NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞，贴壁生长，携 EGFR 外显子 19 缺失突变，生物学稳定，是该类肺癌机制研究与靶向药物筛选的常用模型。​

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞是由美国国家癌症研究所（NCI）分离建立的经典人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系，源自一名晚期非小细胞肺癌患者的肿瘤组织。因稳定携带表皮生长因子受体（EGFR）外显子 19 缺失突变，且高度契合临床非小细胞肺癌的病理特征与分子背景，成为全球非小细胞肺癌领域研究靶向治疗、发病机制及耐药问题的核心实验模型，为破解临床治疗困境提供了关键支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的非小细胞肺癌细胞系，NCI-H1650 具备非小细胞肺癌的标志性病理表型，可稳定表达非小细胞肺癌特异性标志物，如细胞角蛋白 7（CK7）、甲状腺转录因子 1（TTF-1），与临床 EGFR 突变型非小细胞肺癌患者的肿瘤组织高度吻合。在倒置显微镜下，细胞呈多边形或上皮样形态，细胞质丰富且边界清晰，细胞核大而饱满，核仁明显，核质比显著高于正常肺上皮细胞；生长方式为典型贴壁生长，细胞紧密附着于培养皿表面，呈 “铺路石" 样均匀排列，传代时需通过消化处理使细胞脱离基质，分散成单细胞悬液以维持良好生长状态。

NCI-H1650 最核心的分子特征是EGFR 外显子 19 缺失突变—— 该突变会导致 EGFR 蛋白结构改变，使 EGFR 信号通路持续激活，驱动细胞异常增殖，是临床非小细胞肺癌患者中最常见的 EGFR 敏感突变类型之一，也是该细胞系适用于靶向药物研究的关键依据。此外，该细胞系还存在 TP53 基因突变，进一步破坏细胞凋亡调控机制，加剧肿瘤细胞的恶性程度，使其具备更强的增殖能力与抗凋亡特性。同时，NCI-H1650 不携带间变性淋巴瘤激酶（ALK）、ROS1、RET 等非小细胞肺癌常见融合基因，确保了其作为 EGFR 突变型非小细胞肺癌模型的特异性，避免实验结果受其他分子异常干扰。

在标准培养条件下，NCI-H1650 的种群倍增时间约为 45-55 小时，增殖速率适中，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 80%-90% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、增殖活跃，且 EGFR 信号通路活性稳定，是开展药物敏感性检测、基因编辑、信号通路分析等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 95%），易出现接触抑制，导致部分细胞凋亡或 EGFR 信号通路活性异常（如磷酸化 EGFR 表达水平波动），因此需及时传代以维持细胞的生物学特性稳定。

二、主要研究应用场景

依托与临床非小细胞肺癌的分子同源性，NCI-H1650 成为解析非小细胞肺癌恶性生物学行为机制的理想工具。例如，通过 RNA 干扰技术下调该细胞中 EGFR 基因的表达，可观察到细胞增殖速率显著减缓、迁移侵袭能力下降，进而明确 EGFR 信号通路在非小细胞肺癌细胞生长、转移中的核心调控作用；此外，利用该细胞系研究 TP53 基因突变对细胞周期的影响，可揭示非小细胞肺癌细胞逃避 G1/S 期检查点、实现无限增殖的分子机制，为挖掘潜在治疗靶点（如细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂）提供实验依据。同时，NCI-H1650 也常用于非小细胞肺癌上皮 - 间质转化（EMT）机制研究，通过检测不同处理条件下 E - 钙粘蛋白、N - 钙粘蛋白等 EMT 标志物的表达变化，探索调控肿瘤转移的关键信号通路（如 PI3K/AKT、MAPK 通路）。

凭借 EGFR 外显子 19 缺失突变特征，NCI-H1650 成为非小细胞肺癌 EGFR 靶向药物研发的核心筛选模型。在药物研发早期，可通过 MTT 法、CCK-8 法检测候选药物对该细胞增殖的抑制效果，计算半数抑制浓度（IC50），初步评估药物对 EGFR 敏感突变型非小细胞肺癌的活性；对于进入临床前研究的药物，还可通过 Western blot 检测药物对 EGFR 及其下游信号分子（如 p-EGFR、p-AKT、p-ERK）磷酸化水平的影响，验证药物对靶点通路的特异性抑制作用；此外，通过建立 NCI-H1650 裸鼠移植瘤模型，可在体内验证药物的抗肿瘤效果（如肿瘤体积缩小率、小鼠生存期延长情况），为药物临床转化提供关键的体内外数据支持。例如，临床常用的第一代 EGFR 靶向药物吉非ti尼、厄洛替尼，其早期研发阶段便以 NCI-H1650 为重要模型，验证了对 EGFR 外显子 19 缺失突变型非小细胞肺癌的治疗活性。

NCI-H1650 也是研究非小细胞肺癌靶向治疗耐药机制的重要载体。通过逐步提高 EGFR 靶向药物浓度，可诱导该细胞系建立耐药细胞株（如 NCI-H1650/DR），对比敏感株与耐药株的基因表达谱（如 RNA 测序）、蛋白水平变化（如 Western blot），可挖掘耐药相关分子。研究发现，耐药株中常出现 EGFR T790M 二次突变、MET 基因扩增或 ABC 转运蛋白（如 ABCB1）高表达等耐药机制 ——T790M 突变可改变 EGFR 蛋白的 ATP 结合口袋结构，降低药物结合能力；MET 扩增可激活替代信号通路，绕过 EGFR 驱动细胞增殖；ABC 转运蛋白则能将细胞内药物泵出体外，降低胞内药物浓度。针对这些机制筛选抑制剂（如 T790M 抑制剂奥希替尼、MET 抑制剂克唑替尼），可有效逆转耐药，为临床耐药患者的治疗提供新策略。

三、细胞培养关键要点

NCI-H1650 常规使用 RPMI-1640 培养基进行培养，该培养基营养成分均衡，可满足细胞生长与分子特征稳定的需求；需添加 10% 胎牛血清（FBS，需经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体成分对细胞的潜在损伤），为细胞提供生长所需的营养物质与生长因子（如 EGF、IGF）；为预防细菌污染，可加入适量抗菌试剂。培养基的 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前需在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激导致细胞应激损伤，影响 EGFR 信号通路活性。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持 EGFR 及其下游信号分子的正常功能；5% CO₂可通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定，避免 pH 异常影响细胞生长；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变导致细胞脱水或肿胀。培养过程中需定期检查培养箱参数，确保温度、CO₂浓度与湿度稳定，尤其避免 CO₂浓度波动过大导致细胞形态异常或增殖速率下降。

当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物，避免影响后续消化效果；随后加入适量消化液，37℃孵育 1-2 分钟，在显微镜下密切观察细胞形态变化，待细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化（血清可中和消化液活性）；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；最后按 1:3-1:5 的比例将细胞接种到新的培养皿中，加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期的细胞（此时细胞活力高、分子特征稳定），采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与分子特征）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟，避免细胞长时间处于低温环境）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞有一定毒性）；弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 24 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，提高存活率。

四、实验使用注意事项