学领域应用广泛。

形态上，该细胞呈圆形或不规则形，未活化状态下胞体较小，胞质透明，细胞核呈圆形或椭圆形；活化后胞体增大，胞质丰富，出现大量伪足，部分细胞呈梭形或多角形，体外培养以贴壁生长为主，也可存在少量悬浮细胞，无严格接触抑制，细胞密度较高时可形成局部堆积。生长特性方面，其增殖活性中等，倍增时间约 24-30 小时，常规培养条件下可稳定传代 60 代以上，且能长期维持单核巨噬细胞的关键功能 —— 具备强大的吞噬能力，可吞噬乳胶颗粒、细菌、凋亡细胞等，同时可通过脂多糖（LPS）、干扰素 -γ（IFN-γ）等刺激诱导活化，呈现 M1 型巨噬细胞的功能表型。

分子表型上，该细胞高表达巨噬细胞特异性标志物，如 CD11b、F4/80、CD68，同时表达 Toll 样受体 4（TLR4）、清道夫受体 A（SR-A）等与免疫识别、物质吞噬相关的蛋白；活化后可高表达炎症因子（如肿瘤坏死因子 -α，TNF-α；白细胞介素 - 6，IL-6）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS），低表达抗炎因子（如 IL-10），染色体核型为近二倍体，存在少量染色体数目变异，与小鼠正常单核巨噬细胞的分子特征高度相似，为巨噬细胞功能研究提供可靠依据。

二、体外培养关键条件

J774A.1 小鼠单核巨噬细胞的体外培养需精准调控环境与营养，以维持其免疫功能与活化特性：培养基选择上，shou选含高糖（4.5g/L D - 葡萄糖）的 DMEM 培养基，需添加 10% 胎牛血清（FBS）提供生长必需的营养因子，可补充 1% 谷an酰胺（若培养基未预添加）维持细胞代谢，无需添加抗生素（避免影响细胞免疫功能），培养基 pH 值需控制在 7.2-7.4，渗透压维持在 290-310 mOsm/kg；培养环境需稳定在 37℃恒温、5% CO₂浓度及饱和湿度，CO₂浓度波动≤±0.3%，温度偏差超过 ±1℃会导致细胞活性下降，吞噬功能减弱。

传代管理是培养核心：当细胞融合度达 70%-80% 时需及时传代，操作前用无菌 PBS 轻轻清洗细胞 1 次（避免过度冲洗导致细胞脱落），加入含 EDTA 的细胞消化液（0.25% 胰dan白酶 - EDTA），37℃孵育 1-2 分钟至细胞边缘收缩、形态变圆，加入含血清的培养基终止消化，轻柔吹打（避免用力损伤细胞伪足）形成单细胞悬液，按 1:3-1:5 比例接种至新培养瓶；需注意避免消化不足导致细胞成团，传代后 12 小时内避免移动培养瓶，确保细胞稳定贴壁。此外，细胞对血清质量敏感，需选用低内毒素（≤5 EU/mL）、批次间一致性高的 FBS，高内毒素血清会导致细胞自发活化，影响实验结果准确性。

三、核心科研应用领域

依托其典型的单核巨噬细胞功能特性，J774A.1 小鼠单核巨噬细胞在科研领域价值显著：

四、质量控制与使用注意事项

合格的 J774A.1 小鼠单核巨噬细胞需通过严格质控：细胞活力≥92%（台盼蓝染色），无细菌、真菌、支原体污染（支原体 PCR 阴性）；免疫表型符合 CD11b⁺F4/80⁺CD68⁺特征；吞噬率≥80%（荧光乳胶颗粒吞噬实验），LPS 刺激后 TNF-α 分泌量≥500 pg/mL（ELISA 检测），增殖速率稳定（倍增时间 24-30 小时）。

使用时需注意：传代次数控制在 50 代内，超代次可能导致细胞吞噬功能下降、活化能力减弱；细胞冻存用含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 冻存液，梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮保存），复苏后快速接种预热培养基，静置 24 小时待细胞wan全恢复功能后再开展实验；进行活化相关实验时，需确保细胞处于对数生长期，且设置未刺激对照组，排除血清、培养环境等因素的干扰，保证结果可靠性。