MPC-5 小鼠肾足细胞，具分化潜能，贴壁生长，表达足细胞特异性标志物，参与肾小球滤过屏障构建，是肾病机制研究、药物筛选的关键模型。

MPC-5 小鼠肾足细胞

MPC-5 小鼠肾足细胞是由科研团队从小鼠肾脏肾小球中分离纯化并建立的永生化肾足细胞系，因能精准模拟体内肾足细胞的形态特征、分化过程及生理功能，尤其保留了足细胞te有的 “分化成熟后形成足突结构" 的核心属性，成为研究肾小球滤过屏障功能、肾病病理机制及相关治疗靶点的核心实验模型，为解析蛋白尿、肾小球肾炎、糖尿病肾病等肾脏疾病的发病机制提供了关键工具。

一、核心生物学特性

MPC-5 细胞具肾足细胞的典型形态特征，且存在 “未分化 - 分化" 形态差异：未分化状态下，细胞呈梭形或多边形，贴壁生长且排列密集，类似成纤维细胞；在诱导分化条件下（如温度敏感型 SV40 大 T 抗原调控，37℃培养约 10-14 天），细胞逐渐分化成熟，形态转变为多角形，细胞质向外延伸形成细长的伪足样结构，部分细胞可观察到类似体内的 “足突" 雏形，与肾小球内成熟足细胞的形态高度一致。该细胞稳定表达足细胞特异性标志物： nephrin（ nephrin 蛋白，足突间裂孔隔膜核心成分，维持滤过屏障完整性）、podocin（ podocin 蛋白，辅助 nephrin 形成裂孔隔膜）、WT-1（Wilms 瘤蛋白，足细胞分化与功能维持关键转录因子），不表达肾小球内皮细胞标志物 CD31 及系膜细胞标志物 α-SMA，确保其足细胞的纯度与特异性。

MPC-5 细胞最核心的特性是可诱导分化潜能—— 依托温度敏感型 SV40 大 T 抗原的调控，在 33℃（ permissive 温度）下，大 T 抗原活性高，细胞保持未分化状态并快速增殖；转移至 37℃（ non-permissive 温度）后，大 T 抗原失活，细胞停止增殖并启动分化程序，逐渐表达成熟足细胞标志物（如 nephrin 表达量较未分化状态升高 3-5 倍），形成类足突结构，同时获得滤过屏障相关功能（如体外模拟滤过实验中，对大分子蛋白的截留率显著提升）。此外，分化成熟的 MPC-5 细胞还保留足细胞的病理应答特性：在高糖、炎症因子（如 TNF-α、IL-1β）或毒素（如阿mei素）刺激下，细胞会出现 nephrin/podocin 表达下调、足突结构紊乱，甚至细胞凋亡，模拟体内肾病状态下足细胞损伤的病理过程，为研究肾病机制提供理想模型。

未分化状态的 MPC-5 细胞增殖能力较强，种群倍增时间约为 24-36 小时，在 33℃培养条件下，细胞融合度达到 70%-80% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，适合进行传代或分化诱导；若细胞融合度过高（超过 90%），易出现接触抑制，导致分化诱导效率下降，因此需及时传代，传代比例以 1:3-1:4 为宜。进入分化诱导阶段（37℃培养）后，细胞增殖速率逐渐减缓，7-10 天后基本停止增殖，专注于形态分化与功能成熟，此时需减少换液频率（每 2-3 天换液一次），避免干扰分化进程。

二、主要研究应用场景

MPC-5 细胞是解析肾小球滤过屏障构建与功能维持机制的核心工具。例如，通过 RNA 干扰技术下调分化成熟的 MPC-5 细胞中 nephrin 的表达，可观察到细胞足突结构紊乱，体外滤过实验中大分子蛋白（如牛血清白蛋白）的漏出量显著增加，进而明确 nephrin 在裂孔隔膜形成与滤过功能中的关键作用；此外，利用 MPC-5 研究 podocin 与 nephrin 的相互作用，发现 podocin 可通过维持 nephrin 的细胞膜定位，增强其介导的细胞间信号传递，为理解滤过屏障的分子调控网络提供实验依据。同时，该细胞也用于研究足细胞与肾小球基底膜（GBM）的相互作用，通过检测细胞对 GBM 成分（如层粘连蛋白）的黏附能力，分析整合素（如 α3β1）在足细胞锚定中的作用。

