MuM-2B人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞
MuM-2B人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞是由科研团队从一名确诊为侵袭性脉络膜黑色素瘤患者的肿瘤组织中分离建立的人脉络膜黑色素瘤细胞系。作为眼内恶性程度最高的肿瘤之一，脉络膜黑色素瘤因早期隐匿性强、易突破眼壁侵袭周围组织，且常发生肝转移，临床预后极差。而 MuM-2B 细胞高度复刻临床侵袭性脉络膜黑色素瘤的病理形态、分子背景及恶性行为，尤其在侵袭转移潜能与驱动突变特征上与临床样本高度契合，成为全球脉络膜黑色素瘤侵袭机制解析、转移靶点挖掘及抗转移药物研发的核心实验模型，为破解该肿瘤 “高侵袭、高转移" 的治疗困境提供了关键支撑。
一、核心生物学特性
作为典型的侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系，MuM-2B 具备脉络膜黑色素瘤的标志性病理表型，可稳定表达黑色素瘤特异性标志物，如 HMB-45（黑色素小体相关抗原，反映黑色素合成能力）、Melan-A（黑色素细胞分化抗原）及 S-100 蛋白（神经嵴来源细胞标志物），与临床脉络膜黑色素瘤患者肿瘤组织的免疫表型wan全一致。在倒置显微镜下观察，细胞呈梭形或多角形，细胞质丰富且部分细胞含棕褐色黑色素颗粒（随传代次数增加，部分细胞黑色素合成可能减弱，但仍保留分化潜能）；细胞核呈椭圆形或不规则形，核仁明显、核质比高，体现肿瘤细胞的恶性特征；生长方式为典型贴壁生长，细胞紧密附着于培养皿表面，呈放射状或漩涡状排列，传代时需经消化处理使细胞脱离基质，分散为单细胞悬液以维持良好生长状态。
MuM-2B 最核心的分子特征是携带GNAQ/GNA11 驱动突变—— 这两种基因均属于 G 蛋白 α 亚基家族，突变后可持续激活下游 MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）、PI3K/AKT（磷脂酰肌醇 3 - 激酶 / 蛋白激酶 B）信号通路，驱动肿瘤细胞异常增殖、侵袭周围组织并进入血液循环，是脉络膜黑色素瘤最主要的致病突变（临床发生率超 80%），也是 MuM-2B 具备强侵袭性的分子基础。此外，该细胞系还高表达基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9），这类酶可降解细胞外基质（如胶原蛋白、层粘连蛋白），为肿瘤细胞突破眼壁屏障、侵袭邻近组织创造条件；同时，细胞中 E - 钙粘蛋白（上皮表型标志物）表达下调、N - 钙粘蛋白（间质表型标志物）表达上调，提示其已发生上皮 - 间质转化（EMT），进一步增强细胞的迁移能力，与临床脉络膜黑色素瘤的转移特性高度匹配。
在标准培养条件下，MuM-2B 的种群倍增时间约为 55-65 小时，增殖速率相对平缓，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 70%-80% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，且 GNAQ/GNA11 信号通路活性、侵袭相关蛋白（如 MMP-2）表达稳定，是开展药物处理、侵袭实验、基因编辑等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 85%），易出现接触抑制，导致部分细胞凋亡或侵袭相关分子表达异常（如 MMP-9 表达波动），因此需及时传代（建议每 3-4 天传代一次）以维持细胞生物学特性稳定。此外，MuM-2B 在 Transwell 侵袭实验中可高效穿透基质胶，在裸鼠尾静脉注射模型中易形成肝转移灶，充分体现其强侵袭转移能力，是研究脉络膜黑色素瘤转移机制的理想工具。
二、主要研究应用场景
依托强侵袭转移特性，MuM-2B 成为解析脉络膜黑色素瘤侵袭转移分子机制的核心模型。例如，通过 RNA 干扰技术下调细胞中突变 GNAQ 的表达，可观察到细胞迁移侵袭能力显著下降，且 MAPK 通路下游分子（如 p-ERK）磷酸化水平降低，进而明确 GNAQ 突变在脉络膜黑色素瘤侵袭中的驱动作用；此外，利用 MuM-2B 研究 EMT 调控机制，发现转化生长因子 β（TGF-β）可通过激活 Smad 信号通路，进一步下调 E - 钙粘蛋白、上调波形蛋白（间质标志物），加剧细胞侵袭能力，为挖掘 EMT 相关调控靶点（如 Smad 抑制剂）提供实验依据。同时，MuM-2B 也常用于脉络膜黑色素瘤肝转移定植机制研究 —— 通过建立细胞与肝窦内皮细胞共培养模型，观察细胞黏附、跨内皮迁移过程，分析黏附分子（如 ICAM-1、VCAM-1）的表达变化，揭示转移灶形成的关键环节。
MuM-2B 因分子背景明确、侵袭特性稳定，广泛应用于脉络膜黑色素瘤靶向药物、抗转移药物的筛选与活性验证。在药物筛选实验中，可通过 CCK-8 法检测候选药物对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物活性；针对 GNAQ/GNA11 突变的靶向药物（如 MEK 抑制剂、PI3K 抑制剂），可通过 Western blot 检测下游信号分子磷酸化水平变化，验证药物对靶点通路的抑制作用；对于抗转移药物，可通过 Transwell 实验、划痕愈合实验检测药物对细胞侵袭、迁移能力的影响，评估药物的抗转移效果（如侵袭细胞数减少比例、划痕愈合速率下降幅度）。此外，通过建立 MuM-2B 裸鼠原位移植瘤模型（如眼内接种）或肝转移模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、转移灶数量减少情况、小鼠生存期延长情况），为药物临床转化提供关键的体内外数据支持。
