NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞 源自人肾上腺腺瘤组织，具激素分泌相关特性，贴壁生长，生物学稳定，是肾上腺腺瘤发病机制研究与相关药物筛选的常用实验模型。

NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞

NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞 是由美国国家癌症研究所（NCI）分离建立的人肾上腺腺瘤细胞系，源自一名肾上腺腺瘤患者的肿瘤组织。因能稳定模拟临床肾上腺腺瘤的病理特征与激素分泌功能，且生物学特性可控，成为全球肾上腺腺瘤基础研究、激素调控机制探索及相关药物研发领域的核心实验模型，为破解肾上腺腺瘤的发病机制与治疗难题提供了重要支撑。

一、核心生物学特性

作为典型的肾上腺腺瘤细胞系，NCI-H205 具备肾上腺皮质细胞的形态特征，可表达肾上腺皮质特异性标志物（如 CYP11B1、CYP17A1，分别参与皮zhi醇与性激素合成），与临床肾上腺腺瘤组织的细胞表型高度吻合。在倒置显微镜下观察，细胞呈多边形或上皮样形态，细胞质丰富且呈淡嗜酸性，细胞核圆形或椭圆形，核仁清晰，核质比适中；生长方式为典型贴壁生长，细胞紧密附着于培养皿表面，呈 “铺路石" 样均匀排列，传代时需通过消化处理使细胞脱离基质，分散成单细胞悬液。

NCI-H205 携带肾上腺腺瘤相关的分子改变，其中最关键的是cAMP 信号通路异常激活—— 这一通路调控肾上腺皮质激素合成，其异常激活可导致细胞过度增殖并伴随激素分泌异常，与临床功能性肾上腺腺瘤（如皮zhi醇增多症腺瘤）的发病机制高度一致。此外，部分细胞株存在 PRKAR1A 基因突变（该基因是 cAMP 通路的负调控因子），进一步印证了其作为肾上腺腺瘤模型的特异性。功能上，NCI-H205 可稳定分泌肾上腺皮质激素（如皮zhi醇、脱氢表雄酮），且激素分泌水平受促肾上腺皮质激素（ACTH）调控，与正常肾上腺皮质细胞的功能特性相似，为研究激素分泌调控机制提供了理想工具。

在标准培养条件下，NCI-H205 的种群倍增时间约为 60-72 小时，增殖速率相对平缓，细胞活力稳定（常规培养时活率可达 85%-90%）。当细胞融合度达到 75%-85% 时进入对数生长期，此时细胞形态均一、代谢活跃，是开展激素分泌检测、药物处理、基因编辑等实验的最佳时期；若细胞融合度过高（超过 90%），易出现接触抑制，导致部分细胞凋亡或激素分泌功能下降，因此需及时传代以维持细胞的生长状态与功能稳定性。

二、主要研究应用场景

依托与临床肾上腺腺瘤的分子与功能同源性，NCI-H205 成为解析腺瘤发病机制的核心模型。例如，通过 RNA 干扰技术下调该细胞中异常激活的 cAMP 通路关键分子（如 PKA 催化亚基），可观察到细胞增殖速率减缓、皮zhi醇分泌水平降低，进而明确 cAMP 通路过度激活在腺瘤发生发展中的驱动作用；此外，利用该细胞系研究 PRKAR1A 基因突变对细胞周期的影响，可揭示基因突变导致细胞增殖失控的分子机制，为挖掘肾上腺腺瘤的潜在治疗靶点（如 cAMP 通路抑制剂）提供实验依据。同时，NCI-H205 也常用于肾上腺腺瘤激素分泌调控机制研究，通过检测 ACTH、糖皮质激素等信号对细胞激素分泌的影响，探索激素反馈调节通路的异常机制。