MPC-5 细胞广泛应用于各类肾病的病理机制探索，尤其在糖尿病肾病、狼疮性肾炎等疾病研究中作用突出。在糖尿病肾病模型中，用高糖（30mmol/L）长期处理分化成熟的 MPC-5 细胞，可诱导细胞出现氧化应激（ROS 生成增加）、nephrin/podocin 表达下调、足突结构破坏，同时伴随炎症因子（如 MCP-1）分泌增多，这与临床糖尿病肾病患者肾小球足细胞的病理改变一致；通过干预氧化应激通路（如使用抗氧化剂 NAC），可恢复细胞的形态与功能，验证氧化应激在糖尿病肾病足细胞损伤中的核心作用。在狼疮性肾炎研究中，用狼疮患者血清或抗 dsDNA 抗体处理 MPC-5 细胞，可观察到细胞凋亡率升高、补体激活，模拟体内免疫损伤过程，为研究免疫介导的足细胞损伤机制提供模型。

依托对病理刺激的敏感性，MPC-5 细胞成为肾病治疗药物筛选与活性验证的理想模型。在药物筛选实验中，将候选药物（如中药提取物、小分子化合物）与损伤模型（高糖 / 炎症因子处理）的 MPC-5 细胞共培养，通过检测 nephrin/podocin 的表达恢复情况、足突结构完整性及细胞凋亡率，评估药物对足细胞的保护作用；例如，在高糖损伤模型中，若药物能使 nephrin 表达量提升 2 倍以上、蛋白漏出量降低 50%，则提示其具有潜在的抗糖尿病肾病活性。此外，该细胞也用于靶向药物研发，如针对 nephrin 降解通路的抑制剂、足细胞凋亡抑制剂的活性验证，为肾病治疗提供新的药物方向。

三、细胞培养关键要点

MPC-5 细胞需使用含 10% 胎牛血清（FBS，选择低内毒素批次，避免刺激细胞）、1% 抗菌制剂的 DMEM/F12 培养基（1:1 混合，营养均衡，支持增殖与分化）。未分化培养（33℃）时，需额外添加 10U/mL 的重组小鼠 γ- 干扰素（IFN-γ），以维持 SV40 大 T 抗原活性，促进细胞增殖；分化诱导（37℃）时，需去除 IFN-γ，让细胞启动分化程序。培养基 pH 需严格控制在 7.2-7.4，使用前在对应温度（33℃或 37℃）水浴锅中预热，避免温度波动影响细胞状态。

未分化培养需置于 33℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱，维持细胞快速增殖；分化诱导时，需将培养箱温度调整至 37℃，其他条件不变，诱导周期为 10-14 天，期间需每天观察细胞形态变化（如伪足形成情况），通过免疫荧光法检测 nephrin 表达，验证分化成熟度。由于分化过程对环境敏感，诱导期间避免频繁移动培养皿或更换培养箱，减少外界干扰。

未分化状态的细胞（33℃培养）在融合度 70%-80% 时传代：先用无菌 PBS 洗涤细胞 2 次，加入适量细胞消化液，33℃孵育 1-2 分钟，待细胞边缘收缩后加入含血清的培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液，按 1:3-1:4 比例接种到新培养皿，加入含 IFN-γ 的新鲜培养基。

冻存需选择未分化状态的对数生长期细胞，冻存液为 90% FBS+10% DMSO，混合均匀后分装至冻存管，标注信息；遵循梯度降温程序：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存。复苏时，冻存管从液氮取出后快速放入 33℃水浴融化（时间不超过 1 分钟），加入 5 倍体积含 IFN-γ 的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟去除 DMSO，用新鲜培养基重悬后接种，复苏后 24 小时内不换液，提高存活率。

四、实验使用注意事项