NALM-6人B淋巴白血病细胞，悬浮生长，具 B 细胞分化标志物，部分携特定基因突变，生物学稳定，是该白血病机制研究、药物筛选及免yi治疗相关实验的常用模型。​

NALM-6人B淋巴白血病细胞

NALM-6人B淋巴白血病细胞是从一名复发的儿童 B 淋巴白血病患者骨髓中分离建立的人 B 淋巴白血病细胞系，因高度模拟临床 B 淋巴白血病的细胞分化阶段、分子背景及恶性生物学行为，且生物学特性稳定，成为全球 B 淋巴白血病基础研究、药物研发、相关治liao机制探索的核心实验模型，为破解儿童及成人 B 淋巴白血病治疗难题提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的 B 淋巴白血病细胞系，NALM-6 具备未成熟 B 淋巴细胞的标志性表型，可稳定表达 B 细胞分化相关标志物，如 CD10（前 B 细胞标志物）、CD19、CD20（B 细胞特异性标志物）、CD22，同时表达干细胞因子受体 CD117，不表达 T 细胞标志物（CD3、CD4）及髓系标志物（CD13、CD33），与临床儿童 B 淋巴白血病患者骨髓中白血病细胞的免疫表型高度一致。在倒置显微镜下观察，细胞呈圆形或类圆形，体积偏小，细胞质稀薄且透亮，细胞核大而圆，核仁清晰可见（1-2 个），核质比显著高于正常 B 淋巴细胞；生长方式为wan全悬浮生长，细胞均匀分散于培养基中，无贴壁能力，传代时无需消化，仅需轻柔吹打使细胞悬液均匀后按比例分装，操作简便且能维持细胞良好状态。

NALM-6 携带 B 淋巴白血病相关的关键分子改变，其中最核心的是IGH 基因重排—— 这是 B 淋巴细胞发育过程中的标志性事件，也是 B 淋巴白血病的特异性分子标志物，该重排可导致免疫球蛋白重链表达异常，参与细胞恶性转化。此外，部分亚克隆的 NALM-6 细胞还存在TP53 基因突变，该突变会破坏细胞凋亡调控机制，使细胞失去对 DNA 损伤的应答能力，进一步增强肿瘤细胞的抗药性与增殖活性；同时，细胞不携带 BCR-ABL 融合基因（常见于慢性粒细胞白血病及部分 B 淋巴白血病），也无 FLT3-ITD、NPM1 等其他白血病高频突变，分子背景相对明确，为针对性研究 B 淋巴白血病的分子机制提供了可靠工具。

在标准培养条件下，NALM-6 的种群倍增时间约为 40-50 小时，增殖速率较快，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞密度达到 1×10⁶-2×10⁶个 /mL 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，且 B 细胞标志物表达与分子特征稳定，是开展药物处理、基因编辑、细胞共培养等实验的最佳时期；若细胞密度过高（超过 3×10⁶个 /mL），易出现营养竞争加剧、代谢废物堆积，导致细胞活力下降、凋亡率升高，因此需及时传代（建议每 1-2 天传代一次）以维持细胞生物学特性稳定。此外，NALM-6 细胞还具备较强的体外克隆形成能力，可在半固体培养基中形成明显的细胞集落，这一特性使其适用于药物敏感性筛选及肿瘤干细胞相关研究。

二、主要研究应用场景

依托与临床 B 淋巴白血病的分子同源性，NALM-6 成为解析 B 淋巴白血病恶性生物学行为机制的理想模型。例如，通过 CRISPR/Cas9 技术修复 NALM-6 细胞中的 TP53 基因突变，可观察到细胞增殖速率显著减缓、对治疗药物的敏感性提升，进而明确 TP53 突变在 B 淋巴白血病耐药、增殖失控中的关键作用；此外，利用 NALM-6 研究 IGH 基因重排对细胞功能的影响，发现异常重排的 IGH 基因可通过激活 NF-κB 信号通路，促进细胞因子（如 IL-6）分泌，加剧炎症微环境形成，为挖掘 B 淋巴白血病微环境调控靶点提供实验依据。同时，NALM-6 也常用于 B 淋巴白血病细胞分化机制研究，通过特定诱导剂处理细胞，观察 CD10、CD20 等标志物表达变化，探索调控白血病细胞分化的信号通路（如 Notch 通路）。

NALM-6 因增殖速率适中、分子背景明确，广泛应用于 B 淋巴白血病治疗药物、靶向药物的筛选与活性验证。在药物筛选实验中，可通过 CCK-8 法、MTT 法检测候选药物对细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物活性；对于靶向 B 细胞表面标志物的药物（如 CD20 单克隆抗体），可通过流式细胞术检测药物与细胞的结合能力，结合细胞毒性实验（如 LDH 释放实验）验证其杀伤效果；针对信号通路的靶向药物（如 PI3K 抑制剂），则可通过 Western blot 检测下游分子（如 p-AKT）的磷酸化水平变化，确认药物对靶点通路的抑制作用。此外，通过建立 NALM-6 裸鼠异种移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、小鼠生存期延长情况），为药物临床转化提供关键的体内外数据支持，尤其在儿童 B 淋巴白血病新药研发中应用广泛。

NALM-6 是 B 淋巴白血病特异性细胞治疗研究的重要工具，尤其适用于嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）、双特异性抗体等疗法的机制探索与方案优化。在 CAR-T 细胞研究中，可将 NALM-6 作为靶细胞，检测 CD19-CAR-T、CD22-CAR-T 细胞对其的杀伤效率（如流式细胞术检测凋亡率），分析 CAR-T 细胞的活化标志物（CD69、CD137）表达及细胞因子（IFN-γ、IL-2）分泌情况，优化 CAR 结构设计与培养方案；在双特异性抗体研究中，可通过体外共培养实验，验证抗体介导 T 细胞对 NALM-6 的特异性杀伤作用，评估抗体的效价与安全性。此外，NALM-6 也常用于检查点抑制剂研究，通过检测细胞表面 PD-L1 的表达水平，结合免疫细胞共培养实验，探索 “检查点抑制剂 + 其他治疗手段" 联合应用的协同效果，为临床治疗方案制定提供参考。

三、细胞培养关键要点

NALM-6 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞快速增殖与分子特征稳定的需求；需添加 10%-15% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与细胞因子（如 IL-7、IL-15）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌制剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响 B 细胞标志物表达与增殖活性。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持 B 细胞相关信号通路的正常功能；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需每天观察细胞状态，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布，避免细胞沉降导致局部密度过高、营养不足，同时防止细胞聚团（若出现少量聚团，可通过轻柔吹打分散）。

当细胞密度达到 1×10⁶-2×10⁶个 /mL 时进行传代：将培养瓶中的细胞悬液轻轻吹打均匀，按 1:3-1:5 的比例转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养（悬浮细胞无需消化，直接分装即可）。

冻存时需选用对数生长期且活力良好的细胞（活率≥90%），采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养瓶中，复苏后 24 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项