作为体外研究肾上腺激素调控的经典模型，NCI-H205 广泛应用于肾上腺腺瘤相关药物的筛选与活性验证，尤其适用于功能性肾上腺腺瘤（如库欣综合征、原发性醛固酮增多症）的治疗药物研发。在药物筛选实验中，可通过酶联免疫法（ELISA）检测候选药物对细胞皮zhi醇、醛固酮等激素分泌的抑制效果，结合 MTT 法评估药物对细胞增殖的影响，综合判断药物的治疗潜力；对于已进入临床前研究的药物，还可利用该细胞系检测药物对 cAMP 通路、激素合成关键酶（如 CYP11B2）的调控作用，为药物临床转化提供关键数据。此外，NCI-H205 也可用于药物联合治疗方案优化，如将 cAMP 通路抑制剂与激素受体拮抗剂组合，观察协同抑制激素分泌与细胞增殖的效果，为临床联合用药提供参考。

NCI-H205 的激素分泌功能为研究肾上腺腺瘤的功能调控提供了独特工具。例如，通过基因过表达技术增强细胞中糖皮质激素受体（GR）的表达，可观察到细胞对糖皮质激素的负反馈调节敏感性提升，皮zhi醇分泌水平下降，进而探索改善激素反馈调节紊乱的策略；此外，利用该细胞系研究缺氧、炎症因子等微环境因素对肾上腺腺瘤细胞功能的影响，可揭示微环境在腺瘤进展与功能异常中的作用，为制定综he治疗方案提供新思路。

三、细胞培养关键要点

NCI-H205 常规使用 DMEM/F12 混合培养基（1:1 比例）培养，该培养基营养成分丰富，可满足细胞生长与激素分泌功能的需求；需添加 10% 胎牛血清（FBS，经 56℃热灭活 30 分钟，去除补体对细胞功能的干扰），同时加入 1% 胰岛素 - 转铁蛋白 - 硒（ITS）补充剂，以维持细胞的激素分泌功能；为预防污染，可加入适量抗菌试剂。培养基 pH 值需严格控制在 7.2-7.4 之间，使用前在 37℃水浴锅中预热至室温，避免低温刺激影响细胞活性与激素分泌。

细胞需置于 37℃、5% CO₂、湿度 95% 以上的恒温培养箱中培养：37℃为细胞代谢与酶活性的最适温度，可维持激素合成相关酶（如 CYP450 家族酶）的活性；5% CO₂通过调节培养基中碳酸氢盐的平衡，维持 pH 值稳定；95% 以上的湿度可防止培养基过度蒸发，避免渗透压改变影响细胞功能。培养过程中需定期检查培养箱参数，确保环境稳定，尤其避免 CO₂浓度波动导致细胞激素分泌异常。

当细胞融合度达到 75%-85% 时进行传代：首先用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 2 次，去除残留血清与代谢废物；随后加入适量消化液，37℃孵育 2-3 分钟（因细胞贴壁较牢固，消化时间略长于其他肿瘤细胞），在显微镜下观察到细胞边缘收缩、变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化；用移液器轻柔吹打细胞，避免用力过猛损伤细胞，制成单细胞悬液；最后按 1:2-1:3 的比例将细胞接种到新的培养皿中（因细胞增殖速率较慢，传代比例不宜过高），加入新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

冻存时需选用对数生长期且激素分泌功能正常的细胞，采用 90% FBS+10% DMSO 的混合液作为冻存液（DMSO 可降低细胞内冰晶形成，减少冻存损伤）；将细胞悬液与冻存液按 1:1 比例混合均匀，分装至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期与代次；冻存过程需遵循梯度降温原则：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮中长期保存（液氮温度为 - 196℃，可长期维持细胞活性与功能）。复苏时，将冻存管从液氮中取出，快速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇晃至液体wan全融化（时间不超过 1 分钟）；随后将细胞悬液转移至离心管中，加入 5 倍体积的预热培养基，1000rpm 离心 5 分钟，去除 DMSO（DMSO 对细胞功能有一定影响）；弃去上清液，用含 ITS 补充剂的新鲜培养基重悬细胞后接种到培养皿中，复苏后 48 小时内避免换液，让细胞充分适应环境，恢复生长与激素分泌功能。

四、实验使用注意事项