NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞，贴壁生长，无 EGFR/KRAS 等常见驱动突变，生物学稳定，是该类肺癌基础研究与药物筛选的重要实验模型。​

NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞是由美国国家癌症研究所（NCI）分离建立的经典人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系，源自一名晚期非小细胞肺癌患者的肿瘤组织。其核心特点是不携带表皮生长因子受体（EGFR）、 Kirsten 大鼠肉瘤病毒癌基因同源物（KRAS）等非小细胞肺癌常见驱动突变，生物学特性稳定且与临床 “无驱动突变型" 非小细胞肺癌高度契合，成为全球该亚型肺癌基础研究、药物研发及耐药机制探索的核心实验模型，为破解无靶点非小细胞肺癌治疗难题提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的非小细胞肺癌细胞系，NCI-H1299 具备非小细胞肺癌的标志性病理表型，可稳定表达非小细胞肺癌广谱标志物，如细胞角蛋白 5/6（CK5/6）、细胞角蛋白 18（CK18），但不表达甲状腺转录因子 1（TTF-1），与临床中部分肺鳞癌或大细胞肺癌亚型的病理特征相似。在倒置显微镜下观察，细胞呈梭形或多边形，细胞质边界清晰，细胞核大而致密，核仁不明显，核质比显著高于正常肺上皮细胞；生长方式为典型贴壁生长，细胞排列松散却紧密附着于培养皿表面，传代时需通过消化处理使细胞脱离基质，分散成单细胞悬液以维持良好生长状态，避免细胞聚团影响实验重复性。

NCI-H1299 zui显著的分子特征是无 EGFR、KRAS 等非小细胞肺癌常见驱动突变，同时也不携带间变性淋巴瘤激酶（ALK）、ROS1、RET 等融合基因，属于临床中典型的 “无驱动突变型" 非小细胞肺癌模型。此外，该细胞系存在p53 基因纯合缺失—— 这一分子改变会导致细胞凋亡调控机制wan全紊乱，使细胞失去对 DNA 损伤的修复与凋亡启动能力，进而表现出更强的增殖活性与抗损伤能力。同时，NCI-H1299 还存在端粒酶活性异常升高，可维持染色体端粒长度，支持细胞无限增殖，进一步模拟了临床非小细胞肺癌的恶性生物学特征。

在标准培养条件下，NCI-H1299 的种群倍增时间约为 40-50 小时，增殖速率较快，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 70%-80% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，且无驱动突变相关信号通路的干扰，是开展药物敏感性检测、基因编辑、信号通路筛选等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 85%），易出现营养竞争加剧、代谢废物堆积，导致部分细胞凋亡或形态变形（如细胞拉长、细胞质颗粒增多），因此需及时传代（建议每 1-2 天传代一次）以维持细胞的生物学特性稳定。

二、主要研究应用场景

依托 “无常见驱动突变" 的独特属性，NCI-H1299 成为解析无靶点非小细胞肺癌恶性生物学行为机制的理想模型。例如，通过 CRISPR/Cas9 技术在该细胞中恢复 p53 基因表达，可观察到细胞增殖速率显著减缓、细胞周期阻滞于 G2/M 期，且凋亡率明显升高，进而明确 p53 缺失在无驱动突变型非小细胞肺癌无限增殖中的核心作用；此外，利用该细胞系研究端粒酶活性调控机制，可揭示其维持细胞永生化的分子路径 —— 如检测不同处理条件下端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达变化，探索抑制端粒酶活性对细胞增殖的影响，为挖掘无靶点非小细胞肺癌的潜在治疗靶点（如 hTERT 抑制剂）提供实验依据。同时，NCI-H1299 也常用于非小细胞肺癌转移机制研究，通过 Transwell 实验观察细胞侵袭能力，结合基因表达分析，筛选调控肿瘤转移的关键基因（如基质金属蛋白酶 MMP9）。

由于不携带特定驱动突变，NCI-H1299 广泛应用于非小细胞肺癌广谱抗肿瘤药物（如hua疗药物、免yi治疗药物）的筛选与活性验证。在药物筛选实验中，可通过 MTT 法、CCK-8 法检测候选药物对该细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物对无驱动突变型非小细胞肺癌的活性；对于免yi治疗相关研究，可通过检测药物处理后细胞表面 PD-L1 的表达变化，或联合免疫细胞（如 T 细胞）共培养实验，评估药物的免疫调节作用；此外，通过建立 NCI-H1299 裸鼠移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、小鼠生存期延长情况），为药物临床转化提供关键的体内外数据支持。例如，在新型hua疗增敏剂的研发中，NCI-H1299 常被用于验证药物对非小细胞肺癌的协同抑制效果。

NCI-H1299 也是研究无驱动突变型非小细胞肺癌耐药机制的重要载体。通过逐步提高药物浓度（如临床常用的铂类药物、抗微管类药物）诱导该细胞系建立耐药细胞株（如 NCI-H1299/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达谱（如 RNA 测序）、蛋白水平变化（如 Western blot），可挖掘耐药相关分子。研究发现，耐药株中常出现 ABC 转运蛋白（如 ABCB1、ABCG2）高表达、DNA 损伤修复基因（如 ERCC1、BRCA1）激活或上皮 - 间质转化（EMT）相关标志物（如 N - 钙粘蛋白、Snail）上调 ——ABC 转运蛋白可将细胞内药物泵出体外，降低胞内药物浓度；DNA 损伤修复基因激活可增强细胞对药物诱导损伤的修复能力；EMT 则可提升细胞的侵袭性与耐药性。针对这些机制，可筛选相应的抑制剂（如 ABC 转运蛋白抑制剂、DNA 损伤修复抑制剂），并在 NCI-H1299 模型中验证其逆转耐药的效果，为临床无驱动突变型非小细胞肺癌耐药患者的治疗提供新策略。

三、细胞培养关键要点

NCI-H1299 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞快速增殖的需求；需添加 10% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与生长因子（如 EGF、IGF）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌制剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响细胞增殖速率。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持端粒酶的活性与细胞的快速增殖；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需定期检查培养箱参数，确保温度、CO₂浓度与湿度稳定，尤其避免 CO₂浓度波动过大导致细胞形态异常或增殖速率下降。

当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物，避免影响后续消化效果；随后加入适量细胞消化液，37℃孵育 1-2 分钟（因细胞贴壁程度中等，消化时间不宜过长），在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化（血清可中和消化液活性）；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；最后按 1:4-1:6 的比例将细胞接种到新的培养皿中（因细胞增殖速率较快，传代比例可适当提高），加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期的细胞（此时细胞活力高、分子特征稳定），采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 24 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项