MuM-2B 也是脉络膜黑色素瘤转移相关靶点挖掘的重要载体。通过转录组测序（RNA-seq）对比 MuM-2B 与低侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系的基因表达差异，可筛选出潜在的转移相关基因（如 CXCR4、VEGFR2）；随后通过基因过表达或敲除实验验证靶点功能 —— 如在 MuM-2B 中过表达 CXCR4，可观察到细胞迁移侵袭能力增强，且在裸鼠模型中肝转移灶增多，反之则转移能力减弱，进而确认 CXCR4 为脉络膜黑色素瘤转移促进靶点；针对该靶点开发的抑制剂（如 AMD3100），可在 MuM-2B 模型中验证其抗转移效果，为临床治疗提供新的靶点方向。
三、细胞培养关键要点
MuM-2B 常规使用 DMEM/F12 培养基（1:1 混合）进行培养，该培养基营养成分丰富，可满足细胞生长、黑色素合成及侵袭相关分子表达稳定的需求；需添加 10% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与生长因子（如 EGF、bFGF）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌制剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响 GNAQ/GNA11 信号通路活性。
细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持黑色素合成相关酶（如酪an酸酶）的活性及侵袭相关蛋白的稳定表达；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需定期观察细胞形态，若发现黑色素颗粒过度沉积或细胞形态异常（如梭形细胞比例减少），需及时更换新鲜培养基，维持细胞状态稳定。
当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物，避免影响后续消化效果；随后加入适量细胞消化液，37℃孵育 2-3 分钟（因细胞贴壁较牢固，消化时间略长于其他肿瘤细胞系），在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化（血清可中和消化液活性）；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；最后按 1:2-1:3 的比例将细胞接种到新的培养皿中（因细胞增殖速率较慢，传代比例不宜过高），加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。
冻存时需选用对数生长期且侵袭特性稳定的细胞，采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 48 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。
四、实验使用注意事项
MuM-2B 属于人源肿瘤细胞系，操作时需严格遵守生物安全二级（BSL-2）实验室规范，佩戴无菌手套、口罩与实验服，避免细胞接触皮肤或黏膜；实验结束后需对实验器材（如移液器、培养皿、离心管）、台面用 75% 乙醇彻di消毒，实验废液需经灭菌处理后排放，防止细胞污染与生物安全风险。
开展侵袭转移相关实验（如 Transwell 实验、划痕愈合实验）时，需使用对数生长期的细胞，确保细胞状态一致，减少实验误差；同时需设置空白对照组、溶剂对照组及阳性对照组（如已知抑制侵袭的药物），排除溶剂干扰并验证实验体系的有效性；进行 Transwell 侵袭实验时，需确保基质胶铺展均匀，且细胞接种密度适宜（建议 5×10⁴-1×10⁵个 / 孔），避免密度过高影响结果判读。
长期培养过程中，需每传代 8-12 代通过 STR 分型检测验证细胞身份，对比细胞系标准 STR 图谱，避免细胞交叉污染（如与皮肤黑色素瘤细胞系混淆）；每传代 5-7 代需通过 Western blot 检测 HMB-45、Melan-A 等黑色素瘤标志物表达，通过基因测序确认 GNAQ/GNA11 突变状态，防止细胞发生遗传漂变导致分子特征改变或失去脉络膜黑色素瘤特异性，影响实验结果的准确性。
细胞传代次数建议不超过 25 代，超过后细胞易出现功能退化（如侵袭能力下降、黑色素合成减少、药物敏感性改变），需从液氮中复苏早期冻存的细胞（如第 3-5 代），保证实验结果的稳定性与重复性；培养过程中避免频繁更换培养基或剧烈吹打细胞，防止细胞应激导致侵袭相关蛋白表达异常。
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产品型号：试剂盒
更新时间：2025-10-30
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